3 на 5 точка ру: Weather for 243 countries of the world

Телеканал ТВ-3. Официальный сайт

Прямой эфир Смотри на сайте Кинохиты

Ограбление в ураган

На глазах у малолетних Уилла и Бриза Ратледж во время урагана гибнет их отец. Смерть родителя по-разному повлияла на братьев: Уилл стал метеорологом, а Бриз решил, что лучшее в жизни – это выпивка, девочки и поддельная работа. Тем временем на Алабаму вновь надвигается ураган. Этим и собираются воспользоваться бандиты…

Смотреть бесплатно

Больше кинохитов:

фильм 12:03

Она

Будущее. Искуственный интеллект стал заменять реальное общение. Теодор Туомбли (Хоакин Феникс), одинокий писатель, покупает совершенную операционную систему по имени Саманта.

Между ними возникает глубокая эмоциональная связь. Но что на самом деле стоит за этим?

Новые серии

Вернувшиеся

3-го февраля 2022 года 15-летняя Эя Журавлева вышла утром на пробежку по гористой местности. Через час она перестала отвечать на звонки… / В сентябре 2018 года в Свердловской области 46-летний Роман Скурихин пошел с женой за грибами в лес и таинственным образом исчез…

Смотреть бесплатно

Больше новых серий:

серия 22:08

Женская доля 37 серия

Свити замышляет насолить Сурешу и сорвать свадьбу. Бульбуль пришла в ночи к Сурешу выяснить правду. Суреш признается, что не любит Прагью, а она все слышит.

На страницу проекта серия 22:11

Женская доля 36 серия

Пураб признается Алие, что любит другую. Но Алия не принимает его выбор. Свити продолжает плести интриги и рассказывает Бульбуль, что Суреш любит не Прагью, а ее. Абхи соглашается на женитьбу ради бабушки.

На страницу проекта серия 48:00

Вернувшиеся 4 сезон, 1 серия

В Нижнем Новгороде 17 мая 2021 года мама отпустила 6-летнего Артема погулять на детской площадке рядом с домом. Площадка находится прямо возле здания МЧС, недалеко от полицейского участка, поэтому дети в том районе часто гуляют одни, родители думали, что это безопасно. До тех пор, пока оттуда не пропал Артем.

На страницу проекта серия 23:38

Знаки судьбы Добрый дом

После смерти любимой бабушки Алина забирает к себе ее собаку. Но муж Алины против животных в доме. Девушка пристраивает питомца в приют для животных и начинает работать там волонтером. Она даже не догадывается, что этот поступок изменит ее жизнь.

На страницу проекта серия 40:00

Второе зрение 2 7 серия

В планах Ефремова спровоцировать братьев Нестеровых, чтобы получить от них признание. А пока готовится провокация, у Ефремова есть время раскрыть преступление, полагаясь только на собственный слух и чутье сыщика.

На страницу проекта серия 40:00

Второе зрение 2 6 серия

Пока отдел расследует убийство пары подростков в Подмосковье, Ефремов выходит на след братьев Нестеровых — опасных и влиятельных преступников, которые могут быть причастны к убийству Ксюши. Ефремов преодолеет все препятствия, чтобы подобраться к кровным врагам. Но сначала нужно убедиться в собственной правоте.

На страницу проекта серия 49:07

Второе зрение 2 5 серия

Ефремов просит Риту прикрыть его перед начальством в раскрытии очередного преступления, чтобы он мог продвинуться в своем расследовании убийства Ксюши. Но у самой Риты есть темные пятна в прошлом, которое не отпускает ее, и Рита попадает в неприятности. Только Ефремов может ей помочь.

На страницу проекта серия 47:08

Второе зрение 2 4 серия

Загадочные убийства в номерах отеля кажутся диким совпадением. Но проницательный Ефремов видит скрытые взаимосвязи и выводит убийцу на чистую воду. Тем временем вокруг Ефремова сгущаются тучи в отделе…

На страницу проекта серия 52:16

Вернувшиеся из рабства Спецвыпуск

Самая шокирующая премьера сезона! Олимпиада Пилясова вышла замуж за жителя Азербайджана, уехала в Баку вместе с сыном — 5 лет 7 месяцев в рабстве.

Александр Лепеничев, 47 лет, бизнесмен-издатель, 2 октября 2014 года выпил кофе со случайным знакомым — 3 года в рабстве. Попасть туда просто, вырваться почти невозможно…

На страницу проекта серия 51:39

Самые загадочные происшествия 4 серия. Крушение «Адмирала Нахимова»

История крушения теплохода в 1986 году и проклятие имени самого адмирала и Цемесской бухты, которую также называют российским Бермудским треугольником.

На страницу проекта серия 45:20

Второе зрение 2 3 серия

В бассейне найдена утопленница, и для большинства причины гибели очевидны. Только слепой Ефремов видит больше, чем все остальные. Параллельно он находит убийцу и ведет свое расследование деятельности Лендова.

На страницу проекта серия 50:37

Самые загадочные происшествия 3 серия. Выжившие в авиакатастрофах

История Ларисы Савицкой, которая в 1981 году упала на обломке самолета с высоты 5 километров и выжила — не единичный случай. Что это, судьба, случайность, провидение, чудо?

На страницу проекта серия 48:40

Второе зрение 2 2 серия

Ефремов одержим желанием разобраться в убийстве Ксюши. И его новая напарница Рита готова стать его руками и глазами в этом деле. А пока что Ефремову нужно понять — кто и зачем хотел убить Ксюшу? И какова роль в её убийстве бизнесмена Лендова…

На страницу проекта серия 50:47

Самые загадочные происшествия 1 серия. По мотивам Перевала Дятлова

Истории пропавших туристических групп СССР, менее известные, чем трагедия Дятлова, но очень похожие и не менее загадочные, связанные с проклятиями шаманов, северными и горными духами.

На страницу проекта серия 47:11

Самые загадочные происшествия 2 серия. Метеориты

Истории, связанные с упавшими метеоритами на территории России (от Тунгусского до Челябинского) и последовавшими за этим событиями. Мистика, НЛО, неразгаданные загадки метеоритов…

На страницу проекта серия 46:09

Второе зрение 2 1 серия

После событий первого сезона Ефремов впал в глубокую депрессию и пропал. Расследуя загадочное дело о пожаре с убийством работника подпольного казино, сотрудники отдела Джема находят Ефремова в компании подозреваемого. И, судя по всему, Ефремов ведет двойную игру.

На страницу проекта серия 58:12

Пророчество 2022 — что дальше?

24 июня 2022 семь планет Солнечной системы выстроились в ряд на небе. По предварительным прогнозам такой парад планет произойдет еще в 2040 и 2854 годах. Энергия такого явления всегда приносит мощные повороты в мировых событиях, влияет на судьбы человечества, политику, экономику и даже природу. Что же будет дальше?

серия 24:00

Уиджи 32 серия. Последнее извинение

Павел Кречетов вышел из тюрьмы, отсидев одиннадцать лет. Жена была очень рада его возвращению, но сыну он казался чужим. Павел твердо решил вернуться к нормальной жизни и обеспечить своей семье безбедное существование. Для этого он связывается с духом своего умершего напарника…

На страницу проекта серия 24:00

Уиджи 31 серия. Тюрьма

У бизнесмена Игоря пропадает 15-летняя дочь, которой он запрещал общаться с парнем из бедной семьи. Вскоре находят труп парня. Пытаясь найти дочь, Игорь просит помощи у духа, но тот специально сбивает Игоря со следа. Дочь Игоря находится на грани жизни и смерти, счет идет на часы…

На страницу проекта серия 24:00

Уиджи 30 серия. Невиновная

Риту посадили в тюрьму на шесть лет за убийство мужа. После освобождения девушка пришла к спириту, чтобы поговорить с покойным. Рита уверяла, что не убивала его, хотя все улики говорили об обратном. Чтобы обелить свое имя, Рита решила найти настоящего убийцу, но это оказалось непросто.

На страницу проекта серия 23:54

Всё в твоих руках 28 серия. Опасная интрижка

Лариса расстается с наскучившим ей любовником, после чего понимает, что он неуравновешенный тип с наклонностями маньяка. Оскорбленный любовник начинает манипулировать Ларисой, угрожая разрушить её семью.

На страницу проекта серия 23:57

Всё в твоих руках 27 серия. Последняя обида

Олеся Малинина с детства терпеть не могла сестру Светлану. И родители любили младшую больше, и жениха Олеси Светлана увела прямо на свадьбе… Ради заболевшей матери сестры примирились и стали работать вместе, но Олеся затаила обиду…

На страницу проекта серия 23:32

Всё в твоих руках 26 серия. Разные дети

Муж Светланы Кротовой, Иван, погиб в пожаре, а 15-летний пасынок Тимофей сильно пострадал. Светлана долго выхаживала Тимофея и боролась за деньги мужа с его инвесторами. Через три года все проблемы решились, но неожиданно в доме Кротовых появилась девушка и назвалась дочерью погибшего Ивана…

На страницу проекта серия 23:51

Всё в твоих руках 25 серия. Чей-то сын

Лизу и Никиту Комковых растили состоятельные и очень строгие родители. Лиза не решалась представить родителям своего жениха — он был на 15 лет старше нее и небогат. Но однажды произошла трагедия: Комковых-старших убили. Рядом с трупами родителей Лиза нашла перчатку жениха… Неужели убийца — он?

На страницу проекта серия 23:33

Всё в твоих руках 24 серия. Последний ужин

В детском саду, где Полина Ушакова работала заведующей, произошла трагедия – умер один из воспитанников. Мать погибшего мальчика винила во всем Полину и мечтала ей отомстить. Только новый физрук, Родион, понимал Полину и помог ей успокоиться. Между ними начался роман. Но Родион не случайно появился в жизни Полины…

На страницу проекта серия 23:49

Всё в твоих руках 23 серия. Больная любовь

Наталья Козакова приехала в Красноярск из глухого райцентра. Ей не везло с работой, пока она не устроилась продавщицей в цветочный магазин. Вскоре хозяин магазина, Виктор Степанов, предложил ей выйти за него. Наталья согласилась, еще не зная, к чему это приведет…

На страницу проекта серия 23:01

Всё в твоих руках 22 серия. Виражи и миражи

Мария Ивановна Хромцева обожала свою дочь Юлию. В результате Юлия выросла отъявленной эгоисткой. Отец Юлии отселил дочь в съемную халупу, устроил в местный вуз и пересадил на отечественную малолитражку. Мария Ивановна жалела дочь — привозила ей еду, деньги, предупреждала о визитах отца. Юлия вроде бы исправилась, но вскоре позвонила матери в панике…

На страницу проекта серия 23:50

Всё в твоих руках 21 серия. Заботливый отец

Дмитрий Шпагин, состоятельный чиновник, оставшись вдовцом, сам воспитывал дочь Ирину. Однако вместо любящей послушной дочери он получил неуправляемую фурию. Однажды ночью, разыскивая дочь, Шпагин в темноте сбил старушку и скрылся. Оказалось, что погибшая женщина — мать местного криминального авторитета. ..

На страницу проекта серия 30:00

Всё в твоих руках 19 серия. Ножницы

Выпускница швейного колледжа Лариса Полухина мечтала о выгодном браке. И кандидат был подходящий – бизнесмен Василий Еремин. Но Еремину больше нравилась подруга Ларисы, Катя… Лариса решила избавиться от соперницы – и ей помог трагический случай. Взглянув на ладонь Ларисы, Хиромант объяснит, как, пытаясь обмануть судьбу, девушка перехитрила саму себя.

На страницу проекта серия 30:00

Всё в твоих руках 20 серия. Другая семья

Борис Носов вышел в отставку и вместе с семьей поселился в Рязани. Носов стал консультантом в бизнес-холдинге. Его жена вела домашнее хозяйство, а 19-летняя дочь Инга училась. Вместе с достатком появились и проблемы: Носов не пропускал ни одной юбки. Он был щедр к любовницам, зато экономил на семье. Предприимчивая Инга стала знакомить отца со своими подругами, а те делились с ней деньгами Носова… И вскоре это привело к трагедии.

На страницу проекта серия 30:00

Всё в твоих руках 18 серия. Специалист в своем деле

Жена Алексея была найдена убитой в собственной квартире. Полиция склонилась к версии убийства при ограблении. Алексей остался один с маленькой дочкой на руках. Алексей решает стать преступником для того, чтобы отомстить за смерть жены.

На страницу проекта выпуск 05:00

Московские тайны Петра I Волшебные часы

История о волшебных часах, созданных Брюсом, спором Петра и его чиновника, тайне Брюсова дома и проклятии.

выпуск 05:00

Московские тайны Петра I Колдун

История дружбы Петра первого и Якова Брюса, история утраченных сокровищ Брюса, связи сноса Сухаревской башни с поиском тайной книги и строительством кольцевой линии метрополитена.

выпуск 05:00

Московские тайны Петра I Двойник

История о «подмене» Петра первого в результате заговоров европейских элит, «железной маске», ее связи с Петром, а также о возможном потомке – Наполеоне Бонапарте.

выпуск 05:00

Московские тайны Петра I Масоны

История о связи Петра с шотландскими масонами, Ньютоном и о создании первого масонского общества в Сухаревой башне.

серия 30:00

Всё в твоих руках 17 серия. Гнев матери

Дина Павловна потеряла сына в автокатастрофе. Вскоре она узнает, что жена покойного сына завела мужчину, собирается уйти к нему и разлучить Дину Павловну с единственной внучкой, Женечкой. Чтобы не допустить этого, Дина Павловна решает убить новоявленного ухажера невестки.

На страницу проекта серия 30:00

Всё в твоих руках 16 серия. Тотальный контроль

Олег Сергеенко, фитнес-тренер, безумно влюбился в аспирантку филфака Юлию Дмитриеву. Он был готов на все для любимой – разобраться с навязчивым поклонником, поучить вежливости ее жениха… К чему приведет такая любовь, а вернее, одержимость? Хиромант даст ответ, прочитав будущее на ладони парня, ведь судьба написана на руке с рождения…

На страницу проекта серия 30:00

Всё в твоих руках 15 серия. Вернуть жизнь

Алексей Зиновьев защитил жену Дашу от грабителя – и оказался в тюрьме за превышение пределов необходимой обороны. Даша убедила Алексея развестись и отказаться от родительских прав на дочь. Это было сделано, чтобы Даша получила статус матери-одиночки, а дочь Зиновьевых поступила в интернат для одаренных детей-льготников. Выйдя на свободу, Алексей понял, что потерял семью, квартиру, место в жизни… Он решил вернуть все. Получится ли у Алексея?

На страницу проекта серия 23:05

Всё в твоих руках 14 серия. Взаимная услуга

Игорь Стрельников мечтал отомстить отчиму, который приставал к его младшей сестре, Алисе. Сам Игорь влюбился в таинственную Софью, которую не отпускал властный и грубый покровитель. Софья предложила Игорю «идеальное преступление»: Игорь избавит ее от любовника, девушка убьет его отчима… Решится ли Игорь на преступление? Хиромант даст ответ, прочитав будущее на ладони парня. 

На страницу проекта Смотри в эфире

Хороший доктор, Обмани меняТеперь они работают вместе | сегодня с 19:30

Что общего между хорошим доктором и не всегда хорошим доктором Лайтманом? Теперь они работают вместе! Каждый вечер с понедельника по четверг включай и смотри: в 19:30 новые серии сериала «Хороший доктор», а сразу после — «Обмани меня» в 21:15.

Смотреть анонс

Больше анонсов:

анонс 00:35

Выходные исполнения желаний 1 и 2 октября

Киану Ривз, Николас Кейдж и Арнольд Шварценеггер исполнят твое желание. Желание самых крутых блокбастеров на ТВ-3:

Матрица. Сразу 3 части
Терминатор
Пророк
Апгрейд
Репродукция
Воины света

анонс 00:15

Этой осенью ТВ-3 наделяет тебя силой… играть и выигрывать

Этой осенью ТВ-3 наделяет тебя силой играть и выигрывать.

премьера 00:35

Апгрейд 30 сентября 19:30

Логан Маршалл-Грин, Мелани Вальехо, Бетти Гэбриел в фантастическом блокбастере «Апгрейд» в пятницу в 19:30.

премьера 00:35

Дом исполнения желаний. Лучшая версия себя Стендап-комик Алиса Дударева попытает счастья в Албании | воскресенье 11:30

Суперпремьера! Алиса Дударева, стендап-комик, умна, талантлива, красива, но ее жизнь полностью контролируют ее близкие. Сможет ли она все исправить, сбежав от них в Албанию? Смотри в новом выпуске уникального трэвел-шоу «Дом исполнения желаний. Лучшая версия себя» в воскресенье в 11:30.

На страницу проекта премьера 00:35

Вернувшиеся Поход за грибами стал настоящей трагедией… | пятница 14:30

Премьера! Коварство южного леса, растения, которые сводят с ума… Обычный поход за грибами, который превратился в настоящую трагедию. Невероятная история Сергея Белецкого в новом сезоне проекта «Вернувшиеся» в пятницу в 14:30.

На страницу проекта премьера 00:35

Гадалка, Слепая Новые серии любимых проектов | понедельник с 16:45

Как уберечь ребенка от беды, защитить самых близких и вернуть потерянную любовь? Они подскажут, помогут и защитят. Не пропусти новые серии наших любимых проектов: «Гадалка» в 16:45, «Слепая» в 18:30 в понедельник.

премьера 00:35

Дом исполнения желаний. Завтрак в постель Как изгнать призрак бывшей девушки из отношений? | воскресенье 9:30

Суперпремьера! Отношения Геннадия и Натальи — настоящая мистика: их любви мешает призрак его бывшей девушки. Смогут ли они отпустить прошлое и найти счастье за завтраком? Смотри в новом выпуске уникального кулинарного шоу «Дом исполнения желаний. Завтрак в постель» в воскресенье в 9:30.

На страницу проекта анонс 00:35

Хороший доктор Доктор Мерфи должен принять взрослое решение… | сегодня 19:30

Для доктора Мерфи наступает время взрослых решений. Не пропусти новые серии нашего любимого сериала — «Хороший доктор» сегодня в 19:30.

На страницу проекта премьера 00:35

Дом исполнения желаний Новый уникальный формат шоу | воскресенье 9:30 и 11:30

Суперпремьера ТВ-3! Елена Блиновская, популярный блогер и жизненный коуч, приглашает на проект «Дом исполнения желаний» в воскресенье в 9:30 и 11:30.

На страницу проекта Проекты

Дом исполнения желаний с Еленой Блиновскойпремьера воскресенье 9:30 и 11:30

«Дом исполнения желаний с Еленой Блиновской» — новый уникальный телеформат. Каждое воскресенье смотри кулинарно-трансформационное шоу «Завтрак в постель», тревел-шоу «Лучшая версия себя», а также мотивирующие практики и вдохновляющие советы. Все, чтобы настроиться на счастье!

На страницу проекта

Больше проектов:

16+

Знаки судьбыпремьера будни 11:15

16+

Вернувшиесяновый сезон пятница 14:30

16+

Гадалкановый сезон будни 16:45

16+

Слепаяновый сезон будни 18:30

16+

Хороший докторпн-чт 19:30

12+

Обмани меняпн-чт 21:15

16+

Всё в твоих рукахбудни 12:50

16+

Мистические историибудни 11:50

16+

Женская доляпремьера будни 6:00

16+

Вернувшиеся из рабства

События

Смотри фильм бесплатно

Остросюжетный триллер «Ограбление в ураган» смотри бесплатно на нашем сайте прямо сейчас.  

Читать

Больше событий:

Новый сезон проекта «Вернувшиеся»

Как не попасть в рабство в XXI веке?

Стартовали съемки мистической мелодрамы «Дурная кровь»

Премьера «Самые загадочные происшествия»

Объявлены победители хоррор-акселератора

Ляйсан Утяшева станет ведущей нового шоу «Наследники и самозванцы»

Стикерпак «Женская доля»

Афиша – куда сходить в Москве

Афиша – куда сходить в Москве | билеты на Afisha.ru

Сентябрь

Октябрь

Ноябрь

Декабрь

Январь

Февраль

Апрель

Август

Сентябрь

МероприятияФильмы, изменившие мирПодборкиКаталог фильмовОжидаемые премьеры

От 1000 ₽

Творческий вечер «Театр– место силы»

8 октября в 20:00, Модерн

От 1500 ₽

Unesennye na Applique

завтра в 23:00, Gazgolder

От 1800 ₽

Zventa Sventana

22 октября в 19:00, Известия Hall

От 1500 ₽

«Comedy Club. Большой концерт»

29 октября в 19:00, ЦСКА Арена

Купить билеты

Красная шапочка

От 5000 ₽

Денис Мацуев. Классика и джаз

2 октября в 19:00, Кремлевский дворец

Купить билеты

Решение уйти

Специальные предложения

Скидки

 От 2700 ₽

Человек из Подольска

Театр.doc

Драматический

Абсурдистская комедия о том, какой должна быть полиция в идеальном мире

От 2000 ₽

20 ноября в 20:00, Известия Hall

Добрый урбан-поп о повседневном

От 2000 ₽

Театр.doc

Драматический

Доподлинные интимные истории из первых уст

От 5000 ₽

Денис Мацуев. Классика и джаз

2 октября в 19:00, Кремлевский дворец

Классика

Главный пианист современной России

Пушкинская карта

 Билеты

Красная шапочка

Фэнтези

От 1200 ₽

Анна Каренина

Московский театр оперетты

Мюзикл

Эстрадный мюзикл по роману Льва Толстого

От 500 ₽

Ансамбль «Народный праздник», Сергей Старостин, Сергей Филатов

26 октября в 19:00, Зарядье

Билеты

Марк Шагал.

