Окружающий мир 2 класс плешаков стр 50: ГДЗ рабочая тетрадь окружающий мир 2 класс Плешаков, часть 1, 2 с ответами

Содержание

ГДЗ Окружающий мир 2 класс. Плешаков. Рабочая тетрадь часть 1, 2

Главная
ГДЗ
2 класс
Окружающий мир
Плешаков. Рабочая тетрадь

Быстрый поиск

Рабочая тетрадь
Часть 1. Страницы

Страница 6 Страница 7 Страница 8 Страница 9 Страница 10 Страница 11 Страница 12, 13 Страница 14 Страница 15 Страница 17 Страница 18 Страница 19 Страница 20, 21 Страница 22, 23 Страница 24, 25 Страница 26 Страница 27 Страница 28, 29 Страница 30 Страница 31 Страница 32, 33 Страница 34 Страница 35 Страница 36 Страница 37 Страница 38 Страница 39 Страница 40 Страница 41 Страница 42 Страница 43 Страница 44 Страница 45 Страница 46 Страница 47 Страница 48, 49 Страница 50 Страница 51 Страница 52 Страница 53 Страница 54, 55 Страница 56, 57 Страница 58 Страница 59 Страница 60 Страница 61 Страница 62, 63 Страница 64, 65 Страница 67 Страница 68, 69 Страница 70 Страница 71 Страница 72 Страница 73, 74, 75 Страница 76 Страница 77 Страница 78 Страница 79 Страница 80 Страница 81 Страница 82, 83 Страница 84, 85, 86 Страница 87

Рабочая тетрадь
Часть 2. Страницы

Страница 3 Страница 4, 5 Страница 6, 7 Страница 8, 9, 10 Страница 11 Страница 12 Страница 13, 14 Страница 15 Страница 16 Страница 17 Страница 18, 19, 20 Страница 21 Страница 23, 24 Страница 25 Страница 26, 27 Страница 28, 29 Страница 30, 31 Страница 32, 33 Страница 34. 35 Страница 36, 37 Страница 38 Страница 39 Страница 40 Страница 41 Страница 43 Страница 44, 45 Страница 46 Страница 47 Страница 48 Страница 49 Страница 50 Страница 51 Страница 52, 53 Страница 54, 55 Страница 56, 57 Страница 58 Страница 59, 60 Страница 61 Страница 62, 63 Страница 64, 65 Страница 66 Страница 67 Страница 68 Страница 69 Страница 70 Страница 71 Страница 72 Страница 73 Страница 74, 75 Страница 76 Страница 77 Страница 78 Страница 79 Страница 80 Страница 81 Страница 82, 83 Страница 84 Страница 85

Поделись с друзьями в социальных сетях:

Описание ГДЗ

Окружающий мир 2 класс

Рабочая тетрадь часть 1

Автор: Плешаков А.

А.

2017-2021 год

К списку ответов

Окружающий мир 2 класс | Перспектива (Плешаков А.А.)

Название:

Артикул:

Текст:

Выберите категорию:
Все Школа России » 1 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 2 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 3 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 4 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » Избранное »» Моро М.

И. »»» Моро М. И. — Рабочие тетради »»» Моро М. И. — Проверочные, тесты и контрольные работы »» Плешаков А.А. »»» Плешаков А.А. — Окружающий мир »»» Плешаков А.А. — Рабочие тетради и тесты »»» Плешаков А.А. — Тесты »»» Плешаков А.А. — Учебники »» Готовимся к всероссийской проверочной работе »» Канакина В.П. »»» Канакина В.

П. — Рабочие тетради »»» Канакина В.П. — Контрольные и проверочные работы »» Быкова Н.И. — Spotlight »»» Быкова Н.И. — Рабочие тетради Spotlight »»» Быкова Н.И. — Учебники Spotlight »»» Быкова Н.И. — Контрольные задания и тесты Spotlight. Английский в фокусе »»» Быкова Н.И. — Для учителей и родителей »»» Быкова Н.И. — Spotlight. Рабочие тетради и учебники Перспектива » 1 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО, ОБЖ »» Информатика » 2 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО, ОБЖ »» Информатика » 3 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО, ОБЖ »» Информатика » 4 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО, ОБЖ »» Информатика » Избранное »» Математика — Дорофеев Г.

В.; Петерсон Л.Г.; Бука Т.Б. »» Русский язык — Климанова Л.Ф.; Михайлова С.Ю. »» Окружающий мир — Плешаков А.А.; Новицкая М.Ю. »» Литературное чтение — Климанова Л.Ф.; Коти Т.Ю. »» Проверочные, контрольные работы, тесты Начальная Школа 21 век » 1 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 2 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 3 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 4 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » Избранное »» Русский язык »»» Рабочие тетради »»» Контрольные, проверочные »» Математика »»» Рабочие тетради »»» Контрольные работы »» Литературное чтение »»» Рабочие тетради, хрестоматия »»» Контрольные, проверочные работы »» Окружающий мир »»» Рабочие тетради Планета знаний » 1 класс »» Русский язык, Обучение грамоте »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Музыка, ИЗО » 2 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 3 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО » 4 класс »» Русский язык »» Математика »» Литературное чтение »» Окружающий мир »» Технология »» Английский язык »» Музыка, ИЗО, Д-Н культура Дошкольникам 5-7 лет » Математика 5-7 лет » Колесникова » УМК Преемственность » Чтение, Речь, Звуки » Художественная литература Внеурочная деятельность » Юным умникам и умницам »» 1 класс »» 2 класс »» 3 класс »» 4 класс » Хрестоматии 1-4 кл.

» Летняя школа » 3000 примеров » Голубь: Тематический контроль » Справочники 5-11 классы » 5 класс »» География 5-6 »» История 5 »» Английский язык 5 »» Математика 5 »» Русский язык, Литература 5 »» Обществознание 5 »» Биология 5 »» ВПР 5 (Нац.

Обр.) » 6 класс »» География 6 »» История 6 »» Английский язык »» Математика »» Русский язык, Литература »» Обществознание 6 »» Биология 6 » 7 класс »» География 7 »» История 7 »» Английский язык »» Математика »» Русский язык, Литература »» Обществознание 7 »» Биология 7 » 8 класс »» География 8 »» История 8 »» Английский язык »» Математика »» Русский язык, Литература »» Обществознание 8 »» Биология 8 » 9 класс »» География »» История »» Английский язык »» Математика »» Русский язык, Литература »» Обществознание »» Биология » 10-11 классы »» 10 класс »»» Английский язык »»» Математика »»» Биология 10 »»» Обществознание 10 »»» История 1011 »»» Русский язык, Литература »»» География 10 »» 11 класс »»» Английский язык »»» Математика »»» Биология 11 »»» Обществознание 11 »»» Русский язык, Литература ВПР (1-4 класс) » Всерос.

пров. раб. 1 класс » Всерос. пров. раб. 2 класс » Всерос. пров. раб. 3 класс » Всерос. пров. раб. 4 класс » ВПР 4 (Нац. Обр.) Обложки Тетради (12,18,24) » Тетради 12 листов » Тетради 18 листов » Тетради 24 листа ОГЭ 9 (Нац. Обр.) ЕГЭ 11 (Нац.

Обр.) Английский язык » Афанасьева О.В — Rainbow » Быкова Н.И. — Spotlight »» 1-2 класс »» 3 класс »» 4 класс » Кузовлев В.П. — English » Вербицкая — Forward » Верещагина И.Н. — English » Баранова К.М. — Starlight (Звёздный английский) » Биболетова, Комарова, Тер-Минасова

Производитель:
ВсеПросвещениеТорговый дом ПросвещениеНациональное образованиеТитулГрамотейДрофаВакоЭкзаменРусское словоВита-ПрессВентана-ГрафБалассСамоварИнтеллект-центрАСТВоронеж: ИП ЛакоценинаРОСТкнига5 за знанияСмио-прессЭксмоДом ФедороваГенезизАкадемкнигаБИНОМЛегионГенжерКартографияООО «ТИД «Русское Слово-РС»OОО «Дрофа»ЗАО»АСТ-Пресс. Образование»ООО Издательский центр «Вентана-Граф»»АСТ-Пресс»»Экзамен»Издательство «Академкнига/Учебник»»Вентана-Граф»ЗАО «Издательский дом «Федоров»»Федоров»ТЦ Учитель, г. ВоронежПросвещение/УчлитООО»Экзамен»г.МоскваErichKrause®ООО ИД «Генжер»5 ЗА ЗНАНИЕООО «МТО ИНФО»SchoolФорматРемаркаГенезис (Обл.)ПланетаБИНОМ. Лаборатория знанийЮвентаООО»Из-во Ассоциация ХХ1 век»АСТ (Планета знаний)ООО «Легион»70% Пр

Новинка:
Вседанет

Спецпредложение:
Вседанет

Результатов на странице: 5203550658095

Найти

В школе стр. 48 — 51. Окружающий мир 2 класс 2 часть учебник Плешаков А.А.

1) Какие правила поведения в школе, на уроке ты выполняешь?

Из учебника «Окружающий мир» мы узнаём, как правильно вести себя в школе, с товарищами и учителями.

В школе нужно быть вежливым не только с учителем, но и со своими же товарищами. Когда в класс входит учитель, с ним нужно поздороваться, встать из-за парты. Во время урока я слушаю, что говорит учитель, и не разговариваю с друзьями.