La Bible

Пространство «Люмьер-холл»

Интерактивная

Премьеры

Билеты

Решение уйти

Детектив

От 1500 ₽

Масквичи

Модерн

Комедия

Социальная комедия Юрия Грымова

Анна Титова. Удивительное путешествие озорника

Музей Вадима Сидура

Инсталляция

Переосмысление экспозиции Музея Вадима Сидура от российской художницы

Билеты

СоюзКиноМульт. Выпуск №3: Оранжевая корова и все-все-все

Короткометражный

Выбор Афиши

 Билеты

Триллер

Злая эротическая комедия Пола Верхувена

От 600 ₽

Евгений Онегин

Театр им. Вахтангова

Драматический

Чарующая игра по программному пушкинскому роману

От 5000 ₽

Денис Мацуев. Классика и джаз

2 октября в 19:00, Кремлевский дворец

Классика

Главный пианист современной России

Брат Иван. Коллекции Михаила и Ивана Морозовых

Пушкинский музей

Живопись

«Идеальный музей» актуального французского и русского искусства рубежа XIX и ХХ веков

Скоро в кино

 Билеты

Сердце пармы

Исторический

Александр Кузнецов покоряет пермские земли и сердце ведьмы

Билеты

Викрам Веда

Боевик

Билеты

Пассажиры ночи

Шарлотта Генсбур подбирает на улице одинокую девушку

Билеты

Хранитель тайн

Триллер

Смотрите онлайн

 

Ходячие мертвецы

2010, Боевик

Главный сериал о зомби-апокалипсисе

Симпсоны

1989, Мультфильм

Мультсериал, который умеет предсказывать будущее

Доктор Стрэндж

2016, Приключение

Бенедикт Камбербатч учится магии

Южный Парк

1997, Мультфильм

Провокационный мультсериал про американских четвероклассников

Популярные рестораны

Кофемания

Европейская

М. Черкасский пер., 2

Жемчуга

Европейская

Лесная, 20, стр. 3, фуд-молл «Депо. Москва»

Lao Lee Café

Вьетнамская

Миусская пл., 9, стр. 11

Корейская

26 Бакинских Комиссаров, 4, корп. 2

Грузинская

Ярцевская, 19, МФК «Кунцево-плаза»

Corner Café & Kitchen

Японская

Композиторская, 17

Номер 15

Европейская

Сретенка, 15

Сербская

Рочдельская, 11/5

Полное расписание событий: фильмов, выставок, спектаклей, концертов

Подборки «Афиши»

 

Новый сезон разговоров об искусстве: лектории в московских музеях

«Все это уже когда-то было»: Елена Ковылина рассказала о своем экспериментальном проекте «Артефакты и гаджеты»

выставок осени в Москве: Грабарь, Малевич и Cosmoscow 2022

Как провести последние выходные лета: арт-фестивали в Москве

Мероприятия

 

Создайте уникальную страницу своего события на «Афише»

Это возможность рассказать о нем многомиллионной аудитории и увеличить посещаемость

• Абакан,
• Азов,
• Альметьевск,
• Ангарск,
• Арзамас,
• Армавир,
• Артем,
• Архангельск,
• Астрахань,
• Ачинск,
• Балаково,
• Балашиха,
• Балашов,
• Барнаул,
• Батайск,
• Белгород,
• Белорецк,
• Белореченск,
• Бердск,
• Березники,
• Бийск,
• Благовещенск,
• Братск,
• Брянск,
• Бугульма,
• Бугуруслан,
• Бузулук,
• Великий Новгород,
• Верхняя Пышма,
• Видное,
• Владивосток,
• Владикавказ,
• Владимир,
• Волгоград,
• Волгодонск,
• Волжский,
• Вологда,
• Вольск,
• Воронеж,
• Воскресенск,
• Всеволожск,
• Выборг,
• Гатчина,
• Геленджик,
• Горно-Алтайск,
• Грозный,
• Губкин,
• Гудермес,
• Дербент,
• Дзержинск,
• Димитровград,
• Дмитров,
• Долгопрудный,
• Домодедово,
• Дубна,
• Евпатория,
• Екатеринбург,
• Елец,
• Ессентуки,
• Железногорск,
• Жуковский,
• Зарайск,
• Заречный,
• Звенигород,
• Зеленогорск,
• Зеленоград,
• Златоуст,
• Иваново,
• Ивантеевка,
• Ижевск,
• Иркутск,
• Искитим,
• Истра,
• Йошкар-Ола,
• Казань,
• Калининград,
• Калуга,
• Каменск-Уральский,
• Камышин,
• Каспийск,
• Кемерово,
• Кингисепп,
• Кириши,
• Киров,
• Кисловодск,
• Клин,
• Клинцы,
• Ковров,
• Коломна,
• Колпино,
• Комсомольск-на-Амуре,
• Копейск,
• Королев,
• Коряжма,
• Кострома,
• Красногорск,
• Краснодар,
• Краснознаменск,
• Красноярск,
• Кронштадт,
• Кстово,
• Кубинка,
• Кузнецк,
• Курган,
• Курск,
• Лесной,
• Лесной Городок,
• Липецк,
• Лобня,
• Лодейное Поле,
• Ломоносов,
• Луховицы,
• Лысьва,
• Лыткарино,
• Люберцы,
• Магадан,
• Магнитогорск,
• Майкоп,
• Махачкала,
• Миасс,
• Можайск,
• Московский,
• Мурманск,
• Муром,
• Мценск,
• Мытищи,
• Набережные Челны,
• Назрань,
• Нальчик,
• Наро-Фоминск,
• Находка,
• Невинномысск,
• Нефтекамск,
• Нефтеюганск,
• Нижневартовск,
• Нижнекамск,
• Нижний Новгород,
• Нижний Тагил,
• Новоалтайск,
• Новокузнецк,
• Новокуйбышевск,
• Новомосковск,
• Новороссийск,
• Новосибирск,
• Новоуральск,
• Новочебоксарск,
• Новошахтинск,
• Новый Уренгой,
• Ногинск,
• Норильск,
• Ноябрьск,
• Нягань,
• Обнинск,
• Одинцово,
• Озерск,
• Озеры,
• Октябрьский,
• Омск,
• Орел,
• Оренбург,
• Орехово-Зуево,
• Орск,
• Павлово,
• Павловский Посад,
• Пенза,
• Первоуральск,
• Пермь,
• Петергоф,
• Петрозаводск,
• Петропавловск-Камчатский,
• Подольск,
• Прокопьевск,
• Псков,
• Пушкин,
• Пушкино,
• Пятигорск,
• Раменское,
• Ревда,
• Реутов,
• Ростов-на-Дону,
• Рубцовск,
• Руза,
• Рыбинск,
• Рязань,
• Салават,
• Салехард,
• Самара,
• Саранск,
• Саратов,
• Саров,
• Севастополь,
• Северодвинск,
• Североморск,
• Северск,
• Сергиев Посад,
• Серпухов,
• Сестрорецк,
• Симферополь,
• Смоленск,
• Сокол,
• Солнечногорск,
• Сосновый Бор,
• Сочи,
• Спасск-Дальний,
• Ставрополь,
• Старый Оскол,
• Стерлитамак,
• Ступино,
• Сургут,
• Сызрань,
• Сыктывкар,
• Таганрог,
• Тамбов,
• Тверь,
• Тихвин,
• Тольятти,
• Томск,
• Туапсе,
• Тула,
• Тюмень,
• Улан-Удэ,
• Ульяновск,
• Уссурийск,
• Усть-Илимск,
• Уфа,
• Феодосия,
• Фрязино,
• Хабаровск,
• Ханты-Мансийск,
• Химки,
• Чебоксары,
• Челябинск,
• Череповец,
• Черкесск,
• Чехов,
• Чита,
• Шахты,
• Щелково,
• Электросталь,
• Элиста,
• Энгельс,
• Южно-Сахалинск,
• Якутск,
• Ялта,
• Ярославль

• Выбор «афиши»
• выбор «Афиши»

• Календарь
• 29 сентября 2022,
• 30 сентября 2022,
• 1 октября 2022,
• 2 октября 2022,
• 3 октября 2022,
• 4 октября 2022,
• 5 октября 2022,
• 6 октября 2022,
• 7 октября 2022,
• 8 октября 2022,
• 9 октября 2022,
• 10 октября 2022,
• 11 октября 2022,
• 12 октября 2022,
• 13 октября 2022,
• 14 октября 2022,
• 15 октября 2022,
• 16 октября 2022,
• 17 октября 2022,
• 18 октября 2022,
• 19 октября 2022,
• 20 октября 2022,
• 21 октября 2022,
• 22 октября 2022,
• 23 октября 2022,
• 24 октября 2022,
• 25 октября 2022,
• 26 октября 2022,
• 27 октября 2022,
• 28 октября 2022,
• 29 октября 2022,
• 30 октября 2022,
• 31 октября 2022,
• 1 ноября 2022,
• 2 ноября 2022,
• 3 ноября 2022,
• 4 ноября 2022,
• 5 ноября 2022,
• 6 ноября 2022,
• 7 ноября 2022,
• 8 ноября 2022,
• 9 ноября 2022,
• 10 ноября 2022,
• 11 ноября 2022,
• 12 ноября 2022,
• 13 ноября 2022,
• 14 ноября 2022,
• 15 ноября 2022,
• 16 ноября 2022,
• 17 ноября 2022,
• 18 ноября 2022,
• 19 ноября 2022,
• 20 ноября 2022,
• 21 ноября 2022,
• 22 ноября 2022,
• 23 ноября 2022,
• 24 ноября 2022,
• 25 ноября 2022,
• 26 ноября 2022,
• 27 ноября 2022,
• 28 ноября 2022,
• 29 ноября 2022,
• 30 ноября 2022,
• 1 декабря 2022,
• 2 декабря 2022,
• 3 декабря 2022,
• 4 декабря 2022,
• 5 декабря 2022,
• 6 декабря 2022,
• 7 декабря 2022,
• 8 декабря 2022,
• 9 декабря 2022,
• 10 декабря 2022,
• 11 декабря 2022,
• 12 декабря 2022,
• 13 декабря 2022,
• 14 декабря 2022,
• 15 декабря 2022,
• 16 декабря 2022,
• 17 декабря 2022,
• 18 декабря 2022,
• 19 декабря 2022,
• 20 декабря 2022,
• 21 декабря 2022,
• 22 декабря 2022,
• 23 декабря 2022,
• 24 декабря 2022,
• 25 декабря 2022,
• 26 декабря 2022,
• 27 декабря 2022,
• 28 декабря 2022,
• 29 декабря 2022,
• 30 декабря 2022,
• 31 декабря 2022,
• 1 января 2023,
• 2 января 2023,
• 3 января 2023,
• 4 января 2023,
• 5 января 2023,
• 6 января 2023,
• 7 января 2023,
• 8 января 2023,
• 9 января 2023,
• 10 января 2023,
• 11 января 2023,
• 12 января 2023,
• 13 января 2023,
• 14 января 2023,
• 15 января 2023,
• 16 января 2023,
• 17 января 2023,
• 18 января 2023,
• 19 января 2023,
• 20 января 2023,
• 21 января 2023,
• 22 января 2023,
• 23 января 2023,
• 24 января 2023,
• 25 января 2023,
• 26 января 2023,
• 27 января 2023,
• 28 января 2023,
• 29 января 2023,
• 30 января 2023,
• 31 января 2023,
• 1 февраля 2023,
• 2 февраля 2023,
• 3 февраля 2023,
• 4 февраля 2023,
• 5 февраля 2023,
• 6 февраля 2023,
• 7 февраля 2023,
• 8 февраля 2023,
• 9 февраля 2023,
• 10 февраля 2023,
• 11 февраля 2023,
• 12 февраля 2023,
• 13 февраля 2023,
• 14 февраля 2023,
• 15 февраля 2023,
• 16 февраля 2023,
• 17 февраля 2023,
• 18 февраля 2023,
• 19 февраля 2023,
• 20 февраля 2023,
• 21 февраля 2023,
• 22 февраля 2023,
• 23 февраля 2023,
• 24 февраля 2023,
• 25 февраля 2023,
• 26 февраля 2023,
• 27 февраля 2023,
• 28 февраля 2023,
• 1 марта 2023,
• 2 марта 2023,
• 3 марта 2023,
• 4 марта 2023,
• 5 марта 2023,
• 6 марта 2023,
• 7 марта 2023,
• 8 марта 2023,
• 9 марта 2023,
• 10 марта 2023,
• 11 марта 2023,
• 12 марта 2023,
• 13 марта 2023,
• 14 марта 2023,
• 15 марта 2023,
• 16 марта 2023,
• 17 марта 2023,
• 18 марта 2023,
• 19 марта 2023,
• 20 марта 2023,
• 21 марта 2023,
• 22 марта 2023,
• 23 марта 2023,
• 24 марта 2023,
• 25 марта 2023,
• 26 марта 2023,
• 27 марта 2023,
• 28 марта 2023,
• 29 марта 2023,
• 30 марта 2023,
• 31 марта 2023,
• 1 апреля 2023,
• 2 апреля 2023,
• 3 апреля 2023,
• 4 апреля 2023,
• 5 апреля 2023,
• 6 апреля 2023,
• 7 апреля 2023,
• 8 апреля 2023,
• 9 апреля 2023,
• 10 апреля 2023,
• 11 апреля 2023,
• 12 апреля 2023,
• 13 апреля 2023,
• 14 апреля 2023,
• 15 апреля 2023,
• 16 апреля 2023,
• 17 апреля 2023,
• 18 апреля 2023,
• 19 апреля 2023,
• 20 апреля 2023,
• 21 апреля 2023,
• 22 апреля 2023,
• 23 апреля 2023,
• 24 апреля 2023,
• 25 апреля 2023,
• 26 апреля 2023,
• 27 апреля 2023,
• 28 апреля 2023,
• 29 апреля 2023,
• 30 апреля 2023,
• 1 мая 2023,
• 2 мая 2023,
• 3 мая 2023,
• 4 мая 2023,
• 5 мая 2023,
• 6 мая 2023,
• 7 мая 2023,
• 8 мая 2023,
• 9 мая 2023,
• 10 мая 2023,
• 11 мая 2023,
• 12 мая 2023,
• 13 мая 2023,
• 14 мая 2023,
• 15 мая 2023,
• 16 мая 2023,
• 17 мая 2023,
• 18 мая 2023,
• 19 мая 2023,
• 20 мая 2023,
• 21 мая 2023,
• 22 мая 2023,
• 23 мая 2023,
• 24 мая 2023,
• 25 мая 2023,
• 26 мая 2023,
• 27 мая 2023,
• 28 мая 2023,
• 29 мая 2023,
• 30 мая 2023,
• 31 мая 2023,
• 1 июня 2023,
• 2 июня 2023,
• 3 июня 2023,
• 4 июня 2023,
• 5 июня 2023,
• 6 июня 2023,
• 7 июня 2023,
• 8 июня 2023,
• 9 июня 2023,
• 10 июня 2023,
• 11 июня 2023,
• 12 июня 2023,
• 13 июня 2023,
• 14 июня 2023,
• 15 июня 2023,
• 16 июня 2023,
• 17 июня 2023,
• 18 июня 2023,
• 19 июня 2023,
• 20 июня 2023,
• 21 июня 2023,
• 22 июня 2023,
• 23 июня 2023,
• 24 июня 2023,
• 25 июня 2023,
• 26 июня 2023,
• 27 июня 2023,
• 28 июня 2023,
• 29 июня 2023,
• 30 июня 2023,
• 1 июля 2023,
• 2 июля 2023,
• 3 июля 2023,
• 4 июля 2023,
• 5 июля 2023,
• 6 июля 2023,
• 7 июля 2023,
• 8 июля 2023,
• 9 июля 2023,
• 10 июля 2023,
• 11 июля 2023,
• 12 июля 2023,
• 13 июля 2023,
• 14 июля 2023,
• 15 июля 2023,
• 16 июля 2023,
• 17 июля 2023,
• 18 июля 2023,
• 19 июля 2023,
• 20 июля 2023,
• 21 июля 2023,
• 22 июля 2023,
• 23 июля 2023,
• 24 июля 2023,
• 25 июля 2023,
• 26 июля 2023,
• 27 июля 2023,
• 28 июля 2023,
• 29 июля 2023,
• 30 июля 2023,
• 31 июля 2023,
• 1 августа 2023,
• 2 августа 2023,
• 3 августа 2023,
• 4 августа 2023,
• 5 августа 2023,
• 6 августа 2023,
• 7 августа 2023,
• 8 августа 2023,
• 9 августа 2023,
• 10 августа 2023,
• 11 августа 2023,
• 12 августа 2023,
• 13 августа 2023,
• 14 августа 2023,
• 15 августа 2023,
• 16 августа 2023,
• 17 августа 2023,
• 18 августа 2023,
• 19 августа 2023,
• 20 августа 2023,
• 21 августа 2023,
• 22 августа 2023,
• 23 августа 2023,
• 24 августа 2023,
• 25 августа 2023,
• 26 августа 2023,
• 27 августа 2023,
• 28 августа 2023,
• 29 августа 2023,
• 30 августа 2023,
• 31 августа 2023,
• 1 сентября 2023,
• 2 сентября 2023,
• 3 сентября 2023,
• 4 сентября 2023,
• 5 сентября 2023,
• 6 сентября 2023,
• 7 сентября 2023,
• 8 сентября 2023,
• 9 сентября 2023,
• 10 сентября 2023,
• 11 сентября 2023,
• 12 сентября 2023,
• 13 сентября 2023,
• 14 сентября 2023,
• 15 сентября 2023,
• 16 сентября 2023,
• 17 сентября 2023,
• 18 сентября 2023,
• 19 сентября 2023,
• 20 сентября 2023,
• 21 сентября 2023,
• 22 сентября 2023,
• 23 сентября 2023,
• 24 сентября 2023,
• 25 сентября 2023,
• 26 сентября 2023,
• 27 сентября 2023,
• 28 сентября 2023,
• Сентябрь,
• Октябрь,
• Ноябрь,
• Декабрь,
• Январь,
• Февраль,
• Март,
• Апрель,
• Май,
• Июнь,
• Июль,
• Август,
• Сегодня,
• Завтра,
• Выходные,
• Неделя,
• Месяц

• Детские
• детские

• Сортировка
• по размеру скидки

Модуль числа, определение и свойства

Определение модуля числа

Алгебра дает четкое определение модуля числа. Модуль числа в математике — это расстояние от начала отсчёта до точки координатной прямой, соответствующей этому числу.

Если мы возьмем некоторое число «a» и изобразим его на координатной прямой точкой A — расстояние от точки A до начала отсчёта (то есть до нуля) длина отрезка OA будет называться модулем числа «a».

Знак модуля: |a| = OA.

Разберем на примере:

Точка В, которая соответствует числу −3, находится на расстоянии 3 единичных отрезков от точки O (то есть от начала отсчёта). Значит, длина отрезка OB равна 3 единицам.

Число 3 (длину отрезка OB) называют модулем числа −3.

Обозначение модуля: |−3| = 3 (читают: «модуль числа минус три равен трём»).

Точка С, которая соответствует числу +4, находится на расстоянии четырех единичных отрезков от начала отсчёта, то есть длина отрезка OС равна четырем единицам.

Число 4 называют модулем числа +4 и обозначают так: |+4| = 4.

Также можно опустить плюс и записать значение, как |4| = 4.

Онлайн-курсы математики для детей помогут подтянуть оценки, подготовиться к контрольным, ВПР и экзаменам.

Практикующий детский психолог Екатерина Мурашова

Бесплатный курс для современных мам и пап от Екатерины Мурашовой. Запишитесь и участвуйте в розыгрыше 8 уроков

Свойства модуля числа

Давайте рассмотрим семь основных свойств модуля. Независимо от того, в какой класс перешел ребенок — эти правила пригодятся всегда.

1. Модуль числа — это расстояние, а расстояние не может быть отрицательным. Поэтому и модуль числа не бывает отрицательным:

• |a| > 0 

2. Модуль положительного числа равен самому числу.

• |a| = a, если a > 0

3. Модуль отрицательного числа равен противоположному числу.

• |−a| = a

4. Модуль нуля равен нулю.

• |0| = 0, если a = 0

5. Противоположные числа имеют равные модули.

• |−a| = |a| = a

6. Модуль произведения равен произведению модулей этих чисел.

• |a b| = |a| |b|, когда

a · b = 0

или

−(a · b), когда a · b < 0

7. Модуль частного равен частному от деления модуля числа числителя на модуль числа знаменателя: 

Геометрическая интерпретация модуля

Как мы уже знаем, модуль числа — это расстояние от нуля до данного числа. То есть расстояние от точки −5 до нуля равно 5.

Нарисуем числовую прямую и отобразим это на ней.

Эта геометрическая интерпретация используется для решения уравнений и неравенств с модулем. Давайте рассмотрим на примерах.

Решим уравнение: |х| = 5.

Мы видим, что на числовой прямой есть две точки, расстояние от которых до нуля равно 5. Это точки 5 и −5. Значит, уравнение имеет два решения: x = 5 и x = −5.

Когда у нас есть два числа a и b, то их разность |a — b| равна расстоянию между ними на числовой прямой или длине отрезка АВ.

Расстояние от точки a до точки b равно расстоянию от точки b до точки a, тогда |a — b| = |b — a|.

Решим уравнение: |a — 3| = 4 . Запись читаем так: расстояние от точки а до точки 3 равно 4. Отметим на числовой прямой точки, удовлетворяющие этому условию.

Уравнение имеет два решения: −1 и 7. Мы из 3 вычли 4 — и это один ответ, а также к 3 мы прибавили 4 — и это второй ответ.

Решим неравенство: |a + 7| < 4.

Эту запись читаем так: расстояние от точки a до точки −7 меньше четырех. Отмечаем на числовой прямой точки, удовлетворяющие этому условию:

Ответ в данном случае будет таким: (−11; −3).

Решим неравенство: |10 − x| ≥ 7.

Расстояние от точки 10 до точки x больше или равно семи. Отметим эти точки на числовой прямой.

Ответ: (−∞; 3] [17, +∞).

Учёба без слёз (бесплатный гайд для родителей)

Пошаговый гайд от Екатерины Мурашовой о том, как перестать делать уроки за ребёнка и выстроить здоровые отношения с учёбой.

График функции

График функции равен y = |х|.

Для x > 0 имеем y = x. 

Для x < 0 имеем y = −x. В результате получаем:

Этот график можно использовать при решении уравнений и неравенств.

Корень из квадрата

В контрольной работе или на ЕГЭ может встретиться задачка, в которой нужно вычислить √a² , где a – некоторое число или выражение.

При этом, √a²= |a|.

По определению арифметического квадратного корня √a² — это такое неотрицательное число, квадрат которого равен a² . 

Оно равно a при а > 0 и −а, при а < 0 , т. е. как раз |a|.

Модуль рационального числа

Как найти модуль рационального числа — это расстояние от начала отсчёта до точки координатной прямой, которая соответствует этому числу.

Модуль рационального числа, примеры:

|-3,5| = 3,5

|2,27| = 2,27

Новости Читы — главные новости сегодня | Chita.ru

Путин поручил вернуть домой тех, кого мобилизовали по ошибке

Обсудить

При покупке квартиры теперь достаточно 10% первоначального взноса

«Эконом — не для моего кота»: история пушистика Бати, который полетит за границу к хозяину бизнес-классом

Обсудить

Спецоперация на Украине

Истории

«Ты его оттуда выцарапай, меня забирай»: в Забайкалье отец просил мобилизовать его вместо больного сына

Мастер-класс от художника для семей с детьми с ОВЗ организовали в Чите: участники раскрасили стены зоопарка

«На нас кричали, колотили нашу машину». Екатеринбурженка рассказала о том, что творится на границе с Грузией

Обсудить

В Чите пройдет встреча руководства Фонда президентских грантов с лидерами НКО

В Минобороны рассказали, куда отправят мобилизованных

Обсудить

В Забайкалье начали готовить документы по реставрации Успенского храма в Калинино

Дневник призывника: мобилизованный показал реальные казармы — публикуем видеосюжет

Тревожные звоночки: на какие симптомы стоит обратить внимание

Холодные руки, отеки и одышка: при каких симптомах нужно идти к кардиологу, рассказал опытный доктор

Пора погреться: новый банный комплекс с теплыми бассейнами открылся в центре Читы

«Мобилизованным не нужно покупать полный комплект формы» — администрация губернатора Забайкалья

Спектакль «О чём мечтает женщина» покажут в драмтеатре 19 октября — где купить билеты

Спецоперация на Украине

Путеводитель

Справочник мобилизации.

Самый полезный путеводитель «Чита.Ру»

Как проходит обучение мобилизованных, объяснили власти Забайкалья

Как после тренировки не чувствовать себя уставшим — читинский йога-центр нашел решение

Сенатор от Забайкалья Баир Жамсуев приглашен на заседание в Кремль

Спецоперация на Украине

Путеводитель

Справочник мобилизации. Самый полезный путеводитель «Чита.Ру»

Пора погреться: новый банный комплекс с теплыми бассейнами открылся в центре Читы

«Мобилизованным не нужно покупать полный комплект формы» — администрация губернатора Забайкалья

Спектакль «О чём мечтает женщина» покажут в драмтеатре 19 октября — где купить билеты

Тревожные звоночки: на какие симптомы стоит обратить внимание

Холодные руки, отеки и одышка: при каких симптомах нужно идти к кардиологу, рассказал опытный доктор

Как проходит обучение мобилизованных, объяснили власти Забайкалья

Как после тренировки не чувствовать себя уставшим — читинский йога-центр нашел решение

Сенатор от Забайкалья Баир Жамсуев приглашен на заседание в Кремль

Общество

«Хватаемся за голову».

Забайкальские работодатели рассказали о мобилизации сотрудников

Учеба без запары: куда поступить, чтобы быстро отучиться и нормально зарабатывать

Призовут ли с категориями Б и В? Ответ правительства Забайкалья

Интерьер в радость: как выбрать современную мебель для гостиной — новая коллекция уже в Чите

Общество

Готовы ли мобилизоваться депутаты Госдумы от Забайкалья? Мы их спросили

Власти Читы опубликовали расписание чемпионата России по боксу (16+)

Обсудить

Учителя могут вручить повестку во время мобилизации. Объясняем, когда это возможно

Модные прически ночуют на лавочке — казах рассказал о российских приезжих

Бизнес

Мнение

Бар не ради выпивки. Несостоявшийся железнодорожник — о мечте и «культуре пития»

Как доказать, что я не годен? Отвечает военный комиссар

Власти рассказали, сколько учителей получили повестки в Забайкалье

Аэропорт Читы 2 года завышал цены на обслуживание самолетов, а потом хотел уменьшить выписанный за это штраф

Обсудить

«С шилом в одном месте».

Кто такой новый зампред по ЖКХ в Забайкалье?

В Кремле рассказали, зачем Владимир Путин собирает Госдуму 30 сентября

Депутат гордумы Читы, которому пришла повестка, не попал под мобилизацию

Володин передумал: военнообязанным все-таки не запрещено покидать Россию

«С шилом в одном месте». Кто такой новый зампред по ЖКХ в Забайкалье?

Как доказать, что я не годен? Отвечает военный комиссар

Власти рассказали, сколько учителей получили повестки в Забайкалье

Аэропорт Читы 2 года завышал цены на обслуживание самолетов, а потом хотел уменьшить выписанный за это штраф

Обсудить

Бизнес

Мнение

Бар не ради выпивки. Несостоявшийся железнодорожник — о мечте и «культуре пития»

В Кремле рассказали, зачем Владимир Путин собирает Госдуму 30 сентября

Депутат гордумы Читы, которому пришла повестка, не попал под мобилизацию

Володин передумал: военнообязанным все-таки не запрещено покидать Россию

Спецоперация на Украине

Репортаж

Девочки готовили им еду на земле — как забайкалки помогают мобилизованным мужчинам

12 973

28

Караоке-будки установят в Чите — на это дали полмиллиона

Минобр Забайкалья рассказал, как учителям будут платить за «Разговоры о важном» в школах

Депутатов Госдумы вызвали в Кремль. Там будет выступать Путин

Общество

Спецназовец случайно застрелил коллегу на задании. История громкого убийства полицейского в Забайкалье

10 673

7

Как проводили на Украину почти 500 забайкальцев — видео

«Годная молодежь закончилась»: 45-летнему айтишнику из аккредитованной компании прислали повестку

Минцифры просит компании выплатить мобилизованным сотрудникам несколько окладов

Спецоперация на Украине

«Я принял решение, я же не маленький мальчик» — монолог забайкальца, который не стал ждать повестки

Очередь в Монголию выстроилась в поселке Забайкалья после объявления о мобилизации

Две девушки создали бренд одежды в пандемию и не прогорели — как заработать на необычной идее

Обсудить

Сапоги и рюкзаки исчезают в читинских магазинах после начала частичной мобилизации

Спецоперация на Украине

«Что говорить? И так всё понятно».