Если я хочу что-то сказать, я поднимаю руку и прошу разрешения учителя.

Когда урок заканчивается, я не бегу, толкаясь, на перемену, а дождавшись разрешения учителя, спокойно выхожу из класса.

Я не бегаю и не кричу, не толкаю других ребят.

2) Расскажи о своём школьном коллективе. Какие праздники, конкурсы, викторины проводятся в вашем классе?

Наш школьный коллектив, наш 2 класс, очень дружный.

Мы все разные, но никогда не ссоримся и стараемся помогать друг другу.

У нас много общих интересов и занятий.

В нашем классе часто проводятся викторины и весёлые конкурсы, например, по литературе и по математике.

Мы проводили конкурс лучших чтецов стихотворений, подарков первокласснику и музыкальных номеров к Новому году.

Мы часто проводим различные мероприятия и праздники всем классом.

Вот недавно был Новый год, и мы устроили весёлый утренник, с играми и выступлениями.

Всем было очень весело, и мы дарили друг другу подарки.

3) Чем занимаются ребята вашего класса во время перемены?

Во время перемены некоторые ребята бегают по коридорам и шумят.

Другие готовятся к следующему уроку, повторяют домашнее задание, читают.

Многие просто разговаривают и обсуждают разные события.

4) Как принято обращаться к учителю и другим работникам школы? Нужна ли в школе культура общения?

К учителям, другим сотрудникам школы, принято обращаться на Вы и по имени-отечеству.

Если вам нужно что-то спросить или сделать, вы всегда должны попросить разрешения у учителя.

В школе очень нужна культура межличностного общения, потому что она помогает настроиться на получение знаний, забыть о баловстве и играх.

Соблюдение правил общения делает нас более дисциплинированными.

Правила поведения в школе

1) Эти рисунки Серёжа приготовил для школьной газеты «Хорошо или плохо?». Накройте зелёными фишками то, что, по-вашему, хорошо, а красными — то, что плохо. Объясните своё решение.

Накроем зелёными фишками два верхних рисунка, и красными два нижних.

Хорошо помогать товарищу, тем более, если того обидели, например, уронили портфель, и рассыпали тетрадки.

Хорошо помогать содержать класс в чистоте и порядке.

Плохо разговаривать на уроке, плохо драться на переменах.

2) Прочитайте стихотворение «Перемена». Расскажите, как проходят перемены в вашем классе.

Муравей в этом стихотворении был сильно удивлён тому, как проходит перемена в школе.

Но у нас всё не так.

Есть, конечно, ребята, которые любят побегать и пошуметь, но их немного.

Остальные ученики просто отдыхают и готовятся к следующему уроку.

3) Сформулируйте правила поведения в школе. Послушайте и оцените то, что предложили другие ребята. Составьте памятку в рабочей тетради.

Правила вежливого поведения в школе для 2 класса

1. Никогда не опаздывай на урок.

2. Если ты опоздал, постучи и попроси разрешения учителя войти в класс.

3. Приветствуй учителя стоя.

4. На уроке не отвлекайся, не разговаривай, и внимательно слушай учителя.

5. Если хочешь что-то сказать, подними руку.

6. Не бегай и не шуми на переменах, не мешай другим ученикам готовится к урокам.

7. Не толкайся на лестницах и в дверях.

8. Всегда будь вежлив.

Домашнее задание

1) Что объединяет всех ребят в школьном коллективе?

Ребят в школе объединяет общее дело — они получают знания.

Но также они вместе проводят время, отдыхают на переменах, играют.

2) Как проявляется в школе культура общения?

Культура общения в школе проявляется в вежливом обращении с учителями, другими работниками и ребятами.

3) Какие правила нужно соблюдать на уроке и на перемене?

На уроке нужно внимательно слушать учителя, ни баловаться, ни отвлекаться, не разговаривать.

На перемене не нужно бегать и громко разговаривать, кричать.

Не нужно толкаться.

Перемена нужна для того, чтобы отдохнуть и подготовиться к следующему уроку.