Мобилизованные забайкальцы экстренно женятся

Предприимчивые женщины в Сретенске организовали сбор гуманитарного груза для мобилизованных парней

Рассказ мужчины, который бросил всё и уехал в Казахстан. Сколько там стоит жилье и что говорят местные

Обсудить

400 мобилизованных отправили на спецоперацию из Борзи

Спецоперация на Украине

«Что говорить? И так всё понятно». Мобилизованные забайкальцы экстренно женятся

Очередь в Монголию выстроилась в поселке Забайкалья после объявления о мобилизации

Две девушки создали бренд одежды в пандемию и не прогорели — как заработать на необычной идее

Обсудить

Сапоги и рюкзаки исчезают в читинских магазинах после начала частичной мобилизации

Спецоперация на Украине

«Я принял решение, я же не маленький мальчик» — монолог забайкальца, который не стал ждать повестки

Предприимчивые женщины в Сретенске организовали сбор гуманитарного груза для мобилизованных парней

Рассказ мужчины, который бросил всё и уехал в Казахстан. Сколько там стоит жилье и что говорят местные

Обсудить

400 мобилизованных отправили на спецоперацию из Борзи

Все новости

Тарифы на проезд

21 км — 93 км

Основание: постановление Правительства РФ № 2271-р от 14 ноября 2014 г.

Альтернативный маршрут — от Московской кольцевой автомобильной дороги по Каширскому шоссе до развязки на 117 км + 000.

93 км — 211 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2498-р от 7 декабря 2015 г.
Альтернативный маршрут: М-6 «Каспий» на участке от пересечения М-4 «Дон» до пересечения с автомобильной дорогой Р-114, автомобильная дорога Р-114 на участке от М-6 до г. Узловая Узловского района Тульской области, автомобильная дорога N 70К-359 «Узловая — Богородицк».

211 км — 266 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2283-р от 21 декабря 2011 г.
Альтернативный маршрут: Крутой Верх — г. Богородицк — Кузовка.

266 км — 321 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 906-р от 26 мая 2011 г.
Альтернативный маршрут: Чернятино — Покровка — Пушкари.

330 км — 355 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 1973-р от 12.10.12 г.
Альтернативный маршрут: Бабарыкино – Яркино.

355 км — 414 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 906-р от 26 мая 2011 г.
Альтернативный маршрут: Становое — Тростное — г. Елец — Буевка — Екатериновка — Тимирязевка.

414 км — 464 км

Участок 414-444

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2272-р от 14.11.14 г.
Альтернативный маршрут: существующая автомобильная дорога (старое направление автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон»), проходящая по территории Задонского и Хлевенского районов Липецкой области через с. Миролюбовка, с. Болоховское, с. Малое Панарино, г. Задонск, с. Тешевка, с. Уткино, с. Даньшино, пос. Стародубовский.

Участок 444-464

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2270-р от 14.11.14 г.
Альтернативный маршрут: существующая автомобильная дорога (старое направление автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон»), проходящая по территории Хлевенского района Липецкой области через с. Елецко-Маланинский, с. Хлевное, с. Конь-Колодезь.

492 км — 517 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2265-р от 14 ноября 2014 г.
Альтернативный маршрут: 492 км + 700 автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон» — городская сеть автомобильных дорог г. Воронежа — 517 км автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон».

517 км — 544 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 2266-р от 14 ноября 2014 г.
Альтернативный маршрут: участок автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон» 517 км — 544 км, расположенный на территории Новоусманского района Воронежской области, проходящий через с. Нечаевка, с. Новая Усмань, с. Подклетное и с. Рогачевка.

544 км — 633 км

Основание: постановление Правительства Российской Федерации № 2267-р от 14 ноября 2014 г. 
Альтернативный маршрут: автомобильные дороги г. Курск — г. Воронеж — г. Борисоглебск, г. Курск — г. Борисоглебск — пос. Таловая — с. Бутурлиновка, г. Павловск — г. Калач — с. Бутурлиновка.

633 км — 715 км

Основание: распоряжение Правительства Российской Федерации № 444-р от 27.02.20г.
Альтернативный маршрут: Воронеж – Ростов-на-Дону – Краснодар — Новороссийск.

715 км — 933 км

Основание: Распоряжение Правительства РФ от 14.12.2021 № 3585-р.

Альтернативный маршрут:

Маршрут N 1 — от пересечения автомобильной дороги М-4 «Дон» Москва — Воронеж — Ростов-на-Дону — Краснодар — Новороссийск на км 778+898 с автомобильной дорогой 60 ОП РЗ 60К-20, автомобильная дорога магистраль «Дон» — ст. Мешковская — ст. Казанская через населенные пункты х. Нагибин, ст. Мешковская, ст. Казанская, ст. Вешенская, сл. Кашары, ст. Милютинская, г. Белая Калитва до пересечения автомобильной дороги М-4 «Дон» Москва — Воронеж — Ростов-на-Дону — Краснодар — Новороссийск на км 945 с автомобильной дорогой А-260 Волгоград — Каменск-Шахтинский — граница с Украиной.

Маршрут N 2 (для легкового транспорта) — от пересечения автомобильной дороги М-4 «Дон» Москва — Воронеж — Ростов-на-Дону — Краснодар — Новороссийск на км 737 через населенные пункты г. Богучар, с. Петропавловка, г. Калач, ст. Нехаевская, ст. Шумилинская, ст. Казанская, ст. Вешенская, сл. Кашары, ст. Милютинская, г. Белая Калитва до пересечения автомобильной дороги М-4 «Дон» Москва — Воронеж — Ростов-на-Дону — Краснодар — Новороссийск на км 945 с автомобильной дорогой А-260 Волгоград — Каменск-Шахтинский — граница с Украиной.

1091 км — 1119 км

Основание: постановление Правительства Российской Федерации № 2268-р от 14 ноября 2014 г.  

Альтернативный маршрут:

• г. Ростов-на-Дону – съезд на п. Самарское – 1084-й километр М-4 «Дон» через Восточное шоссе, Западное шоссе, по Р-268, через населенный пункт Мичуринец 3, Еремеевку, Самарское, с  выходом на М-4 «Дон» на 1103-м км;
• г. Ростов-на-Дону – Новобатайск – с 1084-го километра М-4 «Дон» по автомобильной дороге  Р-269, через населенные пункты Кагальницкая, Иваново-Шамшево, Новобатайск, с  выходом на М-4 «Дон» на 1103-м км.

1119 км — 1195 км

Основание: постановление Правительства Российской Федерации № 2268-р от 14 ноября 2014 года

Альтернативный маршрут:

• Южный подъезд к г. Ростову-на-Дону — западный обход г. Ростова-на-Дону, автомобильная дорога г. Ростов-на-Дону (от автомобильной дороги общего пользования федерального значения М-4 «Дон») — г. Азов, восточный обход г. Азова, г. Азов — станица Александровка — станица Староминская, станица Староминская — станица Ленинградская — станица Павловская, станица Октябрьская — станица Павловская — станица Новопластуновская, обход станицы Павловской.

1195 км – 1319 км

Основание: постановление Правительства Российской Федерации № 1766-р от 17 августа 2017 г.

Альтернативный маршрут:

• Автомобильная дорога Р-217 «Кавказ» — автомобильная дорога 03 ОП РЗ 03К-002 Темрюк — Краснодар — Кропоткин — граница Ставропольского края — автомобильная дорога М-4 «Дон».

Климат и экология: Среда обитания: Lenta.ru

Глобальное потепление — главная угроза человечеству в ближайшие десятилетия. Если мир продолжит игнорировать проблему, уже после 2040 года планета пройдет точку невозврата. Цена за человеческую расточительность будет очень высокой: с лица земли исчезнут целые страны, миллионы людей погибнут от наводнений, невыносимой жары и прочих природных катаклизмов, сотни миллионов будут голодать. В подобных условиях экологическая трансформация представляется неизбежной, однако времени может не хватить — всего за 20 лет миру предстоит провести настоящую революцию в энергетике и экономике. Потоп у порога — в материале «Ленты.ру».

Перегрелись

Межправительственная группа экспертов ООН по изменению климата (МГЭИК) выпустила доклад об изменениях климата на Земле, и выводы экспертов неутешительны. Средние температуры на Земле растут быстрее, чем когда-либо за прошедшие 2000 лет, а последние пять из них оказались самыми жаркими за всю историю метеонаблюдений начиная с 1850 года. Климатологи сошлись во мнении, что это произошло по вине человечества.

Транспорт, промышленность и энергетика ежегодно выбрасывают в атмосферу около 40 миллиардов тонн углекислого газа. Глобальное потепление способно снизить эффективность пищевых цепочек в Мировом океане, поставить под угрозу выживание крупных животных и нанести урон продовольственной безопасности.

Фото: Navesh Chitrakar / Reuters

В ООН заключили, что уже сейчас глобальная средняя температура примерно на 1,1 градуса по Цельсию выше, чем в конце XIX века, и в ближайшие 20 лет среднее значение превысит 1,5 градуса по Цельсию. Рост температуры приводит к таянию ледников, повышению уровня мирового океана, а также росту средней влажности воздуха, что только усилит жару и сделает невозможной жизнь, например, в Индии и странах Ближнего Востока.

Материалы по теме:

Не менее страшное будущее ждет и Европу. Тающие гренландские ледники уже близки к точке невозврата, после которой дестабилизация ледяного щита на острове станет неизбежной. Произойдет замедление Атлантической меридиональной циркуляции (AMOC), а это чревато экстремальными погодными явлениям в Европе, в том числе усилением зимних штормов, летних засух и жары. Некоторые страны и вовсе могут исчезнуть: из-за повышения уровня моря под воду рискуют уйти десятки малых островных государств. В особо опасном положении находится государство Кирибати в Тихом океане, состоящее из трех низко расположенных архипелагов. По данным МГЭИК, подъем воды всего на 0,9 метра затопит две трети территории страны уже к концу этого столетия.

ООН заключила, что за последние 170 лет глобальная температура на Земле выросла на 1,23 градуса Цельсия и достигла максимума за 125 тысяч лет. Этого достаточно, чтобы увеличить вероятность так называемых волн жары в 20-150 раз. «Никто не находится в безопасности, ситуация быстро ухудшается. Мы должны относиться к изменению климата как к непосредственной угрозе. Так же мы должны относиться к связанным с ним кризисам природы — утрате биоразнообразия, загрязнению и отходам. Все это серьезные угрозы. Правительствам стран необходимо сделать план по достижению нулевых выбросов неотъемлемой частью своих обязательств. Они должны финансировать и поддерживать развивающиеся страны, чтобы они адаптировались к изменению климата, как и было обещано в Парижском соглашении», — заявила исполнительный директор ООН по окружающей среде Ингер Андерсен.

Фото: Michael Probst / AP

Последствия глобальных изменений погоды видны уже сейчас. Показательные примеры — недавнее катастрофическое наводнение в Германии, ущерб от которого оценили в 30 миллиардов евро. Отражением изменений погоды стали и масштабные пожары, охватившие летом 2021 года миллионы гектаров леса по всему миру: от России и Турции до США и Бразилии.

Более того, глобальное потепление уже отразилось на демографии. Аналитики Morgan Stanley заключили, что все больше семейных пар не хотят иметь детей, боясь последствий климатических изменений, многие опасаются, что дети не смогут пережить грядущих погодных изменений. Некоторые будущие родители не планируют заводить детей, чтобы не навредить планете: рождение одного ребенка приводит к выбросам в атмосферу почти 60 тонн углерода в год в развитых странах.

Срочные меры

Почти все страны мира признали климатическую угрозу и согласились бороться с ней, подписав Парижское соглашение. Более 200 государств обязались прийти к «нулевому углеродному следу» до 2050 года. Но пока это вылилось только в громкие заявления о сокращении выбросов по сравнению с доиндустриальной эпохой.

Из крупных загрязнителей только Евросоюз — третья экономика мира после США и Китая — оформил свое честное слово в юридически обязывающий документ, закрепив законом цель сократить выбросы на 55 процентов к 2030 году по сравнению с 1990-м. Для достижения поставленных целей Брюссель готовится ввести углеродный налог, запретить продажу автомобилей с бензиновыми двигателями, ввести налоги на выбросы для авиакомпаний и морских перевозчиков, а также заняться восстановлением лесов.

Фото: Kim Hong-Ji / Reuters

ЕС верит, что целей Парижского соглашения еще можно достичь, но это потребует быстрого сведения углеродных выбросов к нулю по всему миру. «Доклад МГЭИК демонстрирует огромную важность немедленных действий ради того, чтобы справиться с климатическим кризисом. Еще можно сдержать ускоряющееся изменение климата, если мы будем действовать прямо сейчас», — заключил замглавы Еврокомиссии (ЕК) Франс Тиммерманс. В Европе настаивают, что эра нефти и газа уходит в прошлое.

Экономика, построенная на полезных ископаемых, исчерпала себя. Мы хотим оставить следующему поколению пригодную для жилья планету

Урсула фон дер Ляйенглава Еврокомиссии

Другие крупнейшие загрязнители планеты — США и Китай. На них приходится половина мирового объема парниковых газов. При президенте Дональде Трампе США вышли из Парижского соглашения, но с приходом Джо Байдена вновь стали участниками договора. Сейчас экологическая политика стала одной из основных для Белого дома. «Ни одна страна не сможет справиться с этим кризисом в одиночку. Я знаю, что все вы прекрасно это понимаете. Все мы, особенно те, кто представляет крупнейшие экономики мира, должны активизировать свои усилия», — призывал Байден.

По его распоряжению к 2030 году не менее 50 процентов производимых в США автомобилей должны оснащаться электрическими силовыми установками. В стране также предлагается ввести новые стандарты выбросов транспортных средств, которые уже к 2026 году должны сократить загрязнения на 10 процентов.

Среди мер противодействия климатическому кризису — введение сборов на импорт загрязняющей природу продукции и стимулирующие выплаты поставщикам чистой электроэнергии. На борьбу с изменением климата США заложили в бюджете 3,5 триллиона долларов.

Фото: Ng Han Guan / AP

В Китае вредные выбросы в атмосферу на душу населения вдвое меньше, чем в США, но с населением почти в 1,4 миллиарда человек и стремительным экономическим ростом КНР оказался главной угрозой мировой экологии. В настоящее время Китай производит более четверти мировых выбросов парниковых газов. Главная проблема страны — уголь, который пока остается главным источником энергии. Власти обещают, что его использование будут постепенно сокращать. Исследователи из Университета Цинхуа в Пекине настаивают, что КНР нужно полностью отказаться от использования угля для производства электроэнергии к 2050 году и заменить его производством ядерной и возобновляемой энергии.

Климатический вызов

Свою лепту в загрязнение атмосферы вносит и Россия. Кроме того, она так и не представила план по декарбонизации. Однако последствия глобального потепления и потенциальные угрозы в стране признают. К примеру, спецпредставитель президента России по связям с международными организациями для достижения целей устойчивого развития Анатолий Чубайс, комментируя прогноз ООН, назвал его совсем пугающим. «Единственная хорошая новость — это то, что правительство впервые серьезно начало готовить страну к этому вызову, который, по моему убеждению, будет для нас самым главным уже в ближайшие десять лет», — сказал он.

Для решения проблемы с глобальным потеплением крупнейшие экономики мира отказываются от использования нефтегазового топлива. Чубайс неоднократно предупреждал, что отказ мировой экономики от углеводородов может дорого обойтись России, если она не начнет перестройку экономики. По его оценке, речь идет о 10 процентах ВВП. Одновременно бывший глава «Роснано» считает, что страна сможет сохранить статус великой энергодержавы, если заместит экспорт углеводородов на экспорт водорода. По словам Чубайса, сейчас газотранспортная система может использовать до 10 процентов пропускных мощностей для транспорта водорода.

Фото: Pascal Rossignol / Reuters

Несмотря на громкие заявления, на деле страна пока не готова к быстрой перестройке экономики. Председатель комитета по энергетике, депутат Госдумы Павел Завальный предположил, что переход на альтернативное топливо произойдет не ранее чем через десять лет. «На перспективу 10-20 лет энергобаланс сохранится при разных прогнозах развития возобновляемых источников энергии. В то же время энергопереход начался, и это можно увидеть по инвестициям. Резко растут вложения в альтернативную энергетику, включая солнечную, ветровую, водородную», — подчеркнул он. Чубайс также настаивал, что развитие этого рынка откроет перед страной уникальные возможности, причем действовать нужно как можно скорее.

У нас такое фантастическое преимущество, о котором мечтать не может никто. Надо вцепиться зубами и немедленно продвигаться в этом направлении

Анатолий Чубайсспецпредставитель президента России по связям с международными организациями для достижения целей устойчивого развития

С другой стороны, экологическая трансформация может обойтись очень дорого. По мнению аналитиков, борьба человечества за окружающую среду и экологию приведет к неминуемому росту цен практически на все товары по всему миру — так называемой «зеленой инфляции». Вечно она длиться, конечно, не будет, но снижаться мировые цены станут только тогда, когда электроэнергии из возобновляемых источников будет в избытке, и она начнет падать в цене, но таких предпосылок пока нет. На рынке стабильно растут цены на металлы, из которых делают компоненты для ветряков, солнечных батарей, деталей электромобилей, зарядных станций, а также соответствующей инфраструктуры. Цены растут из-за увеличения спроса, из-за повсеместного роста зеленой энергетики и общего восстановления экономики от пандемического кризиса.

На фоне устрашающих прогнозов ученых экологическая трансформация в мире должна ускориться, что приведет к ужесточению государственных мер, росту расходов на модернизацию производств и углеродные налоги, и опять же — к росту цен на товары. Причем ведущие страны, в том числе европейские, уже начали воплощать в жизнь такую политику.

Существуют опасения, что некоторые зеленые проекты могут быть отменены или отложены, что затруднит решение климатических вопросов. По данным Международного энергетического агентства, чтобы ограничить повышение температуры до 1,5 градуса Цельсия в период с 2020 по 2050 год, потребуется увеличить ветровую и солнечную мощность в пять раз. К тому же переходу на зеленую энергетику мешает и сама природа: сильнейшие засухи фактически уничтожают гидроэнергетику. Подобные проблемы уже испытывают США, Китай и Бразилия.

Фото: Felipe Dana / AP

Текущее отношение некоторых правительств к климатической повестке не остановит повышение температуры относительно доиндустриального уровня на отметке в 1,5 градуса Цельсия, как было установлено в Парижском соглашении. Ученые выяснили, что для достижения целей договора миру необходимо вдвое сократить выбросы к 2030 году и совсем перестать их производить к 2050 году.

Гигантские затраты на переход к зеленой экономике и грядущий рост цен — ничто по сравнению с тем, что может случиться с планетой, если не принять срочных мер по ее спасению. Глобальное потепление — вина человечества, и именно оно должно с ней разбираться. Возможность взять на себя больше обязательств в этом плане у стран появится уже в ближайшее время: в начале ноября в Шотландии соберется отложенный на год из-за коронавируса мировой климатический саммит, который станет важнейшими переговорами по климату со времени подписания Парижского соглашения в 2015 году. Тысячи участников обсудят, как избежать негативных последствий изменения климата и дать человечеству шанс на счастливое будущее.

Функциональная инактивация легочных клеток MAIT после обработки 5-OP-RU нечеловеческих приматов

Abstract

Нацеливание на клетки MAIT открывает перспективы для лечения различных заболеваний и инфекций. Ранее мы показали, что обработка мышей, инфицированных Mycobacterium tuberculosis , 5-OP-RU, основным антигеном для клеток MAIT, увеличивает количество клеток MAIT и усиливает бактериальный контроль. Здесь мы пролечили M.tuberculosis инфицированных макак-резусов 5-OP-RU интратрахеально, но не обнаружили клинического или микробиологического эффекта. Фактически, после обработки 5-OP-RU клетки MAIT не размножались, а скорее активировали PD-1 и теряли способность продуцировать множественные цитокины, фенотип напоминал истощение Т-клеток. Кроме того, мы показываем, что вакцинация неинфицированных макак инстилляцией 5-OP-RU+CpG в легкие также вызывает дисфункцию клеток MAIT, а блокада PD-1 во время вакцинации частично предотвращает потерю функции клеток MAIT, не способствуя их экспансии. Таким образом, у макак-резусов клетки MAIT склонны к потере эффекторных функций, а не к экспансии после стимуляции TCR in vivo, что представляет собой значительный барьер для терапевтического воздействия на эти клетки.

Введение

Инвариантные Т-клетки, ассоциированные со слизистыми оболочками (MAIT), ограничены неполиморфной молекулой MHC класса I, подобной MR1, и экспрессируют TCR, специфичные для низкомолекулярных метаболитов, продуцируемых микробами. ^1,2 5-OP-RU, производное промежуточных соединений, образующихся в процессе бактериального биосинтеза рибофлавина, является основным лигандом MR1, который распознается большинством MR1-рестриктированных Т-клеток. ^3,4,5 Клетки MAIT проявляют провоспалительные, цитотоксические и восстанавливающие ткани свойства. ^6,7,8 Учитывая неполиморфную природу MR1, существует интерес к нацеливанию на клетки MAIT посредством вакцинации или в качестве терапии для лечения различных состояний, включая рак и инфекции. Действительно, с использованием мышиных моделей было показано, что клетки MAIT важны для контроля некоторых бактериальных инфекций, ^9,10,11 , и их можно легко заставить размножаться до больших количеств in vivo путем вакцинации антигеном и адъювантом. ^7,12

Нацеливание на клетки MAIT может быть полезным в течение Mycobacterium tuberculosis (Mtb) инфекция. ¹³ Недавно было показано, что у мышей с дефицитом MR1 нет дефектов в бактериальном контроле или выживании после инфицирования Mtb, ^14,15 и наличие больших популяций клеток MAIT во время воздействия Mtb не влияет на резистентность хозяина . ^14,15,16 Таким образом, данные мышиной модели показывают, что вакцинация клеток MAIT перед инфекцией может быть неэффективной при инфекции Mtb. Однако мы показали, что лечение мышей с хронической инфекцией Mtb с помощью 5-OP-RU способно снизить бактериальную нагрузку примерно в 10 раз за 3 недели в зависимости от IL-17A, ¹⁴ , что указывает на то, что постэкспозиционная стимуляция клеток MAIT может быть многообещающей терапией туберкулеза (ТБ), направленной на хозяина. Несмотря на значительное перекрытие в паттернах экспрессии генов клеток MAIT человека и мыши ⁷ , существует несколько ключевых различий между клетками MAIT мыши и примата, отличного от человека (NHP)/человека. Например, большинство клеток MAIT мыши представляют собой CD4 ⁻ CD8 ⁻ IL-17A-продуцирующие клетки MAIT17, в то время как большинство клеток MAIT человека и макака представляют собой клетки CD8 ⁺ IFN-γ-продуцирующие клетки MAIT1. ^8,17,18,19 Кроме того, у мышей есть несколько ограничений в их способности моделировать туберкулез человека. Напротив, инфекция Mtb макак повторяет большинство признаков туберкулеза человека, и макаки считаются золотым стандартом доклинической модели туберкулеза. ²⁰ Таким образом, мы проверили потенциальную терапевтическую эффективность инстилляции 5-OP-RU в легкие инфицированных Mtb макак-резусов.

В отличие от мышей, при лечении 5-OP-RU макак с туберкулезом не наблюдалось терапевтического эффекта. Клетки MAIT у этих животных не размножались, повышали уровень PD-1 и функционально нарушались. Чтобы выяснить, была ли потеря функции вызвана инфекцией Mtb или PD-1, мы вакцинировали макак инстилляцией 5-OP-RU+CpG в легкие в присутствии или в отсутствие антител, блокирующих PD-1, и исследовали размножение и функцию клеток MAIT. . Опять же, клетки MAIT не смогли размножиться и потеряли способность продуцировать цитокины. Блокада PD-1 во время вакцинации 5-OP-RU + CpG не приводила к экспансии клеток MAIT, но частично облегчала потерю способности продуцировать цитокины. Это исследование дает представление об основах клеточной биологии MAIT in vivo у NHP и выявляет серьезное препятствие для переносимости терапии, направленной на клетки MAIT. В отличие от мышей, введение 5-OP-RU во время инфекции или с адъювантом макакам не приводит к размножению клеток MAIT и вместо этого приводит к дисфункции клеток MAIT. Стратегии стимулирования роста клеток MAIT у макак необходимы для проверки их терапевтического потенциала при туберкулезе и других заболеваниях.

Результаты

Обработка 5-OP-RU макак, инфицированных Mtb, не усиливает контроль над инфекцией

Для изучения терапевтической эффективности стимуляции клеток MAIT во время инфекции Mtb макакам интратрахеально вводили PBS или 5-OP-RU с 6 по 14 неделю после заражения (рис. 1а). Вскрытие было запланировано на 15-16 неделю. Все пять контрольных животных, получавших PBS, выжили до заранее определенной конечной точки. Напротив, у трех из пяти животных, получавших 5-OP-RU, развились острые признаки заболевания (кашель и затрудненное дыхание), и они были рано подвергнуты эвтаназии (рис. 1b). У всех животных в обеих группах заболевание легких было относительно стабильным по данным [9].0013 18 F]-ФДГ-ПЭТ/КТ легких (рис. 1c, d). При вскрытии измеряли бактериальную нагрузку в индивидуально удаленных гранулемах. Гранулемы от макак, получавших PBS и 5-OP-RU, имели одинаковое общее количество бактерий (рис. 1e). Однако, когда контрольных животных сравнивали только с двумя макаками, получавшими 5-OP-RU, которые оставались до заранее определенной конечной точки 15/16 недель, наблюдалось небольшое снижение количества бактерий у получавших лечение животных (рис. 1e). У двух из леченных 5-OP-RU макак, которые были подвергнуты ранней эвтаназии (DHLR на 7-й неделе и DHAJ на 10-й неделе), наблюдалось незначительное увеличение бактериальной нагрузки в гранулемах, но мы не могли различить, было ли увеличение числа бактерий связано с более раннее вскрытие или лечение 5-OP-RU (рис. 1e). Более того, не было существенной разницы в количестве бактерий в селезенках обеих групп (рис. 1f).

Рис. 1: Обработка 5-OP-RU макак, инфицированных Mtb, не усиливает контроль над инфекцией.

a Десять животных были инфицированы 120-150 колониеобразующими единицами (КОЕ) Mtb h47Rv. Через 6 недель после заражения животных интратрахеально обрабатывали PBS ( n  = 5) или 5-OP-RU ( n  = 5). Животных вскрывали на 15-й или 16-й неделе после заражения. b Процент оставшихся животных в 2 группах наносили на график в зависимости от недель после инфицирования Mtb. Три животных, получавших 5-OP-RU (DHLR, DHAJ, DHMK), были рано подвергнуты эвтаназии из-за развития тяжелой легочной недостаточности. c Трехмерные объемные изображения ПЭТ/КТ каждого животного на 5-й и 11-й неделе после заражения и при вскрытии. d Величина общего поглощения [ ¹⁸ F]-ФДГ в легких (общий гликолиз повреждения, TLG) у животных, получавших PBS (слева) и 5-OP-RU ( справа ). Бактериальные нагрузки в гранулемах ( e ) и селезенке ( f ) показаны у объединенных животных по экспериментальным группам и отдельных животных, подвергнутых ранней эвтаназии. Каждый символ представляет отдельный образец ткани указанного животного. Пунктирная линия указывает предел обнаружения. * p  < 0,05, *** p  < 0,001.

Изображение в полный размер

Поскольку у трех макак, получавших 5-OP-RU (DHLR, DHAJ, DHMK), после лечения наблюдались острые клинические признаки, мы оценили степень сужения дыхательных путей у животных путем измерения максимального диаметра бронхов на КТ-изображения, полученные в начале исследования и во время инфекции Mtb. У трех животных, получавших 5-OP-RU и подвергнутых ранней эвтаназии, после лечения наблюдалось быстрое уменьшение диаметра дыхательных путей по сравнению с контрольными животными, получавшими PBS, и у двух других животных, получавших 5-OP-RU, у которых не развились серьезные признаки дистресса (рис. . 2а, б, С2). Бронхоконстрикция не была связана ни с более высокой бактериальной нагрузкой в ​​легочных лимфатических узлах (ЛУ) (рис. 2c), ни с общим ЛУ [9].0013 18 Поглощение F]-ФДГ на ПЭТ/КТ (рис. 1в и 2г). Однако наблюдалась тенденция, при которой у животных с бронхоконстрикцией был по крайней мере один очень клеточный легочный лимфатический узел при вскрытии по сравнению с животными, получавшими 5-OP-RU, у которых не развился респираторный дистресс, или животными, получавшими PBS (рис. 2e). При визуальном осмотре при вскрытии было очевидно, что увеличенные ЛУ сдавливали бронх. Таким образом, кажется вероятным, что сужение дыхательных путей, связанное с лимфаденопатией, а не экспансивное туберкулезное поражение легких, было причиной острых клинических признаков, которые привели к ранней эвтаназии этих трех макак, получавших 5-OP-RU. Ранее было показано, что макаки-резусы особенно восприимчивы к летальной патологии ВН ^21,22 , поэтому неясно, было ли лечение 5-OP-RU непосредственной причиной бронхоконстрикции. Несмотря на это, лечение 5-OP-RU во время инфекции Mtb не имело клинических или микробиологических преимуществ у макак-резусов.

Рис. 2: Ранние вскрытия животных, получавших 5-OP-RU, были связаны с бронхоконстрикцией.

a Примеры изображений КТ органов грудной клетки животных, получавших PBS (вверху) и 5-OP-RU (внизу), выбранных для иллюстрации сужения бронхов (показаны стрелками). b Процентное изменение сужения дыхательных путей у животных, получавших PBS (слева) и 5-OP-RU (справа). Сужение дыхательных путей определяли путем сравнения диаметра бронхов на исходном уровне и после инфицирования. c Бактериальная нагрузка в легочных лимфатических узлах показана у объединенных животных по экспериментальным группам и у отдельных животных, подвергнутых ранней эвтаназии. Каждый символ представляет отдельный образец ткани указанного животного. Пунктирная линия указывает предел обнаружения. d Легкое тотальное [ ¹⁸ Величина поглощения F]-FDG (общий гликолиз поражений, TLG) у животных, получавших PBS (слева) и 5-OP-RU (справа). e Общее количество жизнеспособных клеток в легочных ЛУ. Каждый символ представляет отдельную ткань указанного животного.

Изображение с полным размером

Клетки MAIT активируются, но не увеличиваются после инстилляции 5-OP-RU

Затем мы измерили частоту клеток MAIT в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) и периферической крови с использованием MR1/5-OP макака-резуса тетрамеры -RU. В соответствии с предыдущими выводами, ²³ частота клеток MAIT в дыхательных путях и крови не изменилась в группе, получавшей PBS, после инфицирования Mtb (рис. 3a–d). В отличие от предыдущих отчетов на мышиной модели, показывающей значительное увеличение количества клеток MAIT после введения 5-OP-RU, лечение инфицированных макак ^14,15 5-OP-RU не приводило к увеличению клеток дыхательных путей или циркулирующих клеток MAIT. (рис. 3а–г). Чтобы проверить, вошли ли клетки MAIT в клеточный цикл, мы измерили экспрессию Ki-67 в клетках MAIT, выделенных из БАЛ и крови. Несмотря на небольшое увеличение экспрессии Ki-67 клетками MAIT в БАЛ через 4 недели после заражения, мы не наблюдали четких различий в их экспрессии Ki-67 между группами, получавшими PBS и 5-OP-RU, во время лечения ( Рис. 3e–g). В отличие от БАЛ, клетки MAIT в крови значительно активировали Ki-67 через 4 недели после заражения в обеих группах (рис. 3g). После 4-й недели уровни экспрессии Ki-67 в клетках MAIT, переносимых кровью, снова снизились до исходного уровня, но после начала лечения 5-OP-RU на 6-й неделе наблюдалось явное увеличение Ki-67 ⁺ клеток MAIT (рис. 3g).

Рис. 3: Клетки MAIT активируются, но не увеличиваются в размерах после инстилляции 5-OP-RU.

a Пример FACS-графики окрашивания тетрамером MR1/5-OP-RU клеток в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ). b Кинетика частоты клеток MAIT среди клеток CD3 ⁺ в дыхательных путях. c Пример FACS-графики окрашивания клеток крови тетрамером MR1/5-OP-RU. d Кинетика частоты MAIT-клеток среди CD3 ⁺ клеток в крови. e Пример Графики FACS экспрессии Ki-67 на клетках MAIT в BAL через 4 и 10 недель после инфицирования. Сводные графики, показывающие процент клеток Ki-67 ⁺ MAIT в БАЛ ( f ) или крови ( г ). ч Пример Графики FACS экспрессии PD-1 на клетках MAIT в BAL через 4 и 10 недель после заражения. Сводные графики, показывающие среднюю геометрическую интенсивность флуоресценции (geoMFI) PD-1 на клетках MAIT в БАЛ ( i ) или кровь ( J ). K Процент клеток MAIT в указанных тканях при вскрытии. Каждый символ представляет отдельный образец ткани указанного животного. * p  < 0,05, ** p  < 0,01, **** p  < 0,0001 по сравнению с моментом времени до заражения.

Изображение с полным размером

PD-1 индуцируется передачей сигналов TCR, поэтому мы затем исследовали его экспрессию, чтобы выяснить, стимулировались ли клетки MAIT через их TCR после обработки 5-OP-RU. В то время как экспрессия PD-1 клетками MAIT не изменилась в БАЛ или крови контрольных животных, обработка 5-OP-RU привела к поразительной положительной регуляции PD-1 клетками MAIT в обоих компартментах (рис. 3h–j), что указывает на что клетки MAIT явно получали антигенную стимуляцию через свои TCR после обработки 5-OP-RU. При вскрытии мы исследовали несколько участков ткани, чтобы выяснить, размножились ли клетки MAIT в какой-либо ткани. Введение 5-OP-RU не влияло на частоту клеток MAIT в тимусе, селезенке, легочных ЛУ, гранулемах или поражениях в месте инстилляции (рис. 3k). В целом эти данные демонстрируют, что обработка 5-OP-RU макак-резусов, инфицированных Mtb, действительно активирует клетки MAIT посредством стимуляции TCR, что приводит к экспрессии Ki67 и PD-1, но не вызывает их экспансии.

Лечение 5-OP-RU приводит к дисфункции клеток MAIT у инфицированных Mtb макак

Затем мы оценили влияние лечения 5-OP-RU на функцию клеток MAIT. Клетки из БАЛ или крови стимулировали 5-OP-RU или ФМА/иономицином, а продукцию IFN-γ, TNF-α, IL-17A и GM-CSF измеряли путем окрашивания внутриклеточных цитокинов (рис. 4a). Подавляющее большинство клеток MAIT как в крови, так и в БАЛ продуцировали цитокины после стимуляции PMA/иономицином (рис. 4b–d). Однако до инстилляции 5-OP-RU наблюдались значительные различия в реакциях БАЛ и клеток MAIT крови после стимуляции 5-OP-RU in vitro. Приблизительно 75% клеток MAIT в БАЛ продуцировали цитокины при стимуляции 5-OP-RU, в то время как только ~ 10% циркулирующих клеток MAIT были способны реагировать (рис. 4b–d). После обработки макак клетки BAL MAIT у животных, получавших 5-OP-RU, быстро теряли способность реагировать на повторную стимуляцию in vitro с помощью 5-OP-RU, в то время как клетки MAIT у макак, получавших PBS, сохраняли свою способность продуцировать цитокины (рис. 4б-г). Напротив, PMA/иономицин индуцировал одинаковые уровни продукции цитокинов клетками MAIT как у макак, получавших PBS, так и у макак, получавших 5-OP-RU, хотя наблюдалась тенденция к снижению в очень поздние моменты времени у животных, получавших 5-OP-RU. Рис. 4b–d). Клетки MAIT из легочных ЛУ, поражений в месте инстилляции в легких, БАЛ и индивидуально удаленных гранулем, выделенных при вскрытии, также показали снижение цитокин-продуцирующей функции после повторной стимуляции in vitro с помощью 5-OP-RU и в меньшей степени после повторной стимуляции с помощью PMA/ иономицин (рис. 4д, е).

Рис. 4: Лечение 5-OP-RU приводит к дисфункции клеток MAIT у инфицированных Mtb макак.

a Пример Графики FACS окрашивания внутриклеточных цитокинов тетрамера MR1/5-OP-RU ⁺ клеток из BAL (ID животного: Dh5X) после стимуляции in vitro 5-OP-RU в течение 6 часов. b Пример Графики FACS окрашивания внутриклеточных цитокинов клеток MAIT из BAL после стимуляции in vitro 5-OP-RU. c , d Сводные графики процента клеток MAIT, которые являются эфиром IFN-γ ⁺, TNF-α ⁺, IL-17A ⁺ или GM-CSF ⁺ в БАЛ (b) или крови (c) после стимуляции in vitro 5-OP-RU или ПМА/иономицин (ПМА/ИОН). e , f Графики, показывающие процент клеток MAIT, которые представляют собой эфир IFN-γ ⁺ , TNF-α ⁺ , IL-17A ⁺ или GM-CSF ⁺ после стимуляции in vitro с 5-ОП-РУ ( d ) или ПМА/иономицин ( е ) в указанных тканях при вскрытии. Каждый символ представляет отдельный образец ткани указанного животного. * р  < 0,05, ** р  < 0,01, *** р  < 0,001, **** р  < 0,0001.

Изображение в натуральную величину

Эти данные демонстрируют несколько важных моментов. Во-первых, до инфицирования функция клеток MAIT после стимуляции 5-OP-RU существенно различается между различными тканями, при этом клетки MAIT легких демонстрируют более высокий уровень чувствительности по сравнению с клетками в кровотоке. Во-вторых, лечение макак, инфицированных Mtb, с помощью 5-OP-RU приводит к резкому снижению функциональности легочных клеток MAIT. Наконец, функциональный дефект может быть преодолен до определенной степени, если TCR обойден путем стимуляции вторичными мессенджерами, такими как PMA / иономицин. Следовательно, вместо ожидаемого увеличения клеточных ответов MAIT после обработки 5-OP-RU клетки MAIT вошли в состояние, подобное истощению.

Лечение 5-OP-RU макак, инфицированных Mtb, не усиливает обычный адаптивный иммунный ответ

Затем мы исследовали влияние лечения 5-OP-RU на обычный адаптивный иммунный ответ. Мы обнаружили, что не было различий в кинетике Mtb-специфических ответов Т-клеток CD4 в дыхательных путях, измеренных с помощью окрашивания внутриклеточных цитокинов на IFN-γ и TNF-α после повторной стимуляции мегапулами пептидов Mtb (рис. 5a, b). Точно так же не было очевидного влияния лечения 5-OP-RU на кинетику Mtb-специфических CD8 Т-клеток в БАЛ (рис. 5c, d). Также не было влияния введения 5-OP-RU на величину Mtb-специфических CD4 и CD8 Т-клеток в крови, селезенке, лимфатических узлах, гранулемах или поражениях в месте инстилляции при вскрытии (рис. 5e, f). Предыдущее исследование показало, что клетки MAIT могут напрямую помогать В-клеткам у макак-резусов, ²⁴ , поэтому мы также измерили Mtb-специфические ответы IgG в сыворотке. Однако не было четкой разницы в ответах антител между обработанными и необработанными животными (рис. 5g). В совокупности эти данные показывают, что стимуляция клеток MAIT во время инфекции Mtb не усиливала Mtb-специфические обычные адаптивные иммунные ответы.

Рис. 5: Обработка 5-OP-RU макак, инфицированных Mtb, не усиливает обычные адаптивные иммунные реакции.

a Пример Графики FACS окрашивания внутриклеточных цитокинов CD4 T-клеток из BAL после стимуляции in vitro мегапулом пептида MTB300. b Сводные графики процента CD4 Т-клеток в БАЛ, которые являются IFN-γ ⁺ TNF-α ⁺ после стимуляции in vitro. c Пример Графики FACS внутриклеточного окрашивания цитокинов CD8 T-клеток из BAL после стимуляции in vitro мегапулом пептидов MHC-I Mtb. d Сводные графики процента CD8 Т-клеток в БАЛ, которые являются IFN-γ ⁺ TNF-α ⁺ после стимуляции in vitro. Графики, показывающие процентное содержание IFN-γ ⁺ TNF-α ⁺ Т-клетки CD4 ( e ) или Т-клетки CD8 ( f ) в указанных тканях при вскрытии. Каждый символ представляет отдельный образец ткани указанного животного. г Mtb-специфический гуморальный ответ после инфицирования. Уровни IgG в плазме, специфичные к антигенам Mtb, рассчитывали путем вычитания фоновых значений, полученных в образцах до заражения.

Изображение полного размера

Лечение легких 5-OP-RU не вызывает существенных изменений микробиоты кишечника

Из-за роли клеток MAIT в участках слизистой оболочки и способности клеток MAIT распознавать молекулы микробного происхождения была выдвинута гипотеза о тесном взаимодействии между клетками MAIT и микробиотой. ²⁵ Действительно, недавняя работа продемонстрировала, что микробиота играет решающую роль в развитии клеток MAIT на моделях мышей. ^6,26 Поэтому мы стремились выяснить, влияет ли лечение 5-OP-RU на микробиом. Образцы фекалий были собраны у всех 10 макак до и после заражения и лечения. Состав микробиоты был охарактеризован с помощью секвенирования 16 S рРНК. Мы обнаружили, что альфа-разнообразие (разнообразие внутри образца) микробиоты менялось в ходе эксперимента как в группах, получавших PBS, так и в группах, получавших 5-OP-RU (дополнительная рис. 1A, левая панель). Мы не обнаружили, что альфа-разнообразие микробиома в моменты времени после лечения PBS или 5-OP-RU значительно отличается друг от друга или от их соответствующих микробиомов до заражения и инфицирования (дополнительный рисунок 1A, правая панель). Точно так же структура сообщества микробиоты после обработки 5-OP-RU существенно не отличалась от таковой у животных, получавших PBS (дополнительная рис. 1B). Однако визуализация относительного обилия микробных таксонов в течение экспериментального периода времени показала изменения в составе кишечной флоры, хотя и несовместимые между животными в группе лечения (дополнительный рисунок 1C). Было установлено, что несколько таксонов имеют разную распространенность при сравнении животных, получавших PBS или 5-OP-RU, с их соответствующими микробиомами до заражения (дополнительная рис. 1D). Важно отметить, что мы обнаружили обогащение только трех бактериальных семейств, Gstranaerophilales, Family XIII и Paludibacteraceae, и одного семейства, vadin BE9. 7, который должен быть истощен после обработки 5-OP-RU по сравнению с введением PBS (дополнительный рисунок 1D). В целом, эти анализы показывают, что лечение 5-OP-RU приводит лишь к минимальным изменениям микробиоты кишечника макак-резусов.

Блокада PD-1 частично восстанавливает функцию клеток MAIT, но не увеличивает их размножение после вакцинации 5-OP-RU+CpG у неинфицированных макак. Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), выделенные от неинфицированных животных, стимулировали in vitro с помощью 5-OP-RU в течение 6 дней. В соответствии с предыдущими выводами у макак с косичками,

²⁷ Клетки MAIT макака-резуса пролиферировали аналогично клеткам MAIT человека во время стимуляции in vitro (дополнительная рис. 2), что указывает на то, что клетки MAIT макака не являются однозначно непролиферативными в ответ на стимуляцию TCR.

Затем мы вакцинировали неинфицированных макак 5-OP-RU+CpG, используя более низкую дозу 5-OP-RU, примерно эквивалентную дозе, которую мы ранее использовали в наших экспериментах на мышиной модели (0,5  мкг/кг) (рис. 6a). Это позволило нам проверить три возможных объяснения плохой реакции MAIT после лечения макак, инфицированных Mtb, 5-OP-RU. Во-первых, лечение неинфицированных макак позволило нам выяснить, подавляет ли сама инфекция Mtb способность клеток MAIT реагировать. Во-вторых, снижение дозы в десять раз позволило нам проверить возможность того, что приведенные выше результаты были связаны с эффектом, подобным высокой толерантности зоны. Наконец, было показано, что клетки MAIT регулируются PD-1 во время туберкулеза человека, ²⁸ , поэтому мы включили группу макак, которым вводили блокирующие антитела против PD-1 во время вакцинации 5-OP-RU, чтобы выяснить, была ли активация PD-1 причиной плохой реакции клеток MAIT in vivo.

Рис. 6: Блокада PD-1 частично восстанавливает функцию клеток MAIT, но не экспансию после вакцинации 5-OP-RU+CpG у неинфицированных макак.

a Неинфицированных животных интратрахеально лечили 5-OP-RU+CpG вместе с IgG макака-резуса ₄ контроль изотипа или приматизированное антитело против PD-1. b Пример Графики FACS экспрессии PD-1 на клетках MAIT в BAL. c Сводный график, показывающий geoMFI PD-1 в ячейках MAIT в BAL. d Кинетика частоты клеток MAIT среди клеток CD3 ⁺ в БАЛ. e Пример Графики FACS экспрессии Ki-67 на клетках MAIT в BAL до лечения и через 1 неделю после лечения. f Процент клеток Ki-67 ⁺ MAIT в БАЛ. г Пример Графики FACS экспрессии Ki-67 на клетках MAIT в крови до лечения и через 1 неделю после лечения. ч Процент клеток Ki-67 ⁺ MAIT в крови. i Пример Графики FACS окрашивания внутриклеточных цитокинов клеток MAIT из BAL после стимуляции in vitro 5-OP-RU. J Процент клеток MAIT, представляющих собой эфир IFN-γ ⁺ , TNF-α ⁺ или IL-17A ⁺ в БАЛ после стимуляции in vitro 5-OP-RU. * р  < 0,05, ** р  < 0,01, *** р  < 0,001, **** р  < 0,0001.

Изображение в полный размер

Вакцинация 5-OP-RU+CpG привела к резкому усилению PD-1 у животных, получавших изотипический контроль, что указывает на то, что эта вакцинация эффективно стимулировала клетки MAIT (рис. 6b, c). Окрашивание PD-1 было значительно снижено на клетках MAIT от животных, получавших анти-PD-1, предположительно в результате того, что PD-1 клеточной поверхности был занят блокирующим PD-1 антителом (рис. 6b, c). Подобно тому, что наблюдалось после лечения макак, инфицированных Mtb, клетки MAIT не размножались в дыхательных путях после вакцинации, а лечение анти-PD-1 не влияло на частоту клеток MAIT (рис. 6d). Хотя клетки MAIT не размножались, Ki-67 значительно активировался в клетках MAIT как в ЖБАЛ, так и в крови после вакцинации (рис. 6e–h). Блокада PD-1 вместе с вакцинацией, возможно, немного снизила экспрессию Ki-67 в клетках BAL MAIT и задержала его пиковую экспрессию в циркулирующих клетках MAIT, но было относительно небольшое различие в экспрессии Ki-67 у животных, получавших анти-PD-рецепторы. 1. В совокупности эти данные показывают, что вакцинация макак-резусов 5-OP-RU+CpG приводит к распознаванию антигена клетками MAIT и побуждает их вступать в клеточный цикл, но не приводит к их экспансии.

В разные моменты времени после вакцинации мы также повторно стимулировали клетки из дыхательных путей с помощью 5-OP-RU in vitro и измеряли функциональность клеток MAIT с внутриклеточным окрашиванием цитокинов. Опять же, мы обнаружили, что клетки MAIT претерпели значительное снижение своего потенциала продукции цитокинов после введения 5-OP-RU (рис. 6i, j). Интересно, что блокада PD-1 частично восстанавливала функцию клеток MAIT через 4 недели после лечения, указывая на то, что потеря эффекторных функций, но не пролиферация, была частично обусловлена ​​экспрессией PD-1. Таким образом, отсутствие экспансии клеток MAIT и вызванное антигеном снижение функциональности клеток MAIT не было связано с наличием инфекции Mtb и было очень похоже, несмотря на 10-кратное снижение дозы 5-OP-RU. Более того, экспрессия PD-1 была частично ответственна за потерю функции клеток MAIT, но не играла роли в их плохой экспансии.

Обсуждение

Ранее мы показали, что обработка мышей, инфицированных Mtb, агонистом TCR клеток MAIT 5-OP-RU приводит к значительному размножению клеток MAIT и снижению бактериальной нагрузки в легких, ¹⁴ , что побудило нас к дальнейшей оценке трансляционной способности Клеточная направленная терапия MAIT во время туберкулеза на модели макаки-резуса. В то время как ни одно контрольное животное не было потеряно до заранее определенной конечной точки, у трех из пяти обработанных животных развился дистресс, связанный с бронхоконстрикцией после инстилляции 5-OP-RU, и их необходимо было подвергнуть ранней эвтаназии. Во всех случаях это, по-видимому, было связано с столкновением увеличенных ЛУ с дыхательными путями, поэтому лечение 5-OP-RU могло усугубить заболевание у этих животных. Однако было показано, что макаки-резусы особенно склонны к развитию туберкулезной лимфаденопатии, ^21,22 и бактериальная нагрузка существенно не увеличивалась у животных, у которых развилась болезнь на ранней стадии. Хотя небольшие эффекты трудно обнаружить при размерах групп, которые могут быть достигнуты в исследованиях aBSL3 NHP, не было очевидного биологического эффекта на клетки MAIT, которому мы могли бы приписать заболевание лимфатических узлов у обработанных животных. Поэтому мы интерпретируем этот результат с осторожностью. Для более точного установления причинно-следственной связи между лечением 5-OP-RU и лимфаденопатией у макак потребуется более крупное исследование. Несмотря на это, очевидно, что лечение 5-OP-RU у макак не привело к положительным результатам, которые мы наблюдали у мышей. Лечение 5-OP-RU не увеличило количество клеток MAIT, а вместо этого только привело их в функционально истощенное состояние. Это не было результатом инфекции Mtb, так как вакцинация неинфицированных макак инстилляцией 5-OP-RU (с адъювантом CpG) в легкие также не увеличивала частоту клеток MAIT и также приводила к потере ими способности продуцировать цитокины. . Функциональная инактивация клеток MAIT после введения 5-OP-RU in vivo во время туберкулеза и вакцинации была связана с активацией коингибирующего рецептора PD-1. Поэтому мы спросили, может ли блокада PD-1 усилить клеточный ответ MAIT после легочной вакцинации 5-OP-RU+CpG. Хотя блокада PD-1 не приводила к экспансии клеток MAIT, она частично облегчала потерю ими функции. Следовательно, в отличие от экспансии клеток MAIT, обычно наблюдаемой у мышей после введения 5-OP-RU, у макак-резусов клетки MAIT не пролиферируют и подвергаются функциональной инактивации своей цитокин-продуцирующей активности. Наше исследование раскрывает важную загадку. То есть, в то время как клетки MAIT очень слабо стимулируются инфекцией Mtb, ^14,15,23,29 Попытки стимулировать ответы MAIT путем обработки макак дополнительным лигандом TCR только снижают их функциональность.