Окружающий мир. Тесты 2 класс. Плешаков

Выберите категорию:

Все Выпускникам начальной школы » Дипломы » Медали » Ленты » Розетки » Грамоты Всероссийская проверочная работа » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир Канцелярия » Бумага А4 » Для творчества » Дидактический материал » Прочая канцелярия Развивающая литература » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Хрестоматия УМК «Школа России». Просвещение, Экзамен, ВАКО » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Технология » ИЗО » Азбука » Информатика » Музыка » Обучение грамоте » Чистописание УМК «Начальная школа XXI век». Вентана-Граф » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Технология » ИЗО УМК «Перспективная начальная школа». Академкнига » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Технология » ИЗО » Азбука » Информатика и ИКТ » Технология УМК «Планета знаний». Дрофа-АСТ » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Букварь УМК «Занкова». Федоров » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир УМК «Перспектива». Просвещение » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Информатика » Технология » ИЗО » Пропись УМК «Гармония». Ассоциация XXI век » Математика » Русский язык » Литературное чтение » Окружающий мир » Пропись Стенды » Классные уголки » Обучающие плакаты » Лента букв и цифр Иностранные языки » 1 класс » 2 класс » 3 класс » 4 класс Портфолио

Производитель:

ВсеАбрисАкадемкнигаАссоциация 21 векБином (ЛБЗ)ВАКОВентана-ГрафДрофаМ-КНИГАПланетаПросвещениеРосмэнРоссийский учебникРОСТКНИГАРусское словоСтрекозаУчительФедоровФеникс +ЭкзаменЭксмо

Honda Engines GC190 на продажу в Каукауна, Висконсин. Pleshek’s Outdoor Power Kaukauna, WI (920) 759-6246

Надежный, легкий источник питания

Разработанный специально для использования в домашнем энергетическом оборудовании, GC160 представляет собой идеальный источник питания для различных потребительских товаров.

Общие области применения

Мойки высокого давления
Культиваторы / культиваторы
Сельскохозяйственное оборудование
Водяные насосы

Топливная экономичность, высокая производительность

Компактная камера сгорания, конструкция верхнего кулачка и конструкция uniblock снижают расход топлива
Мощный крутящий момент в широком диапазоне оборотов помогает уменьшить падение оборотов двигателя из-за внезапного увеличения нагрузки.

Компактный и легкий

Самые легкие двигатели в своем классе
Первый в мире внутренний ремень привода ГРМ общего назначения
Верхний кулачок из прочной пластмассы для долговечности и бесшумности
Конструкция Uni-block

Тихая, плавная работа

Внутренний ремень привода ГРМ обеспечивает бесшумную работу
Шум клапанного механизма и шестерен сведен к минимуму
Точно спроектированные и обработанные компоненты приводят к снижению вибрации

Проверенная надежность

Система Dua-Lube обеспечивает превосходную смазку двигателя
Простая конструкция снижает многие потенциальные возможности потребности в обслуживании
Высококачественные материалы, подгонка и отделка
Одноэлементный воздушный фильтр

Простота использования и обслуживания

Легкий доступ для слива и заливки масла
Легкодоступная свеча зажигания
Проверенная конструкция ремня ГРМ на весь срок службы

Easy Start

Горизонтальный впускной канал с поперечным потоком для сглаживания потока топлива
Автоматическая механическая декомпрессия
Электронное зажигание

Соответствует выбросам

Катализатор не требуется
Встроенный угольный баллон в газовой крышке

Доступные опции

Доступны различные элементы управления для множества различных применений (мойка высокого давления, газонокосилка, дровокол и т. Д.)
Доступна версия с электрическим запуском

Технические характеристики

Тип двигателя: 4-тактный OHC с воздушным охлаждением
Диаметр цилиндра x ход: 69 мм x 50 мм (2,7 дюйма x 2,0 дюйма)
Рабочий объем: 11,4 куб. Дюймов ( 187 см3)
Полезная выходная мощность *: 5,2 л.с. (3,9 кВт) при 3600 об / мин
Полезный крутящий момент: 11,2 Нм (8,3 фунт-фут) при 2500 об / мин
Вращение вала отбора мощности: против часовой стрелки (со стороны вала отбора мощности)
Степень сжатия: 8,5: 1
Карбюратор: дроссельная заслонка горизонтального типа
Система зажигания: транзисторный магнето
Система запуска: возвратная / электрическая
Воздухоочиститель: сухой (бумажный фильтр)
Система регулятора: центробежная механическая
Топливный бак Вместимость: 1.9 кварты США (1,8 литра)
Топливо: неэтилированный бензин с октановым числом 86 или выше
Объем масла: 0,61 кварты США (0,58 л)
Система смазки: разбрызгивание
Сухой вес: 29,1 фунта (13,2 кг)

Размеры

Длина (мин): 13,6 дюйма (345 мм)
Ширина (мин): 14,5 дюйма (369 мм)
Высота (мин): 13,0 дюйма (331 мм)

ВОМ

Тип Q: прямой вал
Тип V: Конический вал
Тип P: Резьбовой тип (SAE)

Новости (полная версия)