Предыдущие исследования зафиксировали нарушения функции клеток MAIT во время инфекции, рака и сепсиса. ^{30,31,32,33,34,35,36,37,38,39} Наши данные, показывающие функциональные дефекты клеток MAIT, непосредственно возникающие в результате стимуляции TCR, указывают на то, что часть дисфункции MAIT, наблюдаемая в этих условиях, может быть результатом увеличения антигена MAIT. стимуляция, а не процессы свидетелей, связанные с болезнью. Потеря функции клеток MAIT, которая происходит в этих сообщениях и здесь после лечения 5-OP-RU, напоминает истощение вирусных и опухолеспецифических обычных CD8 T-клеток. Однако неясно, является ли это одним и тем же явлением по нескольким причинам. Истощение обычных Т-клеток CD8 представляет собой уникальное состояние дифференцировки, которое возникает в период хронической антигенной стимуляции после первоначального клонального выброса высокофункциональных эффекторных клеток. ⁴⁰ После обработки 5-OP-RU клетки MAIT никогда не подвергались фазе размножения. Они просто начали быстро терять эффекторные функции после стимуляции in vivo. Более того, способность клеток MAIT в различных тканях продуцировать цитокин после стимуляции 5-OP-RU сильно различается, что затрудняет сравнение с истощением. На исходном уровне клетки MAIT в БАЛ были наиболее функциональными, а в крови — наименее. Даже после того, как клетки легких MAIT подверглись этой функциональной инактивации, они все еще производили больше цитокинов, чем клетки крови до лечения. Другими словами, клетки легких MAIT трудно назвать истощенными, если их аналоги в кровотоке еще менее функциональны в своих лучших проявлениях. Следовательно, неясно, действительно ли легочные клетки MAIT, присутствующие после лечения 5-OP-RU, истощены, как это понимается для обычных Т-клеток. В будущих экспериментах будет важно молекулярно охарактеризовать клетки MAIT до и после лечения 5-OP-RU in vivo, чтобы определить механизмы, ведущие к их дисфункции, и лучше понять природу этого необычного процесса инактивации Т-клеток.

PD-1 является ключевым медиатором истощения обычных пептид-специфических CD8 T-клеток, и несколько биологических препаратов, нацеленных на PD-1 или его лиганды, используются при лечении различных видов рака. Здесь мы наблюдали поразительную активацию PD-1 в клетках MAIT в легких, а также в кровообращении после лечения 5-OP-RU. Блокада PD-1 во время вакцинации 5-OP-RU+CpG, по крайней мере, частично предотвращала снижение функции клеток MAIT. Следовательно, хотя PD-1 действительно играет роль в дисфункции MAIT, вполне вероятно, что другие регуляторные пути также вносят значительный вклад в подавление эффекторных функций клеток MAIT после стимуляции in vivo. Интересно, что дефект в продукции цитокинов после обработки 5-OP-RU инфицированных Mtb животных наблюдался только тогда, когда клетки повторно стимулировали 5-OP-RU, и клетки демонстрировали эквивалентную продукцию цитокинов, как контрольные, при повторной стимуляции PMA/иономицином, что указывает на то, что дефект относится к передаче сигналов через TCR. Возможно, что несколько коингибирующих рецепторов взаимодействуют при инактивации клеток MAIT, поскольку было показано, что клетки MAIT экспрессируют несколько различных молекул иммунных контрольных точек. ^{32,34,35,41,42}

Наша первоначальная цель состояла в том, чтобы получить большие популяции клеток MAIT в легких макак и изучить влияние на инфекцию Mtb. Однако количество клеток MAIT не увеличивалось после инстилляции 5-OP-RU, а блокада PD-1 при антигенной стимуляции не приводила к экспансии клеток MAIT. У мышей клетки MAIT можно легко увеличить примерно в 100 раз, если 5-OP-RU правильно адъювантирован. ^{7,12,14,15,16} В отличие от мышей, неясно, способны ли клетки NHP или MAIT человека подвергаться столь же резкому увеличению in vivo. Исследования вакцинации человека Shigella dysenteriae 1 ⁴³ или BCG, ¹⁸ , а также контролируемые исследования бактериальной инфекции человека с Salmonella Enterica Serovar Typhi ⁴⁴ и S. Enterica Serovar Paratyphi 40014 и 9005 S. Enterica Serovar Paratyphi 40014 . активируются, но не увеличиваются в количестве после бактериальной инфекции. Клетки MAIT в кровотоке также уменьшаются, а не увеличиваются у пациентов с туберкулезом, сепсисом и COVID-19. ^{10,33,36,37,38,39,46,47} Клетки MAIT могут накапливаться с несколько большей частотой в тканях во время некоторых инфекций, как это было показано в БАЛ при ТБ или в брюшной полости во время спонтанного бактериального перитонита, ^48,49 , но, учитывая небольшую величину изменений, о которых сообщалось, это может быть объяснено пополнением из циркуляции, а не расширением, обусловленным TCR. Основываясь на представленных здесь результатах, кажется вероятным, что клетки MAIT не вызывают больших пролиферативных ответов у людей и NHP как часть их типичного ответа на антигенную стимуляцию. Другими словами, наши данные поднимают гипотезу о том, что отсутствие пролиферации и подавление способности продуцировать цитокины после сильного антигенного воздействия может представлять собой не дефект, а нормальную клеточную биологию MAIT in vivo у людей и NHP. Это не умаляет важности клеток MAIT в защите хозяина, поскольку было показано, что дефицит клеток MAIT человека приводит к повышенной восприимчивости к вирусным и бактериальным инфекциям. ⁵⁰ Мы предполагаем, что отсутствие клеточных ответов MAIT, о которых сообщалось здесь и в вышеупомянутой литературе, является полезной адаптацией клеток MAIT, особенно в ответ на внезапное и значительное увеличение доступности лиганда TCR. Учитывая, что клетки MAIT, вероятно, постоянно стимулируются антигенами, полученными из микробиоты, может быть несколько контрольных точек, определяющих их способность увеличиваться в количестве за счет больших клональных всплесков и продуцировать воспалительные цитокины для предотвращения иммунопатологии.

Непонятно, почему результаты лечения 5-OP-RU инфекции Mtb у мышей и макак так сильно отличаются. Это может отражать фундаментальные различия в биологии клеток MAIT между двумя видами или даже различия в частоте их предшественников. Однако это также может быть связано с различиями во внешних факторах клеток MAIT, таких как состав микробиоты или история стимуляции клеток MAIT. Например, на исходном уровне мышиные клетки MAIT у мышей SPF имеют очень низкий или отрицательный уровень PD-1, в то время как клетки MAIT макак экспрессируют значительные уровни PD-1, что указывает на то, что могут быть серьезные различия в уровнях передачи сигналов TCR окружающей среды между мышами. и НХП. Следовательно, клетки MAIT мыши и макака в легких могут находиться в разном функциональном состоянии из-за различий в уровнях персистирующей стимуляции TCR при гомеостазе. Необходимы дополнительные исследования, чтобы лучше понять механизмы, которые регулируют размножение клеток MAIT у макак, чтобы можно было разработать стратегии для индукции больших популяций клеток MAIT in vivo, предполагая, что большое количество активированных клеток MAIT безопасно для NHP и людей. Мы обнаружили, что закапывание 5-OP-RU приводило к резкому усилению Ki-67 в клетках MAIT как в легких, так и в крови, что указывает на то, что клетки MAIT, вероятно, были индуцированы для вступления в клеточный цикл. Разумная гипотеза состоит в том, что оборот клеток MAIT уравновешивался гибелью клеток, что не приводило к чистому увеличению числа клеток. Возможно, что другие адъюванты или другая динамика доставки антигена (например, устойчивая стимуляция низким уровнем 5-OP-RU) могут привести к размножению клеток MAIT in vivo. Наконец, в этом исследовании мы использовали только один антиген MAIT, поэтому важно проверить другие лиганды MR1 на их способность стимулировать размножение клеток MAIT у макак.

Учитывая невозможность размножения клеток MAIT, мы не смогли проверить гипотезу о том, что большие популяции клеток MAIT могут защищать от туберкулеза в этом исследовании на макаках. Таким образом, остается возможным, что терапия, нацеленная на клетки MAIT, может быть полезной при инфекции Mtb, но это исследование подчеркивает значительные препятствия для изучения роли терапии и вакцинации на основе клеток MAIT in vivo. Хотя модель на мышах является мощным инструментом, который многое рассказал о клеточной биологии MAIT, ⁵¹ могут быть важные случаи, когда клеточные ответы MAIT у мышей могут не отражать ответы у макак и, соответственно, также не отражать клеточные ответы MAIT in vivo у людей. Эти данные показывают, что важно, чтобы гипотезы, касающиеся клеточной биологии MAIT, разработанные на мышах, были дополнительно исследованы на людях, если это возможно, и на моделях NHP, когда это необходимо. Разработка стратегий для индукции больших популяций высокофункциональных клеток MAIT у макак необходима для оценки их клинического потенциала в качестве мишеней для вакцин и терапевтических средств у людей.

Материалы и методы

Макаки-резусы

Шестнадцать здоровых макак-резусов из племенной колонии NIAID на острове Морган были отобраны для этого исследования и имели отрицательный результат туберкулиновой кожной пробы. Животных содержали в стеллажах для биозащиты нечеловеческих приматов и содержали в соответствии с Законом о благополучии животных, Руководством по уходу и использованию лабораторных животных и всеми применимыми нормами, стандартами и политиками в полностью аккредитованном AAALAC International уровне биобезопасности животных 3 уровня. Все процедуры проводились с использованием соответствующих анестетиков, перечисленных в утвержденном Комитетом по уходу и использованию животных NIAID DIR (ACUC) предложении исследования на животных LPD-25E. Методы эвтаназии соответствовали Руководству AVMA по эвтаназии и критериям конечной точки, перечисленным в одобренном NIAID DIR ACUC предложении по исследованию животных LPD-25E.

Доноры крови человека

Образцы крови здоровых добровольцев были получены из Банка крови Национального института здравоохранения в соответствии с протоколами, утвержденными Институциональным наблюдательным советом как NIAID, так и Департамента трансфузионной медицины. PBMC выделяли центрифугированием в плотностях Ficoll-Paque (GE Life Sciences) и хранили при температуре -80°C до последующего использования.

Заражение Mtb и лечение 5-OP-RU

Животных инфицировали 120–150 колониеобразующими единицами (КОЕ) штамма Mtb h47 Rv . Для заражения животных анестезировали и 2 мл PBS, содержащего бактерии, бронхоскопически инстиллировали в правую нижнюю долю легкого. Инфекционную дозу подтверждали посевом аликвот на чашки с агаром 7 ч 21 мин. Для лечения Mtb-инфекции 5 мкг/кг массы тела 5-OP-RU ¹⁴ , разведенный в 2 мл PBS, вводили интратрахеально один раз в неделю в течение 9 недель, начиная с 6 недели после заражения. В эксперименте по блокаде PD-1 неинфицированные животные получали интратрахеально один раз в неделю в течение 4 недель 0,5 мкг/кг массы тела 5-OP-RU и 100 мкг CpG ODN 2006 (InvivoGen), смешанного с 10 мкг/кг массы тела. вес либо IgG ₄ изотипического контроля макака-резуса (DSPR4), полученного из NHP Reagent Resource, либо антитела анти-PD-1 (гуманизированный клон Eh22 каппа-вариабельные домены с каппа-макака-резуса и IgG ₄ константных областей). ⁵²

ПЭТ/КТ-сканирование и анализ данных

Резус визуализировали до заражения и каждые две недели, начиная с 5-й недели после заражения, максимум 7 ПЭТ/КТ-сканирований (рис. 1a). Визуализирующие исследования проводились с оптимизированной дозой [ ¹⁸ F]-ФДГ (0,5 мКи/кг), вводимой внутривенно, как описано ранее. ⁵³ КТ легких в 360 проекциях была получена во время задержки дыхания ~50 с на PT/CT сканере LFER 150 (Mediso Inc, Будапешт, Венгрия). Во время искусственной вентиляции легких был получен 20-минутный набор данных ПЭТ на поле зрения, а необработанные данные КТ и ПЭТ были реконструированы с использованием программного обеспечения Nucline (Mediso, Inc, Будапешт, Венгрия) для создания отдельных файлов DICOM, которые были совместно зарегистрированы с помощью MIM. Maestro (версия 6.2, MIM Software Inc, Кливленд, Огайо). Исследуемый объем легкого (VOI) был определен на КТ-изображении, а VOI был перенесен на изображение PET, как описано ранее, для определения общего [ ¹⁸ Поглощение F]-FDG, называемое полным гликолизом легких (TLG). ⁵³ Анализ бремени болезни включал аномальный TLG легкого и согласованную область прикорневых и субкаринальных ЛУ каждого животного со стандартизированным значением поглощения выше фона. Легочное поглощение [ ¹⁸ F]-ФДГ измеряли путем создания VOI в MIM в ЛУ с поглощением в области, окружающей карину, как описано White et al. ⁵⁴ . Два читателя независимо друг от друга выполняли анализ изображений для каждого животного. Трехмерные проекции были сгенерированы с помощью Osirix v 5.9.программное обеспечение (Pixmeo, Женева, Швейцария).

Для измерения сужения бронхов, наблюдаемого у инфицированных животных, применялись два подхода. В первом измеряли диаметры наиболее суженной области просветов главных правого и левого бронхов в аксиальной плоскости КТ с помощью встроенной линейки MIM спереди назад и слева направо. Измерения сравнивали с исходными измерениями сканирования в этой аксиальной плоскости, чтобы рассчитать процент окклюзии. Полученные проценты усреднялись, чтобы получить средний процент окклюзии в каждый момент времени. Во втором методе объем бронха от каринальной бифуркации до 2,3  см ниже от каринальной бифуркации (область, содержащая области окклюзии у макак при исследовании) был рассчитан с использованием функции увеличения области MIM, установленной на захват просвета бронхов (HU от -1024 до -700), который настраивался вручную, если программа пропускала небольшие участки дыхательных путей. Объемы правого и левого просвета суммировали и сравнивали с исходным объединенным объемом бронхов, после чего рассчитывали процент окклюзии. См. также дополнительный рис. 3.

Выделение клеток и стимуляция in vitro

Образцы крови собирали в пробирки с ЭДТА, а РВМС выделяли центрифугированием в плотности Ficoll-Paque. Образцы БАЛ пропускали через клеточный фильтр с размером ячеек 100 мкм, осаждали и подсчитывали для анализа. Доли легкого и ткани трахеи/бронхов измельчали ​​с использованием диссоциатора тканей GentleMACS (Miltenyi Biotec) и подвергали ферментативному расщеплению в инкубаторе-шейкере при 37°C в течение 40 мин в среде RPMI, содержащей 1 мг/мл коллагеназы D (Roche-Diagnostics), 1 мг/мл гиалуронидазы и 50 ЕД/мл ДНКазы I (Sigma Aldrich). Затем суспензии пропускали через клеточный фильтр с отверстиями 100 мкм и обогащали лимфоцитами с использованием центрифугирования в градиенте плотности 40% Percoll. Лимфатические узлы и селезенки диссоциировали с помощью диссоциатора тканей GentleMACS. Гранулемы индивидуально вырезали из легких, и образцы, используемые для анализа проточной цитометрии, пропускали через клеточный фильтр с размером ячеек 100 мкм. Аликвоты из всех образцов серийно разбавляли и высевали на чашки с агаром 7:21 для количественного определения КОЕ. Клетки стимулировали в среде X-vivo 15 (Lonza) с добавлением 10% FCS при 37 °C либо с PMA/иономицином (коктейль для активации лейкоцитов, BD Biosciences) в течение 3 часов, 5OP-RU (50 нМ) или MHC-I ³⁷ и MHC-II (MTB300) ⁵⁵ Мегапулы пептидов Mtb (1 мкг/мл и 2 мкг/мл соответственно) в течение 6 часов в присутствии брефельдина А и монензина (eBioscience). Для оценки пролиферации клеток in vitro криоконсервированные РВМС неинфицированных животных (ID: MMX, ZJ29, ZE63, ZG40, H705, 42863) до лечения 5-OP-RU или здоровых доноров размораживали и культивировали при 5 × 10 ⁶ клеток/мл в среде X-vivo 15 с добавлением 10% FCS, 10 нг/мл рекомбинантного человеческого IL-2, 100 ЕД/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мкг/мл амфотерицина В. Клетки стимулировали 10 нМ 5-OP-RU и свежую среду (без 5-OP-RU) добавляли каждые 2 дня. На 6-й день клетки собирали для анализа, как описано ниже.

Проточная цитометрия

Окрашивание тетрамерами проводили путем инкубации 1 × 10 ⁶ клеток при 37°C в течение 30 мин с тетрамером MR1/5-OP-RU макака-резуса в среде X-vivo 15, содержащей 10% FCS и монензин. Тетрамеры были получены на основной установке тетрамеров NIAID (Университет Эмори, Джорджия). Антитела, меченные флуорохромом, используемые для проточного цитометрического анализа, перечислены в дополнительной таблице 1. Поверхностные антигены и мертвые клетки окрашивали в PBS + 1% FCS + 0,1% азида натрия в течение 20 мин при 4 °C. Для окрашивания внутриклеточных цитокинов и транскрипционных факторов клетки фиксировали и пермеабилизировали с помощью набора буферов для окрашивания транскрипционных факторов Foxp3 (eBioscience) и окрашивали в течение 1 ч при 4°C. Образцы были получены на FACSymphony (BD Biosciences), а данные были проанализированы с использованием FlowJo 10 (Treestar).

Измерение титра Mtb-специфического IgG

Девяносто-шестилуночные планшеты для ELISA покрывали лизатом цельных клеток Mtb (штамм h47Rv, BEI Resources) в концентрации 10  мкг/мл, разведенным в PBS, в течение 1 часа при 37 °C. Планшеты промывали и блокировали в течение ночи при 4°С блокирующим буфером (5% сухого молока + 4% сывороточного буфера в PBS Tween-20). Затем планшеты промывали и добавляли образцы плазмы в серийных разведениях 1:3, начиная с разведения 1:10 с 4% сывороточным буфером, и инкубировали в течение 1 часа при 37°С. После промывки планшеты инкубировали с добавлением козьего антиобезьяньего IgG (H + L)-HRP (Novus Bio) в разведении 1:1000 в 4% сывороточном буфере в течение 1 ч при 37°C. Планшеты промывали и добавляли субстратный раствор 1-Step Ultra-TMB ELISA (Thermo Scientific) для проявления планшетов. Реакцию останавливали добавлением 0,5 М серной кислоты и измеряли ОП при 450 нм. Значение OD каждого базового уровня до заражения вычитали из каждого образца в момент времени после заражения, чтобы рассчитать уровни Mtb-специфического IgG.

Анализ микробиоты

Один образец фекалий до заражения был собран за 2–4 недели до заражения, а другой — в день заражения. Дополнительные образцы собирали через 4, 8, 12 недель после заражения и при вскрытии. Все образцы хранились при температуре -80 °С до завершения эксперимента. ДНК экстрагировали из ~0,05  г фекального материала с использованием мини-набора QIAamp Fast DNA stool Mini (Qiagen, Hilden, Germany), а область V4 гена рРНК 16 s амплифицировали с праймерами 5ʹ-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3ʹ и 5ʹ-GTCTCGTGGGATACTCHTCGGAGATGGTATAATCH последовательно, как описано ранее. ⁵⁶ Необработанные чтения были демультиплексированы, очищены от шума и отфильтрованы на наличие химер с использованием конвейера DADA2/QIIME2 (версия 2-2020.2). ⁵⁷ Обработанные данные дали в среднем ~55 000 считываний/выборку. Анализы альфа- и бета-разнообразия были выполнены с использованием индексов несходства Шеннона и Брея-Кертиса, соответственно, для данных чтения, разреженных до глубины 40 000 чтений/выборка. Таксономическая классификация была выполнена с использованием QIIME2 и базы данных Silva версии 132. ⁵⁸ Дифференциально распространенные таксоны были идентифицированы с использованием линейного дискриминантного анализа (LefSe) и отфильтрованы по линейному дискриминантному показателю (LDA) > 2 и p значение < 0,05 ⁵⁹ .

Количественный анализ и статистический анализ

Все анализы проводились с использованием Prism 8 (программное обеспечение GraphPad). Стьюдентный критерий с двумя выборками использовался для сравнения двух групп, а дисперсионный анализ применялся для сравнения нескольких групп. Если это специально не указано на фигурах, значение p  < 0,05 считалось статистически значимым. Данные представлены как среднее ± SEM.

Ссылки

1. Godfrey, D. I., Koay, H. F., McCluskey, J. & Gherardin, N. A. Биология и функциональное значение клеток MAIT. Нац. Иммунол. 20 , 1110–1128 (2019).

   КАС пабмед Статья Google ученый

2. Келлер, А. Н., Корбетт, А. Дж., Вуббен, Дж. М., Маккласки, Дж. и Россджон, Дж. Клетки MAIT и распознавание MR1-антигена. Курс. мнение Иммунол. 46 , 66–74 (2017).

   КАС пабмед Статья Google ученый

3. Corbett, A.J. et al. Активация Т-клеток временными неоантигенами, происходящими из разных микробных путей. Природа 509 , 361–365 (2014).

   КАС пабмед Статья Google ученый

4. «>

   Treiner, E. et al. Отбор эволюционно консервативных инвариантных Т-клеток, связанных со слизистой оболочкой, с помощью MR1. Природа 422 , 164–169 (2003).

   КАС пабмед Статья Google ученый

5. Lantz, O. & Legoux, F. Клетки MAIT: историческая и эволюционная перспектива. Иммунол. Клеточная биол. 96 , 564–572 (2018).

   КАС пабмед Статья Google ученый

6. Константинидес, М. Г. и др. Клетки MAIT импринтируются микробиотой в раннем возрасте и способствуют восстановлению тканей. Наука 366 , eaax6624 (2019).

   КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

7. Hinks, T. S. C. et al. Активация и эволюция in vivo клеточного транскриптома MAIT у мышей и людей выявила функциональность восстановления тканей. Cell Rep. 28 , 3249–3262 e3245 (2019).

   КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

8. Ленг Т. и др. TCR и воспалительные сигналы настраивают клетки MAIT человека на выполнение специфических функций восстановления тканей и эффекторных функций. Отчет ячейки 28 , 3077–3091 e3075 (2019).

   КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

9. Meierovics, A., Yankelevich, W.J. & Cowley, S.C. Клетки MAIT имеют решающее значение для оптимального иммунного ответа слизистой оболочки при легочной бактериальной инфекции in vivo. Проц. Натл акад. науч. США 110 , E3119–3128 (2013 г.).

   КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

10. Le Bourhis, L. et al. Антимикробная активность ассоциированных со слизистой оболочкой инвариантных Т-клеток. Нац. Иммунол. 11 , 701–708 (2010).

    ПабМед Статья КАС Google ученый

11. Wang, H. et al. Клетки MAIT защищают от легочной инфекции Legionella longbeachae. Нац. коммун. 9 , 3350 (2018).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

12. Chen, Z. et al. Активация и накопление инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой, после инфекции in vivo зависит от микробного синтеза рибофлавина и костимулирующих сигналов. Иммунол слизистых оболочек. 10 , 58–68 (2017).

    КАС пабмед Статья Google ученый

13. Йостен, С.А. и др. Использование донорских нерестриктированных Т-клеток для новых вакцин против туберкулеза. Вакцина 37 , 3022–3030 (2019).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

14. Сакаи, С. и др. MAIT клеточно-направленная терапия инфекции Mycobacterium tuberculosis . Иммунол слизистых оболочек. 14 , 199–208 (2021).

    КАС пабмед Статья Google ученый

15. Ю, Х. и др. Искусственно индуцированные клетки MAIT ингибируют M. bovis БЦЖ, но не M. tuberculosis во время легочной инфекции in vivo. науч. Респ. 10 , 13579 (2020).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

16. Воркас, С. К. и др. Эффективное 5-OP-RU-индуцированное обогащение инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой, в легком мыши не усиливает контроль над аэрозольной инфекцией Mycobacterium tuberculosis . Заразить. Иммун. 89 , e00524–20 (2020).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

17. Рахимпур, А. и др. Идентификация фенотипически и функционально гетерогенных инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой мыши, с использованием тетрамеров MR1. Дж. Экспл. Мед 212 , 1095–1108 (2015).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

18. Сулиман, С. и др. MR1-независимая активация инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой человека, микобактериями. Дж. Иммунол. 203 , 2917–2927 (2019).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

19. Greene, J.M. et al. MR1-рестриктированные инвариантные Т-клетки, ассоциированные со слизистой оболочкой (MAIT), реагируют на микобактериальную вакцинацию и инфекцию у нечеловекообразных приматов. Иммунол слизистых оболочек. 10 , 802–813 (2017).

    КАС пабмед Статья Google ученый

20. Scanga, C.A. & Flynn, J.L. Моделирование туберкулеза у нечеловекообразных приматов. Гавань Колд Спринг. Перспектива. Мед 4 , а018564 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

21. Ганчуа, С.К.С. и др. Лимфатические узлы являются местами длительной бактериальной персистенции в течение 9 лет.0005 Инфекция Mycobacterium tuberculosis у макак. PLoS Патог. 14 , e1007337 (2018).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

22. Maiello, P. et al. Макаки-резусы более восприимчивы к прогрессирующему туберкулезу, чем макаки-крабоеды: количественное сравнение. Заразить. Иммун. 86 , e00505–17 (2018).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

23. Kauffman, K.D. et al. Ограниченное накопление и активация инвариантных Т-клеток, связанных со слизистой оболочкой легких, во время инфекции Mycobacterium tuberculosis у макак-резусов. Заразить. Иммун. 86 , e00431–18 (2018).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

24. Рахман М.А. и др. Ассоциированные со слизистой оболочкой инвариантные Т-клетки (MAIT) обеспечивают помощь В-клеток у вакцинированных и впоследствии инфицированных ВИО макак-резусов. Науч. Респ. 10 , 10060 (2020).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

25. О, Дж. и Унутмаз, Д. Иммунные клетки для наблюдения за микробиотой. Наука 366 , 419–420 (2019).

    КАС пабмед Статья Google ученый

26. Легу, Ф. и др. Микробные метаболиты контролируют развитие тимуса инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой. Наука 366 , 494–499 (2019).

    КАС пабмед Статья Google ученый

27. Juno, J.A. et al. Клетки MAIT активируют альфа4бета7 в ответ на вирус острого обезьяньего иммунодефицита/обезьянью ВИЧ-инфекцию, но устойчивы к периферическому истощению у макак с косичками. Дж. Иммунол. 202 , 2105–2120 (2019).

    КАС пабмед Статья Google ученый

28. Jiang, J. et al. Связанная со слизистой оболочкой функция инвариантных Т-клеток модулируется запрограммированной передачей сигналов смерти-1 у пациентов с активным туберкулезом. утра. Дж. Дыхание. крит. Care Med 190 , 329–339 (2014).

    КАС пабмед Google ученый

29. Bucsan, A. N. et al. Инвариантные Т-клетки, активируемые слизистой оболочкой, не демонстрируют значительных профилей рекрутирования и пролиферации в легких у макак в ответ на инфекцию Микобактерии туберкулеза CDC1551. Tuberculosis (Edinb.) 116S , S11–S18 (2019).

    Артикул КАС Google ученый

30. Leeansyah, E. et al. Активация, истощение и стойкое снижение антимикробной MR1-ограниченной популяции клеток MAIT при хронической инфекции ВИЧ-1. Кровь 121 , 1124–1135 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

31. Hengst, J. et al. Необратимая дисфункция клеток MAIT при хронической инфекции вируса гепатита С, несмотря на успешную безинтерфероновую терапию. евро. Дж. Иммунол. 46 , 2204–2210 (2016).

    КАС пабмед Статья Google ученый

32. Дуан, М. и др. Активированные и истощенные клетки MAIT способствуют прогрессированию заболевания и указывают на неблагоприятный исход при гепатоцеллюлярной карциноме. клин. Рак Рез 25 , 3304–3316 (2019).

    ПабМед Статья Google ученый

33. Trivedi, S. et al. Ассоциированные со слизистой оболочкой инвариантные Т-клетки (MAIT) опосредуют защитные реакции хозяина при сепсисе. Elife 9 , e55615 (2020).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

34. Huang, W. et al. Ассоциированные со слизистой оболочкой инвариантные Т-клетки сильно редуцированы и истощены у людей с хронической инфекцией ВГВ. J. Вирусная гепатит. 27 , 1096–1107 (2020).

    КАС пабмед Статья Google ученый

35. Эллис, А. Л. и др. Клетки MAIT функционально нарушены в модели коинфекции SIV и Mtb у маврикийского макака-крабоеда. PLoS Патог. 16 , e1008585 (2020).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

36. Попугай, Т. и др. Активация и динамика клеток MAIT, связанные с тяжестью заболевания COVID-19. Sci Immunol 5 , eabe1670 (2020).

37. Помазной М. и др. Количественные и качественные изменения CD8(+) MAIT у здоровых лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза. Иммуногоризонты 4 , 292–307 (2020).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

38. «>

    Вонг, Э. Б. и др. Низкие уровни периферических CD161++CD8+ инвариантных Т-клеток, ассоциированных со слизистой оболочкой (MAIT), обнаруживаются при коинфекции ВИЧ и ВИЧ/ТБ. PLoS One 8 , e83474 (2013 г.).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

39. Kwon, Y.S. et al. Ассоциированные со слизистой оболочкой инвариантные Т-клетки численно и функционально дефицитны у пациентов с микобактериальной инфекцией и отражают активность заболевания. Туберкулез (Эдинб.) 95 , 267–274 (2015).

    КАС Статья Google ученый

40. McLane, L.M., Abdel-Hakeem, M.S. & Wherry, E.J. Истощение Т-клеток CD8 при хронической вирусной инфекции и раке. Annu Rev. Immunol. 37 , 457–495 (2019).

    КАС пабмед Статья Google ученый

41. «>

    Dias, J., Leeansyah, E. & Sandberg, J. K. Множественные уровни гетерогенности и разнообразия подмножеств в реакциях клеток MAIT человека на различные микроорганизмы и врожденные цитокины. Проц. Натл акад. науч. США 114 , E5434–E5443 (2017 г.).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

42. Wang, H. et al. IL-23 ко-стимулирует активацию антиген-специфических клеток MAIT и делает возможной вакцинацию против бактериальной инфекции. науч. Иммунол. 4 , eaaw0402 (2019).

    КАС пабмед Статья Google ученый

43. Le Bourhis, L. et al. Клетки MAIT обнаруживают и эффективно лизируют бактериально-инфицированные эпителиальные клетки. PLoS Патог. 9 , e1003681 (2013 г.).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

44. «>

    Салерно-Гонсалвес, Р. и др. Заражение людей диким типом Salmonella enterica Serovar Typhi вызывает изменения в характеристиках активации и самонаведения ассоциированных со слизистой оболочкой инвариантных Т-клеток. Фронт Иммунол. 8 , 398 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

45. Howson, L. J. et al. Клональная экспансия клеток MAIT и формирование репертуара TCR у добровольцев, зараженных Salmonella Paratyphi A. Nat. коммун. 9 , 253 (2018).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

46. Гримальди, Д. и др. Специфическое поведение клеток MAIT среди врожденных Т-лимфоцитов у пациентов в критическом состоянии с тяжелыми инфекциями. Intensive Care Med 40 , 192–201 (2014).

    КАС пабмед Статья Google ученый

47. «>

    Gold, M.C. et al. Инвариантные Т-клетки, ассоциированные со слизистой оболочкой человека, выявляют бактериально инфицированные клетки. PLoS Биол. 8 , e1000407 (2010 г.).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

48. Ибидапо-Обе, О. и др. Связанные со слизистой оболочкой инвариантные Т-клетки перераспределяются в брюшную полость во время спонтанного бактериального перитонита и способствуют воспалению брюшины. Клеточная мол. Гастроэнтерол. Гепатол. 9 , 661–677 (2020).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

49. Вонг, Э. Б. и др. TRAV1-2(+) CD8(+) Т-клетки, включая олигоконические разрастания клеток MAIT, скапливаются в дыхательных путях при туберкулезе человека. Комм. биол. 2 , 203 (2019).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

50. «>

    Howson, L. J. et al. Отсутствие ассоциированных со слизистой оболочкой инвариантных Т-клеток у человека с гомозиготной точечной мутацией MR1. науч. Иммунол. 5 , eabc9492 (2020).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

51. Wang, H., Chen, Z., McCluskey, J. & Corbett, A. J. Модели мышей иллюстрируют клеточную биологию MAIT. мол. Иммунол. 130 , 55–63 (2020).

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

52. Mylvaganam, G.H. et al. Комбинация анти-PD-1 и антиретровирусной терапии обеспечивает терапевтический эффект против SIV. JCI Insight 3 , e122940 (2018).

    Центральный пабмед Статья Google ученый

53. Kauffman, K.D. et al. Дефектное расположение в гранулемах, но не в легких, ограничивает взаимодействие Т-клеток CD4 с макрофагами, инфицированными Mycobacterium tuberculosis , у макак-резусов. Иммунол слизистых оболочек. 11 , 462–473 (2018).

    КАС пабмед Статья Google ученый

54. Уайт, А. Г. и др. Анализ 18FDG ПЭТ / КТ-визуализации как инструмента для изучения инфекции микобактерий туберкулеза и лечения у приматов, отличных от человека. Дж. Виз. Эксп. 56375 (2017).

55. Lindestam Arlehamn, C.S. et al. Количественный анализ сложности ответов Т-клеток CD4, специфичных для патогенов человека, у здоровых M.tuberculosis инфицированных южноафриканцев. PLoS Патог. 12 , e1005760 (2016).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

56. Namasivayam, S. et al. Продольное профилирование выявляет стойкий дисбактериоз кишечника, спровоцированный традиционной противотуберкулезной терапией. Микробиом 5 , 71 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

57. Caporaso, J.G. et al. QIIME позволяет анализировать данные секвенирования с высокой пропускной способностью. Нац. Методы 7 , 335–336 (2010).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

58. Quast, C. et al. Проект базы данных генов рибосомной РНК SILVA: улучшенная обработка данных и веб-инструменты. Рез. нуклеиновых кислот. 41 , Д590–596 (2013).

    КАС пабмед Статья Google ученый

59. Сегата, Н. и др. Открытие и объяснение метагеномных биомаркеров. Геном Биол. 12 , Р60 (2011).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарны доктору Рашиде Мур и доктору Ричарду Герберту за оказание ветеринарной помощи животным в этом исследовании. Мы благодарим всех сотрудников Национальных институтов аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID), отделения сравнительной медицины, уровня биобезопасности животных 3, за их техническую поддержку. Эта работа была поддержана Программой внутренних исследований NIAID. Г.Дж.Ф. поддерживается P01AI056299 и R37AI112787.

Информация об авторе

Авторы и организации

1. T Секция биологии лимфоцитов, Лаборатория паразитарных заболеваний, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний, Бетесда, Мэриленд, США

   Шунсуке Сакаи, Никиана Э. Лора, Кауфф , Danielle E. Dorosky & Daniel L. Barber

2. Отдел исследований туберкулеза, лаборатория клинической иммунологии и микробиологии, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний, Бетесда, Мэриленд, США

   Сангми О, Лаура Э. Виа и Клифтон Э. Барри III

3. Секция иммунобиологии, Лаборатория паразитарных заболеваний, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний, Бетесда, Мэриленд, США

   Шиваранджани Намасиваям 97 10043 904 043

   Отдел внутренних исследований, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США

   Фелипе Гомес, Джоэл Д. Флигл, Джанард Л. Блич, Эшли Л. Батлер, Эммуануаль К. Даяо, Микаэла К. Пьяцца, Кэтлин М. Реполи, Бекки Ю. Слоун, Мишель К. Сатфин, Александра М. Ватхауэр, Эйприл М. Уокер, Даниэль М. Вайнер, Майкл Дж. Вудкок и Лаура Э. Виа

4. Институт инфекционных заболеваний и молекулярной медицины Кейптаунского университета, Кейптаун, Южная Африка

   Лаура Э. Виа и Клифтон Э. Барри III

5. Центр инфекционных заболеваний, Ла-Хойя Институт иммунологии, Ла Джолла, Калифорния, США

   Сесилия С. Линдестам Арлехамн и Алессандро Сетте

6. Медицинский факультет Калифорнийского университета в Сан-Диего, Ла-Хойя, Калифорния, США

   Алессандро Сетте

7. Отделение медицинской онкологии, Онкологический институт Дана-Фарбер, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США этот автор в PubMed Google Scholar

8. Nickiana E. Lora

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

9. Кейт Д. Кауфман

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

10. Danielle E. Dorosky

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

11. Sangmi Oh

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

12. Sivaranjani Namasivayam

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

13. Felipe Gomez

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

14. Joel D. Fleegle

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

15. Cecilia S. Lindestam Arlehamn

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

16. Alessandro Sette

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

17. Alan Sher

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

18. Gordon J. Freeman

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

19. Laura E. Via

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

20. Clifton E. Barry III

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

21. Дэниел Л. Барбер

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Consortia

Программа визуализации туберкулеза

• Janard L. Bleach
• , Ashley L. Butler
• , Emmuanual K. Dayao
• , JOEL D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. D. Gleg. 9043, 9043. К. Пьяцца
• , Кэтлин М. Реполи
• , Бекки Ю. Слоун
• , Мишель К. Сатфин
• , Александра М. Ваттхауэр
• , Лаура Э. Виа
• , апрель М. Уокер
• , Даниэль М. Вейнер
• и Майкл Дж. Вудкок

Взносы

9 0004 Концептуализация и методика и D.L. Расследование, S.S., N.E.L., K.D.K., D.E.D., S.N., F.G., J.D.F., NIAID/DIR TBIP и L.E.V.; Resources, SO, CSL, AS, GJF и CEB; Первоначальный проект, SS и DLB; Написание — рецензирование и редактирование, S.S., KDK, SN, FG, CSL, A.S., GJF, LEV, CEB и DLB; Визуализация, С.С., С.Н., Ф.Г. и Дж.Д.Ф.; Надзор, D.L.B., A.S., L.E.V. и C.E.B.; Финансирование приобретения, D.L.B., A.S., G.J.F., L.E.V. и C.E.B.

Автор, ответственный за переписку

Дэниел Л. Барбер.

Декларации этики

Конкурирующие интересы

D.L.B. имеет патенты на пути PD-1/PD-1. Г.Дж.Ф. имеет патенты/ожидающие лицензионные отчисления на путь PD-1/PD-L1 от Roche, Merck MSD, Bristol-Myers-Squibb, Merck KGA, Boehringer-Ingelheim, AstraZeneca, Dako, Leica, Mayo Clinic и Novartis. Г.Дж.Ф. работал в консультативных советах Roche, Bristol-Myers-Squibb, Xios, Origimed, Triursus, iTeos, NextPoint, IgM, Jubilant и GV20. Г.Дж.Ф. имеет долю в Nextpoint, Triursus, Xios, iTeos, IgM, GV20 и Geode.

Дополнительная информация

Примечание издателя Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Дополнительная информация

Дополнительная информация

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате. , при условии, что вы укажете первоначальных авторов и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной строке материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или выходит за рамки разрешенного использования, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Ru(II) Полипиридильные комплексы, полученные из тетрадентатных вспомогательных лигандов для эффективной фотоклетки

1. Klán P, Šolomek T, Bochet CG, Blanc A, Givens R, Rubina M, Popik V , Костиков А., Вирц Дж. Фотоудаляемые защитные группы в химии и биологии: механизмы реакции и эффективность. Chem Rev. 2013; 113:119–191. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

2. Ciesienski KL, Franz KJ. Ключи для отпирания фотолабильных металлосодержащих клеток. Angew Chem, Int Ed. 2011;50:814–824. [PubMed] [Академия Google]

3. Ли Х-М, Ларсон Д.Р., Лоуренс Д.С. Освещая химию жизни: дизайн, синтез и применение «клеточных» и родственных светочувствительных соединений. ACS Chem Biol. 2009; 4: 409–427. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

4. Дейтерс А. Принципы и приложения фотохимического контроля клеточных процессов. ХимБиоХим. 2010; 11:47–53. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

5. Brieke C, Rohrbach F, Gottschalk A, Mayer G, Heckel A. Инструменты, управляемые светом. Angew Chem, Int Ed. 2012;51:8446–8476. [PubMed] [Академия Google]

6. Mayer G, Heckel A. Биологически активные молекулы с «выключателем света» Angew Chem, Int Ed. 2006;45:4900–4921. [PubMed] [Google Scholar]

7. Niesel J, Pinto A, Peindy N’Dongo HW, Merz K, Ott I, Gust R, Schatzschneider U. Фотоиндуцированное высвобождение CO, клеточное поглощение и цитотоксичность трис(пиразолил)метана (tpm) трикарбонильный комплекс марганца. хим. коммун. 2008: 1798–1800. [PubMed] [Google Scholar]

8. Bahreman A, Limburg B, Siegler MA, Bouwman E, Bonnet S. Самопроизвольное образование в темноте и индуцированный видимым светом разрыв связи Ru–S в воде: термодинамика и кинетическое исследование. Неорг хим. 2013;52:9456–9469. [PubMed] [Google Scholar]

9. Ford PC. Полихромофорные металлокомплексы для получения биорегуляторного агента оксида азота при одно- и двухфотонном возбуждении. Acc Chem Res. 2008;41:190–200. [PubMed] [Google Scholar]

10. Eroy-Reveles AA, Leung Y, Mascharak PK. Высвобождение оксида азота из золь-гель гибридного материала, содержащего фотоактивный нитрозил марганца, при освещении видимым светом. J Am Chem Soc. 2006; 128:7166–7167. [PubMed] [Академия Google]

11. Чакраборти И., Кэррингтон С.Дж., Масчарак П.К. Фотодоставка CO разработанными PhotoCORM: корреляция между поглощением в видимой области и лабилизацией связи металл-CO в карбонильных комплексах. ХимМедХим. 2014;9:1266–1274. [PubMed] [Google Scholar]

12. Zayat L, Salierno M, Etchenique R. Бипиридильные комплексы рутения (II) как фотолабильные каркасные группы для аминов. Неорг хим. 2006; 45: 1728–1731. [PubMed] [Google Scholar]

13. Basa PN, Antala S, Dempski RE, Burdette SC. Фотоклетка цинка (II), основанная на механизме высвобождения ионов металла при декарбоксилировании, для исследования гомеостаза и биологической передачи сигналов. Энгью Чем. 2015;127:13219–13223. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

14. Патра А.К., Масчарак П.К. Нитрозил рутения, который быстро доставляет NO к белкам в водном растворе при кратковременном воздействии УФ-света. Неорг хим. 2003; 42:7363–7365. [PubMed] [Google Scholar]

15. Форд П., Бурасса Дж., Миранда К., Ли Б., Лоркович И., Боггс С., Кудо С., Лаверман Л. Фотохимия нитрозильных комплексов металлов. Доставка оксида азота к биологическим мишеням. Coord Chem Rev. 1998; 171:185–202. [Академия Google]

16. Фаррер Н.Дж., Вудс Дж.А., Саласса Л., Чжао Ю., Робинсон К.С., Кларксон Г., Маккей Ф.С., Сэдлер П.Дж. Мощный противораковый комплекс транс-диимин-платина, фотоактивируемый видимым светом. Angew Chem, Int Ed. 2010;49:8905–8908. [PubMed] [Google Scholar]

17. Knoll JD, Turro C. Контроль и использование возбужденных состояний комплексов металлов рутения и родия для фотоактивируемой терапии рака. Coord Chem Rev. 2015; 282–283: 110–126. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

18. Zamora A, Denning CA, Heidary DK, Wachter E, Nease LA, Ruiz J, Glazer EC. Ингибиторы Р450, содержащие рутений, для двойного ингибирования ферментов и повреждения ДНК. Далтон Транс. 2017;46:2165–2173. [PubMed] [Академия Google]

19. Смит Н.А., Чжан П., Гриноу С.Е., Хорбери М.Д., Кларксон Г.Дж., Макфили Д., Хабтемариам А., Саласса Л., Ставрос В.Г., Доусон К.Г., Сэдлер П.Дж. Борьба с УПП: фотоактивируемый комплекс рутений(II)-изониазид проявляет быструю селективную антимикобактериальную активность. хим. наук. 2017; 8: 395–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

20. Li A, Yadav R, White JK, Herroon MK, Callahan BP, Podgorski I, Turro C, Scott EE, Kodanko JJ. Освещение связывания цитохрома P450: ингибиторы CYP17A1 в клетке Ru (II). хим. коммун. 2017;53:3673–3676. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

21. Lameijer LN, Ernst D, Hopkins SL, Meijer MS, Askes SH, Le Dévédec SE, Bonnet S. Активируемый красным светом ингибитор NAMPT в клетке с рутением остается фототоксичным в гипоксических раковых клетках. Angew Chem, Int Ed. 2017;56:11549–11553. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

22. Cuello-Garibo J-A, Meijer MS, Bonnet S. В клетку или в клетку? Цитотоксические вещества в фотоактивированной химиотерапии на основе рутения – это не всегда металл. хим. коммун. 2017;53:6768–6771. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23. Loftus LM, White JK, Albani BA, Kohler L, Kodanko JJ, Thummel RP, Dunbar KR, Turro C. New Ru ^II Комплекс двойной активности: фотоиндуцированное высвобождение лиганда и ¹ O ₂ Производство . Chem – Eur J. 2016;22:3704–3708. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

24. Huisman M, White JK, Lewalski VG, Podgorski I, Turro C, Kodanko JJ. Запирание неуловимого: использование высвобождения комплексов металлов для фотохимического контроля над необратимым ингибированием. хим. коммун. 2016;52:12590–12593. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

25. Herroon MK, Sharma R, Rajagurubandara E, Turro C, Kodanko JJ, Podgorski I. Фотоактивируемое ингибирование катепсина K в трехмерной модели опухоли. биол хим. 2016; 397: 571–582. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

26. Li A, White JK, Arora K, Herroon MK, Martin PD, Schlegel HB, Podgorski I, Turro C, Kodanko JJ. Селективное высвобождение ароматических гетероциклов из трис(2-пиридилметил)амина рутения с помощью видимого света. Неорг хим. 2016;55:10–12. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

27. Knoll JD, Albani BA, Turro C. Новые комплексы Ru(II) для двойной фотореактивности: лигандный обмен и генерация ¹ O ₂ . Acc Chem Res. 2015;48:2280–2287. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

28. Karaoun N, Renfrew AK. Люминесцентный комплекс рутения (II) для светового высвобождения лекарств и визуализации живых клеток. хим. коммун. 2015;51:14038–14041. [PubMed] [Google Scholar]

29. Sharma R, Knoll JD, Martin PD, Podgorski I, Turro C, Kodanko JJ. Трис(2-пиридилметил)амин рутения как эффективная фотозащитная группа для нитрилов. Неорг хим. 2014;53:3272–3274. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

30. Respondek T, Sharma R, Herroon MK, Garner RN, Knoll JD, Cueny E, Turro C, Podgorski I, Kodanko JJ. Ингибирование активности катепсина в клеточном анализе активируемым светом соединением рутения. ХимМедХим. 2014;9:1306–1315. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

31. Renfrew AK. Комплексы переходных металлов с биоактивными лигандами: механизмы селективного высвобождения лиганда и применение для доставки лекарств. Металломика. 2014;6:1324–1335. [PubMed] [Академия Google]

32. Knoll JD, Albani BA, Durr CB, Turro C. Необычно эффективная фотодиссоциация пиридина из комплексов Ru(II) со стерически объемными бидентатными вспомогательными лигандами. J Phys Chem A. 2014;118:10603–10610. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

33. Zayat L, Filevich O, Baraldo LM, Etchenique R. Полипиридильные фототриггеры рутения: от истоков к перспективам. Philos Trans R Soc, A. 2013; 371:20120330. [PubMed] [Google Scholar]

34. Respondek T, Garner RN, Herroon MK, Podgorski I, Turro C, Kodanko JJ. Световая активация ингибитора цистеиновой протеазы: клетка пептидомиметического нитрила с Ru ^II (б/год) ₂ . J Am Chem Soc. 2011; 133:17164–17167. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

35. Goldbach RE, Rodriguez-Garcia I, van Lenthe JH, Siegler MA, Bonnet S. N -Ацетилметионин и биотин как фотоотщепляемые защитные группы для полипиридильных комплексов рутения. Chem — Eur J. 2011;17:9924–9929. [PubMed] [Google Scholar]

36. Garner RN, Gallucci JC, Dunbar KR, Turro C. [Ru(bpy) ₂ (5-цианоурацил) ₂ ] ²⁺ в качестве потенциального светоактивируемого терапевтического агента двойного действия. Неорг хим. 2011;50:9213–9215. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

37. Salierno M, Marceca E, Peterka DS, Yuste R, Etchenique R. Быстродействующий рутениево-полипиридиновый клеточный комплекс фотовысвобождает глутамат в видимом или инфракрасном свете в одно- и двухфотонном режимах. . Дж. Инорг Биохим. 2010; 104:418–422. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