Тани Давидюк

Ксении Студеникиной

gə̈c

Ирины Хомченковой

-ge

Вадим Дьячков

Марией Стрыгиной

Айгуль Закирова обсуждала нефинитные формы с аффиксом -šaš (абс. На русском, слайды на английском). Дарья Мордашова проанализировала семантику императивных частиц (аннотация и раздаточный материал на русском языке). Анастасия Сибирева описала каузативные конструкции с особым акцентом на нетривиальное использование двойных причинных (аннотация и слайды на русском языке).
Еще два доклада были посвящены другим вопросам синтаксиса. Наталья Абовян проанализировала свойства изображения (аннотация и раздаточный материал на русском языке). Доклад Анастасии Кирилловой был посвящен синтаксису отрицательной частицы agə̑l (аннотация на русском языке, слайды на английском языке).
Все остальные доклады о Холме Мари, представленные на конференции, не имеют отношения к нашему полевому проекту.
Еще три члена нашей команды сосредоточились на других исследованиях, в которых они участвуют.
Полина Плешак рассказала о некоторых свойствах мокшанского НП. Мария Сидорова проанализировала примерные числовые фразы на ханты. Илья Учитель сосредоточился на некоторых частицах на идиш.
Фотографии с конференции доступны здесь.
Вычислительный и экспериментальный анализ заякоренного гликофосфатидилинозитола протеома паразитической нематоды человека Brugia malayi
% PDF-1.4 % 113 0 объект > эндобдж 154 0 объект > поток application / pdf
Вычислительный и экспериментальный анализ гликофосфатидилинозитол-заякоренного протеома паразитической нематоды человека Brugia malayi
2021-04-26T13: 30: 39-07: 002021-04-26T13: 30: 39-07: 002021-04-26T13: 30: 39-07: 00uuid: 47306ae0-1dd2-11b2-0a00-8209275d6100uuid: 47306ae3- 1dd2-11b2-0a00-aa0000000000 конечный поток эндобдж 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 3 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 4 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 5 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 6 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 7 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 8 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 9 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 10 0 obj > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 11 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 12 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 13 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 14 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 15 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 16 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 17 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 18 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 19 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 20 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 21 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 22 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 23 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 24 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 25 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 26 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 27 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 28 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 29 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 30 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 31 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 32 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 33 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 34 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 35 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 36 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 37 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 38 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 39 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 40 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 41 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 42 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 43 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 44 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 1 0 R / Ресурсы> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Тип / Страница >> эндобдж 45 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 46 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 47 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 48 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 254 0 объект [256 0 R 257 0 R] эндобдж 255 0 объект > поток HdQK # Yi’vm = C + _ * EX * Ǹ $ ͿCU က 53EUP7E9Qd ۣ г / Fd Т 4 {Q̀ Rɚ) WFsy B $ + tb | TфAG ݣ w & s # 2GbΑ8 :.x7FX’bwb] kq ᬃ sfUW g & F? rrfz @ s Z (NpHI «EYD> 7h] (‘a4
Toxins | Free Full-Text | Структурная основа взаимодействия порообразующего токсина / мембраны
1. Введение