38. Филевич О., Сальерно М., Эченик Р. Никотин в клетке с кинетикой наносекундного диапазона и чувствительностью к видимому свету. Дж. Инорг Биохим. 2010;104:1248–1251. [PubMed] [Академия Google]

39. Боннет С., Лимбург Б., Мелдейк Д.Д., Геббинк Р.Дж.К., Киллиан Д.А. Липидные везикулы, декорированные рутением: индуцированное светом высвобождение [Ru(terpy)(bpy)(OH ₂ )] ²⁺ и обратная тепловая координация. J Am Chem Soc. 2011; 133: 252–261. [PubMed] [Google Scholar]

40. Rial Verde EM, Zayat L, Etchenique R, Yuste R. Фотовысвобождение ГАМК в видимом свете с использованием неорганической каркасной группы. Передние нейронные цепи. 2008; 2:2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

41. Москера Х., Санчес М.И., Маскареньяс Х.Л., Васкес М.Е. Синтетические пептиды, заключенные в гистидиновые остатки с комплексом бисбипиридила рутения (II), которые могут фотолизоваться видимым светом. хим. коммун. 2015;51:5501–5504. [PubMed] [Google Scholar]

42. Li A, Turro C, Kodanko JJ. Полипиридильные комплексы Ru(II) как фотокаркасы для биоактивных соединений, содержащих нитрилы и ароматические гетероциклы. хим. коммун. 2018;54:1280–1290. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

43. Tu YJ, Mazumder S, Endicott JF, Turro C, Kodanko JJ, Schlegel HB. Селективная фотодиссоциация ацетонитрильных лигандов в полипиридильных комплексах рутения, изученная методом функционала плотности. Неорг хим. 2015; 54:8003–8011. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

44. Furuta T, Wang SS-H, Dantzker JL, Dore TM, Bybee WJ, Callaway EM, Denk W, Tsien RY. Бромированные 7-гидроксикумарин-4-илметилы: фотолабильные защитные группы с биологически полезными сечениями для двухфотонного фотолиза. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999; 96:1193–1200. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

45. Olson JP, Kwon HB, Takasaki KT, Chiu CQ, Higley MJ, Sabatini BL, Ellis-Davies GC. Оптически селективное двухфотонное расщепление глутамата при 900 нм. J Am Chem Soc. 2013;135:5954–5957. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

46. Salassa L, Garino C, Salassa G, Gobetto R, Nervi C. Механизм фотодиссоциации лиганда в фотоактивируемых [Ru-(bpy) ₂ L ₂ ] ²⁺ комплексов: исследование теории функционала плотности. J Am Chem Soc. 2008; 130:9590–9597. [PubMed] [Google Scholar]

47. Mari C, Pierroz V, Ferrari S, Gasser G. Комбинация комплексов Ru(II) и света: новые рубежи в терапии рака. хим. наук. 2015;6:2660–2686. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

48. Шарма Р., Нолл Дж. Д., Анкона Н., Мартин П. Д., Турро С., Коданко Дж. Дж. Твердофазный синтез как платформа для открытия новых комплексов рутения для эффективного высвобождения лигандов в фотоклетках с помощью видимого света. Неорг хим. 2015; 54:1901–1911. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

49. Zayat L, Calero C, Alborés P, Baraldo L, Etchenique R. Новая стратегия нейрохимической фотодоставки: гетеролитическое расщепление металл-лиганд. J Am Chem Soc. 2003; 125:882–883. [PubMed] [Академия Google]

50. Sgambellone MA, David A, Garner RN, Dunbar KR, Turro C. Клеточная токсичность, вызванная фотовысвобождением биоактивной молекулы в клетке: дизайн потенциального комплекса Ru(II) двойного действия. J Am Chem Soc. 2013; 135:11274–11282. [PubMed] [Google Scholar]

51. Ramalho SD, Sharma R, White JK, Aggarwal N, Chalasani A, Sameni M, Moin K, Vieira PC, Turro C, Kodanko JJ, Sloane BF. Визуализация участков ингибирования протеолиза в патомиметических культурах рака молочной железы человека активируемым светом соединением рутения. ПЛОС Один. 2015;10:e0142527. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

52. Göttle AJ, Alary F, Boggio-Pasqua M, Dixon IM, Heully J-L, Bahreman A, Askes SH, Bonnet S. Основная роль пентакоординатного состояния 3MC в эффективности фоторасщепления тиоэфирного лиганда в рутении (II) Комплексы: теоретико-механистическое исследование. Неорг хим. 2016;55:4448–4456. [PubMed] [Google Scholar]

53. Бахреман А., Лимбург Б., Зиглер М.А., Конинг Р., Костер А.Дж., Боннет С. Полипиридильные комплексы рутения, перескакивающие на анионные липидные бислои через супрамолекулярную связь, чувствительную к видимому свету. Chem – Eur J. 2012;18:10271–10280. [PubMed] [Академия Google]

54. Арора К., Уайт Дж.К., Шарма Р., Мазумдер С., Мартин П.Д., Шлегель Х.Б., Турро С., Коданко Дж.Дж. Эффекты метильного замещения в трис(2-пиридилметил)амине рутения в фотокаркасных группах для нитрилов. Неорг хим. 2016;55:6968–6979. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

55. Лофтус Л.М., Ли А., Филлман К.Л., Мартин П.Д., Коданко Дж.Дж., Турро С. Необычная роль смешивания возбужденного состояния в усилении фотоиндуцированного лигандного обмена в Ru( II) Комплексы. J Am Chem Soc. 2017;139:18295–18306. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Зенитко — Главная страница

Новинки

Устройство комбинированное «Перст Лидер»

Комбинированное устройство с быстроразъемным соединением 4 в 1: ИК-осветитель, фонарик, лазер в ИК-диапазоне и «зелен…

«Взор-1» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-1» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-2» Red Dot (мультизор)

Коллизионные прицелы «Взор-2» — комбинированные приборы, сочетающие в себе коллиматорный коллиматор и двойной лазерный прицел…

«Взор-3» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-3» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-3Т» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-3 Т» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-3ТК» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-3 ТК» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-4» Red Dot (мультизор)

Прицел коллиматорный «Взор-4» комбинированный, сочетающий в себе коллиматорный коллиматор, двойной лазерный целеуказатель и…

Комплект «Спорт-12У»

Комплект

«Спорт-12У» предназначен для винтовок на базе АК-12.

Комплект «Спорт-12»

Комплект

«Спорт-12» предназначен для винтовок на базе АК-12.

Комплект поводка

Предназначен для АК с длинным стволом (415мм). Имеет базовые направляющие со всех сторон

Устройство комбинированное «Перст-3В»

Комбинированное устройство 3 в 1: двойной ЛЦУ в ИК и ЛЦУ (зеленый +) диапазонах + ИК-осветитель. Можно использо…

Устройство комбинированное «Перст-4В»

Двойной лазер: зеленый и ИК с быстросъемным креплением и возможностью погружаться под воду

Комплект «Спорт-5У»

Предназначен для винтовок со ствольной коробкой на базе РПК, имеющих рычаг фиксации на фиксаторе цевья

Рельс Б-31ЛП

Устанавливается на направляющие: «Цевье Б-21Л» и «Дополнительное крепление ДЛ-2» б. ..

Щека для телескопических прикладов ПТ-1/ПТ-5

Крепление КР-1Б

Крепление КР-1Б с быстроразъемным соединением

Фонарь «Клещ-1С+лазер» (красный)

Фонарик-пистолет, создающий эффект «стены света» (широкий угол при съемке…

Фонарь «Клещ-1С+лазер» (зеленый)

Фонарик-пистолет, создающий эффект «стены света» (широкий угол при съемке…

Фонарь ИК «Клещ-1ИК+лазер»

Тактический фонарь со стробоскопическим режимом и встроенным ИК-лазером.

Сошки «Жук-2»

Регулируемые сошки для Базиса и планки Пикатинни

Устройство комбинированное «Перст Лидер»

Комбинированное устройство с быстроразъемным соединением 4 в 1: ИК-осветитель, фонарик, лазер в ИК-диапазоне и «зелен. ..

«Взор-1» Красная точка

9Коллизионный прицел 0004 «Взор-1» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-2» Red Dot (мультизор)

Коллизионные прицелы «Взор-2» — комбинированные приборы, сочетающие в себе коллиматорный коллиматор и двойной лазерный прицел…

«Взор-3» Красная точка

9Коллизионный прицел 0004 «Взор-3» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-3Т» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-3 Т» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-3ТК» Красная точка

Коллизионный прицел

«Взор-3 ТК» предназначен для прицеливания на малых и средних дистанциях.

«Взор-4» Red Dot (мультизор)

Прицелы коллиматорные «Взор-4» комбинированные, сочетающие в себе коллиматорный прицел, двойной лазерный целеуказатель и…

Комплект «Спорт-12У»

Комплект

«Спорт-12У» предназначен для винтовок на базе АК-12.

Комплект «Спорт-12»

Комплект

«Спорт-12» предназначен для винтовок на базе АК-12.

Комплект направляющих

Предназначен для АК с длинным стволом (415мм). Имеет базовые направляющие со всех сторон

Устройство комбинированное «Перст-3В»

Комбинированное устройство 3 в 1: двойной ЛЦУ в ИК и ЛЦУ (зеленый +) диапазонах + ИК-осветитель. Можно использо…

Устройство комбинированное «Перст-4В»

Двойной лазер: зеленый и ИК с быстросъемным креплением и возможностью погружаться под воду

Комплект «Спорт-5У»

Предназначен для винтовок со ствольной коробкой на базе РПК, имеющих рычаг фиксации на фиксаторе цевья

Рельс Б-31ЛП

Устанавливается на направляющие: «Цевье Б-21Л» и «Дополнительное крепление ДЛ-2» б. ..

Щека для телескопических прикладов ПТ-1/ПТ-5

Крепление КР-1Б

Крепление КР-1Б с быстроразъемным соединением

Фонарь «Клещ-1С+лазер» (красный)

Фонарик-пистолет, создающий эффект «стены света» (широкий угол при съемке…

Фонарь «Клещ-1С+лазер» (зеленый)

Фонарик-пистолет, создающий эффект «стены света» (широкий угол при съемке…

Фонарь ИК «Клещ-1ИК+лазер»

Тактический фонарь со стробоскопическим режимом и встроенным ИК-лазером.

Сошки «Жук-2»

Регулируемые сошки для Базиса и планки Пикатинни

Популярные

Рельс Б-30

Длинное цевье для АК с планками Пикатинни с трех сторон

К-3 Коврик для чистки пистолета

Коврик для чистки оружия из вулканизированной резины. Размер — Большой.

Комплект «Спорт-4»

Предназначен для АК с длинным стволом (415мм). Имеет базовые направляющие со всех сторон

Устройство комбинированное «Перст-3В»

Комбинированное устройство 3 в 1: двойной ЛЦУ в ИК и ЛЦУ (зеленый +) диапазонах + ИК-осветитель. Можно использо…

Устройство комбинированное «Перст-4В»

Двойной лазер: зеленый и ИК с быстросъемным креплением и возможностью погружаться под воду

Рельс Б-31ЛП

Устанавливается на направляющие: «Цевье Б-21Л» и «Дополнительное крепление ДЛ-2» б…

Рельс Б-33РПК

Пылезащитный чехол для винтовок на базе РПК.

Рельс Б-33

Пылезащитный чехол для АК

Рельс Б-30

Длинное цевье для АК с планками Пикатинни с трех сторон

К-3 Коврик для чистки пистолета

Коврик для чистки оружия из вулканизированной резины. Размер — Большой.

Комплект «Спорт-4»

Предназначен для АК с длинным стволом (415мм). Имеет базовые направляющие со всех сторон

Устройство комбинированное «Перст-3В»

Комбинированное устройство 3 в 1: двойной ЛЦУ в ИК и ЛЦУ (зеленый +) диапазонах + ИК-осветитель. Можно использо…

Устройство комбинированное «Перст-4В»

Двойной лазер: зеленый и ИК с быстросъемным креплением и возможностью погружаться под воду

Рельс Б-31ЛП

Устанавливается на направляющие: «Цевье Б-21Л» и «Дополнительное крепление ДЛ-2» б. ..

Рельс Б-33РПК

Пылезащитный чехол для винтовок на базе РПК.

Рельс Б-33

Пылезащитный чехол для АК

Ферментные зонды | Thermo Fisher Scientific

Ферменты использовались в качестве зондов для обнаружения в течение многих лет и до сих пор широко используются, даже с появлением флуоресцентных зондов, благодаря их простоте, чувствительности и широкому спектру применения. Ферментные зонды, включая пероксидазу хрена (HRP) и щелочную фосфатазу (AP), используются для обнаружения белков-мишеней посредством хромогенных, хемилюминесцентных или флуоресцентных выходов. Изменчивость этих показаний демонстрирует универсальность ферментативных зондов в биологических методах исследования, включая иммуногистохимию (ИГХ), иммуноблоттинг и твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА).

Распространенные форматы ELISA. В этом анализе интересующий антиген иммобилизуют путем прямой адсорбции на планшете для анализа или путем предварительного прикрепления захватывающего антитела к поверхности планшета. Обнаружение антигена затем может быть выполнено с использованием первичных антител, конъюгированных с ферментом (прямая детекция), или соответствующего набора немеченых первичных и конъюгированных вторичных антител (непрямая детекция).

---

Содержание страницы

• Введение в ферментные зонды
• Обычные репортеры ферментных зондов и хромогенные субстраты
• Ферментные репортеры для зондов
• Типы субстратов
• Маркировка ферментов

Введение в ферментные зонды

Ферменты в качестве репортеров детектирующих зондов

Ферменты используются для обнаружения представляющих интерес мишеней путем конъюгации с другим белком или малой молекулой, такой как первичное или вторичное антитело, биотин, авидин или какой-либо другой белок или малая молекула, которая связывается с мишенью . На следующем рисунке показаны комплексы авидин-биотин, связанные с антителами, которые могут встречаться в типичном иммунологическом анализе. Затем вводят субстрат специфического фермента, который взаимодействует с ферментом с образованием видимого продукта реакции, который может представлять собой темный осадок, испускание света или флуоресценцию. Затем этот сигнал обнаруживается с помощью методов микроскопии или сканирования.

Использование ферментных зондов (также называемых репортерами) для обнаружения целевого белка имеет три преимущества:

• Высокая чувствительность. идентифицировано. Кроме того, доступны методы усиления сигнала, которые значительно увеличивают количество молекул фермента в месте молекулы-мишени. Наконец, репортерные ферменты демонстрируют быстрый оборот, что увеличивает количество субстрата, которое конвертирует один фермент в данную единицу времени.
• Длительный срок хранения  – Ферменты достаточно стабильны при правильном хранении, и хотя субстрат фермента чувствителен к свету, сам фермент не чувствителен к разложению под действием окружающего света.
• Универсальность выхода  – Для наиболее распространенных ферментных зондов доступны субстраты, дающие хромогенный, хемилюминесцентный или флуоресцентный выход.

Хотя эти преимущества демонстрируют универсальность и удобство ферментных зондов, существуют ограничения их использования, которые следует учитывать при выборе соответствующего типа детекторного зонда:

• Большой размер  – Ферментные репортеры значительно больше, чем органические флуоресцентные соединения (например, FITC, TRITC и AMCA), и поэтому могут влиять на биологическую функцию белков, с которыми они конъюгированы.
• Требование к субстрату  – Ферментные зонды требуют добавления субстрата для обнаружения белка, и в зависимости от используемого субстрата эта реакция может быть чувствительной к условиям окружающей среды (например, свету, температуре) и внешнему освещению.
• Эндогенная интерференция  – Ферменты, используемые для обнаружения белков-мишеней в образце, часто экспрессируются в используемой экспериментальной системе (например, в тканях, клетках), которые также будут обрабатывать субстрат и давать неспецифический фоновый сигнал, если только они не ингибированы.

Узнать больше

• Обзор иммуногистохимии
• Обзор зондов для обнаружения белков
• Детекция для вестерн-блоттинга
• Иммунодетекция для IHC
• Обзор ELISA
• Обзор взаимодействия авидина и биотина
• Центр поддержки белковых анализов

---

Общие репортеры ферментных зондов и хромогенные субстраты

Ферменты действуют как репортеры анализа, реагируя с субстратами с образованием окрашенных, флуоресцентных или хемилюминесцентных сигналов, которые можно измерить. В таблице ниже перечислены несколько часто используемых ферментов и субстратов, которые могут быть как растворимыми, так и осаждающими. На иллюстрации приведен пример использования биотина для хромогенного обнаружения.

Хромогенное обнаружение биотина. Биотинилированные зонды обнаруживаются с помощью стрептавидина, связанного со щелочной фосфатазой (ЩФ). Конъюгаты стрептавидин-AP специфически и необратимо связываются с мечеными биотином зондами. Затем зонды визуализируют с использованием хромогенного субстрата для щелочной фосфатазы BCIP/NBT, который дает сине-фиолетовый осадок. В качестве альтернативы радиоактивной маркировке можно использовать набор Thermo Scientific Biotin Chromogenic Detection Kit для следующих целей: Саузерн, Нозерн, дот- и слот-блоттинг, а также скрининг вирусных бляшек и бактериальных колоний.

---

Обычные ферментные зонды-репортеры и хромогенные субстраты

Ферменты действуют как аналитические репортеры, реагируя с субстратами с образованием окрашенных, флуоресцентных или хемилюминесцентных сигналов, которые можно измерить. Субстраты могут быть как растворимыми, так и осаждающими (см. последующие обсуждения ниже).

Этикетка фермента	Субстраты
Хрен Пероксидаза (HRP)1780	3,3′-диаминобензидин (DAB) 3,3′,5,5′-тетраметилбензидин (TMB) 2,2′-азинобис[3-этилбензотиазолин-6-сульфокислота] (ABTS) о-фенилендиамин дигидрохлорид (OPD)
Щелочная фосфатаза (AP)	Комбинация хлорида нитросинего тетразолия (NBT) и 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата (BCIP) p-Nitrophenyl PNPP)
Глюкозооксидаза	Нитросиний тетразолия хлорид (NBT)
β-галактозидаза	5-бром-4-хлор-3-индоил-β-D-галактопиранозид (BCIG OR X-GAL)

---

УЧИТАЯ

888

---

.

Обзор ELISA

Обзор иммуногистохимии

Избранные продукты

• Субстраты для вестерн-блоттинга
• Субстраты для ELISA
• Субстраты для иммуногистохимии
Субстрат для нуклеиновой кислоты0004 Технический справочник по анализу белков

Этот технический справочник и руководство по продукту помогут вам выбрать подходящий метод анализа с учетом времени анализа, чувствительности, совместимости, линейности стандартной кривой и межбелковых вариаций. Узнайте о нашем широком спектре колориметрических (на основе меди или красителей) и флуоресцентных белковых анализов, а также о наших более специализированных анализах для количественного определения пептидов, антител, модификаций белков или функциональных (ферментативных) классов белков. Откройте для себя инструменты и стратегии, которые помогут оптимизировать анализы количественного определения белков, чтобы обеспечить более точные последующие результаты

 Загрузить руководство

Применение ферментных зондов

Ферментные зонды широко используются во многих различных экспериментальных приложениях из-за их универсальности, их способности конъюгировать со многими различными типами макромолекул, а также доступности и разнообразия субстратов. Ферменты чаще всего используются для обнаружения белков с помощью стратегий прямого и непрямого обнаружения антител, когда фермент конъюгирован либо с первичным антителом, которое связывает целевой белок, либо со вторичным антителом, которое нацелено на первичное антитело, соответственно. Фермент также может быть конъюгирован с биотином или авидином для использования в системах усиления сигнала авидин-биотин.

Хромогенное обнаружение с использованием осаждающих субстратов является распространенным типом нацеливания на белок, используемым для иммуногистохимии (IHC) , хотя в последние годы использование флуоресцентных зондов расширилось благодаря технологическим достижениям и большей доступности инструментов для обнаружения флуоресценции. Хемилюминесцентные субстраты являются стандартом для обнаружения белков методом вестерн-блоттинга из-за высокой чувствительности и линейного диапазона обнаружения. Осаждающие хромогенные субстраты, а в последние годы и флуоресцентные субстраты также доступны для этого применения. Хемилюминесцентные, флуоресцентные и растворимые хромогенные Обычно используются субстраты ELISA , и каждый тип субстрата обладает характеристиками, характерными для разных экспериментальных стратегий.

Прямое и непрямое обнаружение белков. Поверхность, на которой связывается и иммобилизуется целевой белок, представляет собой либо мембрану (вестерн-блоттинг), либо лунку микропланшета (ELISA).

Подробнее

• Введение во вторичные антитела
• Обзор вестерн-блоттинга
• Обзор ELISA
• Обзор IHC
• Технический совет №32. Справочник по ферментным субстратам для вестерн-блоттинга
• Технический совет №33. Справочник по ферментным субстратам для ELISA Пероксидаза хрена (HRP) катализирует перенос двух электронов от субстрата к перекиси водорода с образованием окисленного субстрата и воды. Для обнаружения белка субстраты HRP (перечисленные в таблице ниже) предназначены для генерации хромогенного, хемилюминесцентного или флуоресцентного сигнала при окислении. HRP имеет молекулярную массу 40 000, что относительно мало по сравнению с другими ферментными конъюгатами. Этот небольшой размер позволяет лучше проникать в ткани и клетки образца и снижает вероятность вмешательства в функцию конъюгированного белка. HRP также имеет четыре лизина, доступных для конъюгации, что повышает эффективность сшивки с интересующим белком.

  HRP имеет высокую скорость оборота и производит большое количество продуктов реакции за короткий промежуток времени при физиологическом pH (7,6). Конъюгаты HRP-IgG превосходят конъюгаты щелочной фосфатазы и β-галактозидазы из-за их более высокой специфической ферментативной активности (больше HRP/моль антитела) и иммунологической реактивности (меньше стерических затруднений из-за размера HRP).

  Одной из основных проблем, связанных с использованием HRP, является неспецифическое окрашивание, возникающее в результате эндогенной пероксидной активности в определенных тканях. Криостатические срезы часто содержат большое количество эндогенной активности пероксидазы, хотя коммерческие ингибиторы пероксидазы доступны для снижения или устранения активности эндогенной пероксидазы, HRP является ферментной меткой выбора для окрашивания срезов, залитых парафином, метод, который ингибирует эндогенную активность.

  Вторым недостатком HRP является его чувствительность к разложению микроорганизмами, а также к антибактериальным средствам, используемым для борьбы с ними. Азид натрия является мощным ингибитором HRP, но фермент может сохраняться в 0,01% тимеросале. HRP также ингибируется цианидами, сульфидами и азидами. Последним недостатком HRP является мутагенность или канцерогенность продуктов реакции некоторых субстратов пероксидазы хрена. Если какая-либо из этих проблем вызывает серьезную озабоченность, могут быть предпочтительны другие ферментативные маркеры.

  Механизм обнаружения с помощью зонда HisProbe-HRP. Thermo Scientific HisProbe-HRP представляет собой активированное никелем (Ni ²⁺ ) производное пероксидазы хрена (HRP), которое позволяет проводить прямую аффинную хроматографию с иммобилизованным металлом (IMAC) на основе His-меченых белков и других гистидин- богатые белки в вестерн-блоте и микропланшетах.

  Узнать больше

  • Обзор иммуногистохимии
  • Белки с меткой His – получение и очистка
  • Overview of Western Blotting
  • Overview of ELISA

  Select products

  • Horseradish Peroxidase
  • Horseradish Peroxidase Labeling Kits and Accessory Reagents
  • Peroxidase Suppressor

  Alkaline phosphatase

  Alkaline phosphatases (AP) are a widely distributed семейство ферментов, которые гидролизуют фосфаты из нуклеотидов и белков. Оптимальная ферментативная активность наблюдается при рН 9,0-9,6; эти ферменты активируются двухвалентными катионами и ингибируются цистеином, цианидами, арсенатами, неорганическими фосфатами и хелаторами двухвалентных катионов, такими как ЭДТА.

  У млекопитающих существует две формы щелочной фосфатазы; одна форма распределяется в различных тканях, а другая обнаруживается только в кишечнике. На эти две формы по-разному влияют ингибиторы и тепловые инактиваторы. Использование 1 мМ левамизола в субстратном буфере ингибирует активность эндогенной тканевой щелочной фосфатазы. Активность кишечной щелочной фосфатазы можно ингибировать путем обработки срезов перед окрашиванием 20% уксусной кислотой при 4 °C в течение 15 секунд (или 2,3% йодной кислотой в течение 5 минут), а затем 0,02% боргидридом калия в течение 2 минут.

  Конъюгаты щелочной фосфатазы кишечника телят идеальны в тех случаях, когда высокие уровни эндогенной пероксидазы противопоказаны для использования конъюгатов HRP, например, в криостатных срезах, где ингибиторы пероксидазы неэффективны.