Плазменная мембрана действует как полу- барьер проницаемости между клеткой и внеклеточной средой, а его целостность важна для выживания и устойчивости клеток.Поэтому нарушение плазматической мембраны считается одним из древних механизмов уничтожения клеток, с помощью которых бактерии вторгаются в людей.Белки, образующие поры (PFP), относятся к числу таких молекул, которые могут изменять проницаемость мембран, в которых порообразующие токсины (PFT) составляют основной класс [1,2,3]. Убийство клеток-мишеней с помощью PFT является обычным механизмом вирулентности для широкого круга патогенных бактерий. Как самый большой класс бактериальных токсинов, PFT в основном вырабатываются, но не исключительно, патогенными бактериями. Однако PFP были идентифицированы во всех царствах, особенно у эукариот, как часть их иммунной системы [2]. Примечательной особенностью (и PFT) является то, что они изначально и обычно складываются в водорастворимую мономерную структуру.После связывания со специфическими рецепторами (сахарами, липидами или белками) в мембране PFP (PFT) затем олигомеризуются с образованием трансмембранных пор с утонченной архитектурой, которые изменяют проницаемость мембраны и вызывают несколько ответов в клетках-мишенях. PFP, продуцируемые эукариотическими организмами, повреждают мембрану бактерий, индуцируя комплекс атаки мембраны комплемента (MAC), повреждая мембрану злокачественной клетки с помощью перфорина [2]. Пора, образованная PFT, изменяет проницаемость мембраны, что позволяет небольшим молекулам, таким как АТФ, определенные ионы или большие молекулы белков, проходить.Например, у грамотрицательных бактерий системы секреции типа III позволяют эффекторным молекулам проходить через перфорирующую мембрану. Субъединицы B токсинов AB позволяют проходить субъединице A [4,5]. Наконец, образование пор в мембране приводит к изменению клеточного поведения и гибели клеток. Взаимодействие PFT и мембраны способствует росту бактерий и их колонизации из-за иммунного ответа хозяина.
Изучается все большее количество родственных порообразующих токсинов патогенных микроорганизмов.Демонстрация их структуры и влияния на взаимодействие между хозяином и патогеном помогает четко понять механизм заболевания. Здесь мы рассмотрели структурные механизмы порообразования и взаимодействия хозяин-патоген PFT на атомарном уровне, способствуя разработке новых терапевтических стратегий для борьбы с инфекцией, нацеленной на PFTs и / или взаимодействие рецепторов хозяина.
2. Структурная классификация и характеристика порообразующих токсинов
Основываясь на основной вторичной структуре трансмембранного мотива, PFT могут быть отнесены к категории α-PFT, которые образуют α-спиральную трансмембранную пору и β-PFT, которые образуют β-бочку. поры.Α-PFT используют амфипатические спирали для создания пор в целевой мембране, а β-PFT используют β-цилиндр для пересечения мембраны. Как описано в таблице 1, было идентифицировано девять подсемейств PFT. Разные структурные характеристики семейства PFT приводят к различным механизмам вставки (Рис. 1). Как правило, неактивная форма PFT секретируется в виде растворимого мономера, который затем превращается из растворимого состояния в трансмембранную форму (рис. 2). Понимание процесса порообразования тонкой мембраны все еще не совсем ясное и требует специальных методов для отслеживания кинетики порообразования.
2.1. Семейство α-PFT
Структура многих α-PFT была определена с помощью рентгеновской кристаллографии и электронной микроскопии. Среди пяти подсемейств α-PFT три подсемейства, включая подсемейство колицина, подсемейство цитолизина A и подсемейство актинопоринов, являются наиболее изученными PFT; одно подсемейство семейства RTX — это α-PFT с ограниченными знаниями; последнее подсемейство — CAMP, которое было недавно обнаружено и имеет уникальную структуру. Для некоторых α-PFT мономерные PFT связываются с мембраной на стадии, предшествующей образованию пор, и α-спирали обычно используются для пробивания пор и встраивания в мембрану.
2.1.1. Подсемейство колицинов
Колицины представляют собой типичные α-PFT, которые, как правило, продуцируются Escherichia coli (E. coli) и токсичны для них. В штаммах E. coli идентифицировано 25 различных членов колицина, среди которых колицины E1, A, B, N, Ia, Ib, K, 5, 10 являются порообразующими колицинами [62]. Эти PFT используются для избирательного уничтожения других бактериальных популяций в микробном сообществе, пробивая отверстия во внутренних мембранах этих бактерий [63]. Первой описанной структурой PFT был колицин A, представляющий уникальную модель спиралей, свернутых наизнанку, когда они вставлены в липидные бислои.Наименьший порообразующий колицин — это колицин N. Эти порообразующие мотивы колицина на мембране состоят из пучка α-спиралей. Сообщалось, что во время образования пор, за исключением колицина A, колицин E и Ia также приводит к «зонтичной» конформации с олигомеризованными димерами или ансамблями более высокого порядка, что было показано спектрами электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) [64]. Более того, в сочетании с электростатическим связыванием с поверхностью и гидрофобным взаимодействием колицины в конечном итоге образуют зрелые поры мембраны.Более раннее исследование показало, что некоторые спирали скрыты внутри колицинов и образуют гидрофобную структуру петли шпильки в растворимом состоянии. После спонтанного связывания с мембранами-мишенями гидрофобные α-спиральные шпильки открываются, образуя трансмембранные зонтичные поры, а затем вставляются в липидный бислой мембраны [65]. Между тем, установка гидрофобной шпильки также может активировать полимеризацию белка. Низкий pH и отрицательно заряженная микросреда на границе раздела мембран могут запускать это событие разворачивания, формируя неспецифические потенциал-зависимые поры, подтвержденные исследованиями с одной молекулой [66], что приводит к деполяризации мембраны и, в конечном итоге, гибели клеток.Точная структура и стехиометрия поры колицина требуют дальнейшего изучения. Помимо токсина E. coli, другие бактериальные токсины и эукариотические белки также адаптируют колицин-складчатую структуру. Например, дифтерийный токсин опосредует образование пор с помощью колицин-складчатого домена для облегчения транслокации каталитической субъединицы токсина через эндосомальную мембрану, а закисление эндосомы запускает конформационные изменения домена токсина и, в конечном итоге, встраивание в цитоплазму [67].Bacillus thuringiensis продуцирует порообразующий инсектицидный токсин Cry также проявляет колицин-фолд [68], гомологичную родословную складку с колицинами для образования систем секреции бактерий III типа [69]. В апоптотическом пути эукариот производные фага порообразующие белки BAX и гомологичные антагонисты / киллеры BCL-2 (BAK) накапливаются в митохондриях и образуют колицин-подобные структурные складки, опосредуя высвобождение цитохрома с, что приводит к гибели клеток [70 ].
2.1.2. Подсемейство Cytolysin a
Подсемейство цитолизина A включает цитолизин A (ClyA, также известный как HlyE или SheA), негемолитический трехкомпонентный энтеротоксин (Nhe) и компонент B энтеротоксина гемолизина BL (Hbl), составляющий другой отдельный класс энтеротоксина α-ПФТ [71].Цитолизин А продуцируется некоторыми штаммами E. coli, а гомологи ClyA также продуцируются Salmonella enterica и Shigella flexneri. Другой член подсемейства цитолизина А, Nhe и Hbl, продуцируется Bacillus cereus. Определены мономерная структура ClyA и поровые комплексы [15]. Соответственно, наблюдаются большие и заметные конформационные изменения с участием 80% остатков и уникальные механизмы порообразования. В растворе мономер ClyA демонстрирует удлиненную, почти полностью α-спиральную вторичную структуру и короткий гидрофобный β-язычок.При взаимодействии с мембраной β-язычок отделяется от белка и приближается к богатой холестерином мембране, запуская конформационные изменения и перестройку N-концевых амфипатических α-спиралей и приводя к его встраиванию внутрь мембраны [15]. Более того, двенадцать мономеров олигомеризуются вместе с образованием кольцевой спиральной цилиндрической поры [14,15] (рис. 1А). Детергент дигитонин может индуцировать подобный тримеру промежуточный олигомер ClyA, даже без образования зрелой поры. Однако вопрос о том, образуются ли тримеры в ходе регулярного процесса порообразования, требует дальнейшего подтверждения [16].Члены подсемейства Cytolysin A используют аналогичный механизм порообразования, хотя и с различным количеством составов протомеров. Подсемейство Cytolysin A содержит одно-, двух- и трехкомпонентные члены. E. coli ClyA содержит однокомпонентный, а YaxAB — двухкомпонентный. Было установлено, что YaxAB из Yesinia enterolitica и XaxAB из Xenorhabdus nematophila обеспечивают аналогичную структуру с ClyA, но демонстрируют низкую идентичность последовательностей [20,72]. В зрелой поре YaxAB двухкомпонентные белки (двудольные PFT) расположены в виде десяти симметричных гетеродимеров, показывающих выступающий край сверху [19], тогда как XaxAB содержит 12-15 гетеродимеров.XaxA стабилизирует и активирует XaxB, в то время как XaxB отвечает за прокалывание мембраны [20]. За исключением одинарных и двудольных PFT, также были решены трехсторонние PFT; например, Hbl состоит из белков Hbl-L1, Hbl-L2 и Hbl-B, тогда как Nhe состоит из NheA, NheB и NheC. Однако способ сборки этих трехчастных подсемейств ClyA неясен. Недавно другой трехкомпонентный токсин подсемейства ClyA, AhlABC, был идентифицирован у Aeromonas hydrophila (A. hydrophila), и он показал, что все три компонента участвуют в максимальном лизисе клеток.Тетрамер AhlC сначала распадается на мономеры для связывания мембраны и рекрутирует AhlB. Затем AhlB претерпевает большое конформационное изменение от β-язычка к расширенной α-спирали и образует активную пору при связывании AhlA [73]. Кроме того, между этими членами подсемейства PFT существуют различия в длине спирали. Например, спираль намного короче в Nhe A, компоненте трехкомпонентного токсина Nhe [17], что приводит к другому процессу порообразования. Формирование поры ClyA требует концентрированных α-спиралей по механизму кольцевой олигомеризации.Двенадцать мономеров ClyA олигомеризуются вместе и претерпевают большие конформационные изменения с образованием кольцевой спиральной цилиндрической поры [15]. Другой альтернативный и неклассический механизм порообразования заключается в том, что E. coli ClyA образует растворимый препор внутри везикул внешней мембраны (OMVs). ) [74]. Для цитолизина Vibrio cholerae (VCC) член подсемейства гемолизинов также использует аналогичный OMV-опосредованный механизм доставки [74]. Однако эта система секреции и доставки токсина, опосредованная OMV, еще недостаточно хорошо проиллюстрирована.