  При использовании в качестве метки щелочная фосфатаза кишечника телят (молекулярная масса 140 000) имеет несколько явных преимуществ по сравнению с другими ферментами. Поскольку скорость реакции остается линейной, чувствительность можно повысить, позволяя реакции протекать в течение более длительных периодов времени. На активность щелочной фосфатазы кишечника телят не влияет воздействие антибактериальных средств, таких как азид натрия или тимеросал, поэтому она может храниться в течение длительного времени в нестерильных условиях. Поскольку эндогенная активность внекишечной щелочной фосфатазы может быть ингибирована 1 мМ левамизола, антитела, меченные этим ферментом, можно использовать в качестве маркеров во многих различных тканях.

  Learn more

  • Overview of Immunohistochemistry
  • Overview of Western Blotting
  • Overview of ELISA

  ---

  Glucose oxidase

  Glucose oxidase is an enzyme isolated from  Aspergillus niger  that catalyzes the oxidation of β-D-glucose для получения перекиси водорода и глюконовой кислоты. Глюкозооксидаза представляет собой димерный гликопротеин с молекулярной массой 160 000. Ингибиторы глюкозооксидазы включают Ag ⁺ , Hg ²⁺ , Cu ²⁺ , и p -хлормеркурибензоат и ацетат фенилртути.

  Глюкозооксидаза часто является предпочтительной меткой для образцов с высокой активностью эндогенной пероксидазы или фосфатазы, поскольку в тканях млекопитающих эндогенная активность глюкозооксидазы отсутствует. Однако важно выбрать глюкозооксидазу с низкой активностью каталазы, потому что каталаза разрушает конечный продукт перекиси водорода в реакции.

  β-галактозидаза

  β-галактозидаза представляет собой фермент, выделенный из0005 E. coli  , который способен гидролизовать различные производные галактопиранозида, что приводит к образованию как водорастворимых, так и водонерастворимых продуктов. NaCl является активатором, а Mg ²⁺  – кофактором этого фермента, а оптимальный рН для β-галактозидазы составляет 7,0–7,5. При иммуногистохимическом окрашивании потенциальное влияние эндогенного фермента можно устранить путем заливки образца парафином.

  β-галактозидаза чувствительна и не проявляет эндогенной активности в клетках млекопитающих, поэтому ее можно использовать в тех случаях, когда активность эндогенных ферментов является постоянной проблемой. β-галактозидаза была успешно связана различными сшивающими агентами с фрагментами IgG, целыми иммуноглобулинами и инсулином. Одним из недостатков β-галактозидазы является отсутствие разнообразия субстратов.

  Learn more

  • Overview of Immunohistochemistry

  Select products

  • b-galactosidase Substrates
  • b-galactosidase Assay Reagent

  ---

  Types of substrates

  Chromogenic substrates

  Chromogenic substrates have been widely used for many лет и предлагают самый простой и экономичный метод обнаружения. Эти субстраты делятся на две группы в зависимости от природы продукта ферментативно-субстратной реакции. При осаждении субстратов в контакте с соответствующим ферментом они превращаются в нерастворимые продукты, которые осаждаются на образец или мембрану. Из-за нерастворимой природы этих продуктов осаждающие субстраты обычно используются для ИГХ и вестерн-блоттинга. Эти репрезентативные данные предоставляют подробную информацию о хромогенном вестерн-блоттинге, полученном с использованием HRP-конъюгированного антитела и раствора TMB.

  Хромогенный вестерн-блот анализ Готовили серийные разведения лизата клеток HeLa (7,5, 3,45, 1,88, 0,94, 0,47, 0,23 и 0,12 мкг) и разделяли электрофорезом. Белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны и мембрану блокировали 5% обезжиренным молоком в TBS + 0,05% Thermo Scientific Tween 20. После блокировки мембрану инкубировали с поликлональным антителом к ​​белку теплового шока 86 в концентрации 0,5 мкг/мл. Мембрану промывали и затем инкубировали с 0,2 мкг/мл конъюгированного с HRP козьего антикроличьего IgG, а затем снова промывали. Мембрану поместили в 10 мл 1-Step Ultra TMB-Blotting Solution, и развитие окраски остановили через 5 минут, промыв мембрану водой.

  ---

  И наоборот, растворимые субстраты водорастворимые окрашенные продукты, которые растворяются в тестовом растворе, обычно используются в анализах ELISA. Помимо различий в природе их продуктов, эти два типа хромогенных субстратов различаются используемым оборудованием для обнаружения. Осаждение субстратов требует не более специализированного оборудования, чем световой микроскоп для обнаружения присутствия, интенсивности и локализации нерастворимого продукта, в то время как микропланшет-ридер используется для измерения оптической плотности и, следовательно, количества растворимого продукта в растворе. Субстраты для хромогенного блоттинга доступны в самых разных спецификациях и форматах, и выбор подходящего субстрата зависит от ферментной метки, желаемой чувствительности и формы сигнала или необходимого метода обнаружения.

  Для любого типа хромогенного субстрата обнаружение белка аналогично проявлению пленки; образец инкубируют в субстрате до тех пор, пока развитие окраски не станет удовлетворительным, после чего реакцию останавливают и/или измеряют количество продукта. Этот подход позволяет пользователю контролировать разрешение данных. Однако низкая чувствительность хромогенных субстратов затрудняет оптимизацию обнаружения белков с низким содержанием; хотя реакция может развиваться в течение нескольких часов или даже в течение ночи, это также позволяет развиться фоновому сигналу. Там, где хромогенные субстраты не обладают чувствительностью, они идеально подходят для приложений с высоким содержанием белка. Сигнал стабилен, потому что продукт реакции субстрата стабилен при правильном хранении, и, следовательно, хромогенные субстраты обычно не имеют проблем с ложноотрицательными результатами, которые могут возникнуть с хемилюминесцентными субстратами в вестерн-блоттингах (например, фантомные полосы).

  Хромогенные субстраты обычно используются для обнаружения обильных белков, а развитие реакции можно отслеживать визуально; это обеспечивает большую гибкость для оптимизации по сравнению с хемилюминесцентными или флуоресцентными системами блоттинга. Тем не менее, характеристики конкретного субстрата могут сильно различаться, если они получены от разных поставщиков, поскольку на производительность могут влиять концентрация и чистота субстрата, а также другие добавки и буферные компоненты, входящие в состав .

  19 NBC step1780

  Substrate	Format	Enzyme	Features	Relative sensitivity	Signal color
  DAB	Dry powder	HRP	Можно приготовить	Среда	Коричневый
  Усиленный металлом DAB	2-компонентный набор реагентов	HRP	50X more sensitive than DAB alone	Highest	Brown to black
  BCIP	Dry powder	AP	Can be formulated	Medium	Blue to purple
  NBT	Сухой порошок	AP и глюкоза оксидаза	Неканцерогенный	Среда	Синий до фиолетовый
  Single step, ready-to-use	AP	Low background for high sensitivity	High	Black to purple
  1-step NBT/BCIP + suppressor	Single step, готовый к употреблению	AP	Содержит левамизол для ингибирования эндогенной пероксидазы	High	Черный до фиолетовый

  субстраты для HAP и преципитирующих RP. Осаждающие субстраты используются для вестерн-блоттинга и иммуногистохимического обнаружения.

  Substrate	Format	Enzyme	Features	Relative sensitivity	Signal color
  ABTS	Tablets	HRP	Можно приготовить	Низкий	Зеленый
  1-step ABTS	Ready-to-use	HRP	40X more sensitive than ABTS	Medium	Green
  OPD	Powder or Tablets	HRP	Can be formulated	High	Yellow to orange
  1-step TMB	Ready-to-use	HRP	Up to 3. 5X more sensitive than OPD	High	Blue
  PNPP	Powder or Tablets	AP	Can be formulated	High	Yellow
  1-step PNPP	Ready-to-use	AP	No dissolving or diluting required	Высокий	Желтый

  Растворимые хромогенные субстраты для HRP и AP. Растворимый субстрат используется для ELISA и других анализов на планшетах.

  ---

  Хемилюминесцентные субстраты

  Хемилюминесцентные субстраты популярны, потому что они предлагают ряд преимуществ по сравнению с другими методами обнаружения, включая большой диапазон линейного отклика, который позволяет обнаруживать и количественно определять широкий диапазон концентраций белка. Люминол — один из наиболее часто используемых хемилюминесцентных реагентов; люминол окисляется пероксидом с образованием 3-аминофталата в возбужденном состоянии, который распадается до более низкого энергетического состояния, испуская фотоны света с длиной волны 425 нм.

  Хемилюминесцентные субстраты отличаются от других субстратов тем, что обнаруживаемый свет является временным продуктом реакции, который присутствует только во время ферментативно-субстратной реакции. Это отличается от хромогенных субстратов, которые дают стабильный окрашенный продукт. В хемилюминесцентной реакции субстрат является лимитирующим реагентом в реакции; по мере его истощения производство света уменьшается и в конечном итоге прекращается. Хорошо оптимизированная процедура с использованием надлежащих разведений ферментных конъюгатов будет давать стабильный выход света в течение нескольких часов, что позволяет последовательно и точно обнаруживать белки.

  Хемилюминесцентные субстраты обычно используются для краткосрочного и быстрого обнаружения белка с помощью вестерн-блоттинга с использованием рентгеновской пленки, люминофорных формирователей изображений или ПЗС-камер.

  ---

  Флуоресцентные субстраты

  Хотя меченные флуорофором антитела и другие молекулы чаще используются для обнаружения белков-мишеней, флуоресцентные субстраты также доступны для ферментативного обнаружения. Эти субстраты не флуоресцируют или излучают слабую флуоресценцию до тех пор, пока не будут метаболизированы ферментным зондом, после чего они излучают интенсивную флуоресценцию. Эти субстраты обладают большей чувствительностью и возможностью быстрого количественного анализа благодаря флуоресцентной микроскопии, флуоресцентным считывателям микропланшетов и аналитическому программному обеспечению.

  Select Products

  • Хемилюминесцентные субстраты для вестерн -блоттинга (Руководство по отбору)
  • Реагенты ELISA и буферы
  • . обычно для получения конъюгатов антител или других белков с ферментами, такими как HRP и AP. Все виды вторичных антител, конъюгированных с ферментами, имеются в продаже, но исследователям, возможно, придется маркировать специализированные первичные антитела и другие белковые зонды.

    Глутаровый альдегид является одним из простейших сшивающих реагентов, используемых для конъюгации белков. Он реагирует с аминогруппами с образованием поперечных связей одним из нескольких путей. В восстановительных условиях альдегиды на обоих концах глутарового альдегида соединяются с аминами, образуя вторичные аминные связи. Реагент очень эффективен при конъюгации белков, но имеет тенденцию образовывать различные высокомолекулярные полимеры, что затрудняет воспроизведение результатов.

    Периодат-активация с последующим восстановительным аминированием является отличной стратегией конъюгации HRP и других гликопротеинов. Обработка периодатом гликозилированного фермента приводит к окислению цис-диольных групп сахаров (особенно сиаловой кислоты, которая часто встречается в полисахаридах гликопротеинов), что приводит к образованию альдегидных групп. Затем эти альдегидные группы будут эффективно реагировать (в присутствии мягкого восстановителя цианоборгидрида) с первичными аминами добавленного антитела или другой молекулы. Результатом является стабильное сопряжение постоянными амидными связями.

    Альдегиды (карбонилы) в качестве мишеней сшивания. Реакция перйодата натрия с остатками сахаров дает альдегиды для реакций сопряжения. R и R’ представляют собой связывающие сахарные мономеры полисахарида. Красными звездочками отмечены участки расщепления диолов. Сиаловую кислоту также называют N-ацетил-D-нейраминовой кислотой.

    Узнать больше

    • Обзор мечения белков
    • Сшивание белков
    • Карбонил-реактивный сшиватель Химия
    • Crosslinking Technical Handbook
    • Protein Assays and Analysis Support Center

    Select products

    • Enzyme Labeling Reagents
    • Sodium meta-Periodate

    ---

    Recommended reading

    1. Sambrook J. and Russell D. W. (2001) Molecular cloning : Лабораторный справочник. Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор.
    2. Справочник CRC по иммуноблотингу белков: Том 1, техническое описание. Эдс Оле Дж. Бьеррум, доктор философии, доктор медицины, и Нильс Х. Х. Хегаард, доктор медицины CRC Press, Inc.: Бока-Ратон, Флорида, 1988.
    3. Bollag, D.M., et al. (1996). Белковые методы. Второе издание. Wiley-Liss, Inc., Нью-Йорк.
    4. Харлоу, Э. и Лейн, Д. (1988). Антитела: Лабораторное руководство. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.

    IGN Германия

    IGN Германия

    Overwatch 2: Blizzard устанавливает массивный Cheaterverfolgung

    Эндлих! Первый трейлер The Last of Us от

    Der Termin steht fest: Die E3 2023 в Datum!

    Стеклянный лук: Schaut euch den ersten Clip zu Knives Out 2 и

    Aktuelle Meldungen

    1 Woche, 1 Tag

    FIFA 23 — Тед Лассо и Ричмонд в новой версии FIFA

    Лучший футбольный тренер в Цайтене, Тед Лассо в новой версии FIFA23, как Spielfigur auftauchen. Die Cooperation zwischen der TV-Serie und EA Sports geht aber noch weiter: Auch sein Verein AFC Richmond mit effin Roy Kent und Co werden als spielbare Vereinsmanschaft integriert. Ein Traum für Serienfans der Comedy-Show, умереть от Apple+ zu sehen ist und bereits mehrere Emmy-Awards einheimsen konnte.

    1 Woche, 2 Tage

    Company of Heroes 3: Die Kampagnenkarte unter der Lupe – IGN First

    Die Karte für die Italienkampagne in Company of Heroes 3 stellt vermutlich das Ehrgeiheizigsteen Singleplayer-Unterfangsteen Auf den ersten Blick könntet ihr euch an einen Zweiten-Weltkriegs-Mod für Total War erinnert fühlen. Euch von der untersten Spitze bis nach Rom voranzukämpfen, wird euch eine Menge strategisches Denken abverlangen. Ihr müsst beweisen, dass ihr Land, See und Luft beherrscht und politische Entscheidungen treffen könnt. Der Fokus legt jedoch weiterhin darauf, RTS-Missionen durchzuführen, …

    1 Woche, 5 Tage

    Return to Monkey Island: Trotz ungewöhnlichem Stil voll auf Kurs

    Auf der gamescom 2022 gaben die Entwickler von Return to Monkey Island einen Einen Einnblick in die Entstehungsgeschichten und Spiels -Echo zum neuen Grafikstil für sie bedeutet.

    3 Wochen

    PGA TOUR 2K23 — Diese Golf-Pros könnt ihr spielen

    Tiger Woods, Justin Thomas, Lexi Thompson — das sind nur bekannten Golf-Profis, die ihr in PGA TOUR 2K23 spielen. Der Trailer verrät euch Mehr Details.

    3 Wochen

    NBA 2K23 — Das ist die neue Stadt

    In den neu gestalteten Bezirken und neuen Locations wie das Theater könnt ihr neue Dinge in der Stadt von NBA 2K23 entdecken.

    3 Wochen, 1 Tag

    Steelrising — Das Video-Review

    В ролевой игре Steelrising с историей будущего откройте для себя ухронический Париж времен Французской революции, где армия автоматов короля Людовика XVI терроризирует и подавляет французский народ .

    3 Wochen, 2 Tage

    Company of Heroes 3: Tauche in die Geschichte ein – IGN First

    Company of Heroes 3 bewegt sich in vielerlei Hinsicht dicht entlang seiner Wurzeln als RTS mit Zweitem-Setkrieg. Wo sich das Game am weitesten von der geschichtlichen Vorlage entfernt, das ist vermutlich die Italien-Kampagne mit offenem Ausgang.

    4 Wochen

    Apple Arcade: Die Neuheiten im September

    Apple-Fans mit Köpfchen kommen mit dem Spiele-Flatratepaket Apple Arcade im September 2022 voll auf ihre Kosten: Reichlich Rätsel und eine faszinierende Spielerfahrung bringen einiges an Abwechslung in den Herbst .

    4 Wochen, 1 Tag

    Gotham Knights Preview: Die Stadt, die Schurk*innen und vieles mehr

    Mit Spannung wird Gotham Knights erwartet und in den vergangenen Wochen beschäftigen Remitigen wiruns im Rahmen Шпиль. В diesem Artikel schauen wir uns nochmals an, was wir wissen und was wir nicht wissen – und lassen ein paar neue Подробности упали.

    1 Monat

    Homeworld 3: Ein gnadenloses RTS-Abenteuer im All

    In Homeworld 3 könnt ihr unter Beweis stellen, ob ihr für das Leben im All gemacht seid. Strategisches Denken kommt euch jedenfalls gelegen.

    1 Monat

    Blind Fate: Edo no Yami: Release Day Трейлер Студия Troglobyte Games играет в Edo-Ära.

    1 Monat

    Blueberry: Gamescom 2022 Trailer

    Я Indie-платформер Blueberry von Mellow Games рассказывает о Психике блестящих женщин, умирает на первом стадионе, где начинается жизнь. Auf dersuche nach der Ursache ihres Traumas stöbert ihr in Erinnerungen, löst Minispiele und lernt Blueberrys Ängste und Hoffnungen kennen.

    1 Monat

    Gamescom 2022: Unsere Tag-5-Highlights

    Стенд Der Indie Arena с более чем 130 показами большого выставочного стенда на gamescom 2022. Выбраны для всех последних событий.

    Объявление

    Потоковое ТВ и фильмы в прямом эфире и онлайн

    Сетевые дополнения премиум-класса доступны за дополнительную плату

    HULU + LIVE TV, ТЕПЕРЬ С DISNEY+ И ESPN+

    Live TV делает его лучше

    Переключитесь с кабеля. Получите более 75 лучших каналов на Hulu + Live TV с вашими любимыми спортивными трансляциями, новостями и событиями, а также со всей потоковой библиотекой Hulu. С помощью Unlimited DVR можно хранить записи прямых телетрансляций до девяти месяцев и быстро просматривать содержимое DVR вперед. Получите доступ к бесконечным развлечениям с Disney+ и спортивным трансляциям с ESPN+.

    В течение ограниченного времени экономьте 20 долларов США в месяц в течение 3 месяцев . Окончание 10/5.

    Заканчивается в 23:59 по тихоокеанскому стандартному времени 05.10.22. Предложение только для тарифного плана Hulu (с поддержкой рекламы) + Live TV. 49,99 долларов США в месяц на 3 месяца, затем автоматическое продление по цене 69,99 долларов США в месяц или по текущей обычной месячной цене. Цена увеличится до 74,99 долларов США в месяц с 8 декабря 22 года. Отменить в любое время, вступает в силу в конце вашего расчетного периода. Действительно для соответствующих требованиям новых и постоянных подписчиков Hulu (у которых не было Hulu в течение последнего 1 месяца), только 18+. Экономия по сравнению с обычной месячной ценой.

    Live Sports

    Следите за своими играми дома или в пути. Транслируйте прямые трансляции игр крупных колледжей и профессиональных лиг, включая NCAA®, NBA, NHL, NFL и других.

    Требуется план прямого эфира. Применяются региональные ограничения, отключения и дополнительные условия. См. подробности

    Экстренные новости

    Будьте в курсе того, что происходит на местном и глобальном уровнях, с надежными мнениями из всех ведущих новостных сетей.

    Требуется план прямого эфира. Применяются региональные ограничения, отключения и дополнительные условия. Подробнее

    Крупнейшие события

    Впечатляющие события, которые нельзя пропустить, такие как Олимпийские игры, Grammy®, Oscars®, Emmys® и другие.

    Требуется план прямого эфира. Применяются региональные ограничения, отключения и дополнительные условия. См. Подробная информация

    Самый популярный

    30 -дневная бесплатная пробная версия

    Hulu

    30 Day Free Free

    Hulu (No Ads)

    Ежемесячная цена

    $ 6,99/MO. **

    $ 12,99/MO. **

    22222229

    $ 12,99/MO. **

    /MO. Потоковая библиотека с тысячами сериалов и фильмов 9Переключение с Live TV на Hulu вступает в силу со следующего платежного цикла

    Доступные надстройки

    Дополнения доступны за дополнительную плату.
    Добавьте их после регистрации в Hulu.

    HBO Max™

    CINEMAX®

    SHOWTIME®

    STARZ®

    Дополнения для шоу

    Дополнение для развлечений

    7,99 долл. Channel, BET Her, CNBC World, Cooking Channel, Crime + Investigation, Destination America, Discovery Family, Discovery Life, Magnolia Network, Военно-исторический канал, MTV2, MTV Classic, Nick Toons, Science и Teen Nick.

    Español Add-on

    $4,99/месяц

    Наслаждайтесь коллекцией популярных каналов на испанском языке – CNN en Español, Discovery en Español, Discovery Familia, ESPN Deportes, History Channel en Español и Universo.

    Sports Add-on

    $9,99/месяц

    Трансляция каждого приземления в каждой игре, каждое воскресенье во время регулярного сезона НФЛ с помощью NFL RedZone, а также сотни часов прямых трансляций спортивных состязаний — автоспорта (MAVTV), скачек (FanDuel TV) /FanDuel Racing) до охоты и рыбалки (Outdoor Channel, Sportsman Channel).

    Что входит в комплект Disney?

    Подписка на Disney+, ESPN+ и Hulu по сниженной цене. Доступно с Hulu (с рекламой) за 13,99 долларов в месяц или с Hulu (без рекламы) за 19,99 долларов в месяц.

     Экономия 7,98 долл. США в месяц по сравнению с обычной ценой на каждую услугу.

     Наслаждайтесь любимыми шоу, фильмами, спортом и многим другим с помощью приложений Disney+, Hulu и ESPN (или сайтов, если они в браузере). Загрузите каждое приложение отдельно, чтобы получить доступ к каждой службе.

     Доступ к выбранному контенту ESPN+ через Hulu.

    Отмена в любое время.

    Бесплатная пробная версия недоступна. Экономия по сравнению с обычной ценой на каждую услугу. только 18+.

    Предложение Hulu + Live TV со скидкой: не сочетается с другими рекламными предложениями или ценами. Предложение не распространяется на некоторых сторонних платных подписчиков и текущих подписчиков Disney+ и/или ESPN+. Любое изменение плана после использования этого предложения приведет к потере скидки Hulu + Live TV. Применяются региональные ограничения, отключения и условия Live TV. Контент Disney+/ESPN+/Hulu: доступ к контенту из каждой службы отдельно и доступ к контенту ESPN+ через Hulu. Данные о местоположении необходимы для просмотра определенного контента. ©2022 Disney и связанные с ней лица.

    Прямая трансляция: только 18+. Любые бесплатные пробные версии действительны только для новых и соответствующих требованиям постоянных подписчиков. Только для личного и некоммерческого использования. Прямая трансляция доступна только в 50 США и округе Колумбия. Требуется совместимое устройство и высокоскоростное широкополосное подключение к Интернету. Для нескольких одновременных потоков и HD-контента может потребоваться более высокая пропускная способность. Потоковое содержимое может учитываться при использовании ваших данных. Данные о местоположении, необходимые для доступа к контенту. Прямая трансляция может различаться в зависимости от подписки и местоположения. Нажмите здесь, чтобы проверить доступность каналов в вашем регионе. Программирование зависит от региональной доступности, отключения электроэнергии и ограничений по устройствам. Количество разрешенных одновременных потоков зависит от условий вашей подписки. Место для хранения облачного видеорегистратора ограничено. Цены, каналы, функции, контент и совместимые устройства могут быть изменены. Ознакомьтесь с нашими Условиями использования и Политикой конфиденциальности.

    Для Live TV, теперь с Disney+ и ESPN+: если у вас уже есть подписка(-и) на Disney+ и/или ESPN+, вы можете зарегистрироваться, не отменяя существующие подписки. Взимаемая сумма будет скорректирована с учетом существующих подписок до тех пор, пока они будут поддерживаться. Существующие подписки на Disney+ и/или ESPN+ не будут изменены или заменены Live TV. Получите доступ к контенту из каждой службы отдельно и выберите контент ESPN+ через Hulu. Определенная информация об учетной записи предоставляется Disney+ и/или ESPN+ для активации и администрирования.

    Каналы в вашем районе

    Введите почтовый индекс вашего дома для каналов, доступных в вашем районе.

    Прямая трансляция доступна для местных, региональных, и национальные каналы, доступные в вашем регионе, которые могут быть изменены. Некоторые каналы могут предлагать контент только по запросу. Некоторые каналы или контент могут быть доступны не во всех странах и не на всех устройствах.

    Экономия по сравнению с обычной ценой на каждую услугу. только 18+. Получайте доступ к контенту каждого сервиса отдельно и получайте доступ к контенту ESPN+ через Hulu. Данные о местоположении необходимы для просмотра определенного контента.   Предложение действительно только для соответствующих требованиям подписчиков.

    Не комбинируется с другими рекламными предложениями или ценами. Предложение не распространяется на некоторых сторонних платных подписчиков и текущих подписчиков Disney+ и/или ESPN+. Любое изменение плана после использования этого предложения приведет к потере скидки Hulu + Live TV. Применяются региональные ограничения, отключения и условия Live TV.

    Контент Disney+/ESPN+/Hulu: доступ к контенту каждой службы отдельно и доступ к контенту ESPN+ через Hulu.

    No related posts.