2.1.3. Подсемейство актинопоринов
Токсины актинпоринов продуцируются морскими анемонами. Эти токсины представляют собой еще одно отдельное подсемейство α-PFT. Ядовитый ядовитый белок актинпорин может парализовать хищников и защищать себя, пробивая поры в мембране клетки-мишени. Подсемейство актинпоринов, включая эквинатоксин II (EqtII), продуцируемый Actinia equina, токсин фрагацеи C (FraC), продуцируемый Actinia fragacea, и стихолизин I и II (Stn I и Stn II), продуцируемый Stichodatyla helianthus, хорошо изучены.Эти белки состоят из центральной структуры с β-сэндвичем и двух фланкирующих α-спиралей. После связывания с липидной мембраной за счет специфического распознавания сфингомиелина (SM) или липидных мембран с разделенными фазами, N-концевая амфипатическая спираль отделяется от β-сэндвича и вставляется в липидный бислой мембраны с образованием поры для трансмембранной функции. В конце концов, 3-4 мономера олигомеризуются на поверхности мембраны и одновременно внедряются в мембрану с образованием трансмембранной поры с перестройкой мембранных липидов, обнаруживаемой с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии и атомно-силовой микроскопии [75], но без промежуточного состояния до поры.Другой атипичный PFT со сходной β-сэндвич-структурой с актинопорином α-PFT — это термостабильный прямой гемолизин (Tdh), продуцируемый Vibrio parahaemolyticus [76,77]; Образование внутрипротомерных дисульфидных связей во время процесса складывания / сборки Tdh способствует олигомеризации Tdh. Однако, является ли это α-PFTs, до сих пор неясно. Стехиометрия пор, образованных этим подсемейством актинопоринов, варьируется от тетрамеров, таких как Eqt II [78] и Stn II [12], до октамеров, таких как FraC [79]. Определены рентгеновские кристаллические структуры FraC в мономерной, димерной и октамерной формах.Это показало, что октамерная пора FraC собирается со сфингомиелином в соотношении 1: 1. Здесь сфингомиелин действует как рецептор и кофактор для завершения сборки зрелой поры. Кроме того, N-концевая амфипатическая спираль FraC претерпевает конформационные изменения вблизи состояния протомера в порах. Пора FraC включает восемь протомеров (рис. 1А) с гидрофобным мотивом в направлении олигомера и гидрофильным мотивом в направлении поры. Эта α-спиральная структура пучка предполагает, что протомеры актинопоринов могут непосредственно собираться в конформацию пор без промежуточного состояния перед порой, хотя механизм подсемейства актинопоринов не полностью ясен.Во многих α-PFTs это сопряженные и синхронные события для олигомеризации и встраивания в мембрану, чтобы окончательно сформировать трансмембранную пору [80]. Гидрофобные остатки расположены во внешнем просвете по направлению к липиду мембраны, а гидрофильные остатки расположены во внутреннем просвете по направлению к молекулам воды.
2.1.4. Другие семейства α-PFT
Структура и механизм порообразования PFT изучаются и изучаются в течение нескольких десятилетий. Некоторые неклассифицированные сироты PFT, такие как подсемейство повторов в токсине (RTX), представляют собой уникальный класс бактериальных экзопротеинов, обладающих многочисленными богатыми глицином повторяющимися единицами (G – G – X – G– (N / D) –D – X — (L / I / V / W / Y / F) –X) на С-конце каждого белка.Это подсемейство включает альфа-гемолизин (HlyA) из E. coli, аденилатциклазу-гемолизин (CyaA) из Bordetella pertussis [81] и многофункциональный автопроцессинг-повторы в токсине (MARTX) из A. hydrophila и других патогенов [82]. Эти мотивы RTX обнаруживают внутренне удлиненную неупорядоченную спираль в состоянии Apo, в то время как обнаруживают жесткую складку в состоянии связывания кальция, которое участвует в кальций-зависимом процессе секреции для однонаправленного экспорта через секреторный канал [83]. Это изменение конформации относится к видам бактерий, продуцирующих RTX.Кальций-связывающий домен RTX токсина аденилатциклазы (CyaA), продуцируемый Bordetella pertussis, требует субмиллимолярных концентраций кальция для активной транслокации токсинов CyaA через плазматическую мембрану [84]. В подсемействе RTX количество повторов различно среди членов их подсемейства. Эти RTX образуют параллельную конформацию β-валика, присутствующую в виде правой спирали [85,86]. Другие факторы, такие как состав и концентрация липидов в мембранах, влияют на нарушения мембран RTX токсином.Следовательно, порообразование токсинами RTX может быть сложным динамическим процессом, включающим ремоделирование мембраны. Исследования, описывающие стехиометрию и механизм порообразования подсемейством RTX, ограничены и еще предстоит решить. Christie, Atkins, and Munch-Petersen (CAMP) — еще один уникальный порообразующий токсин, продуцируемый Streptococcus uberis, Propionibacterium acnes, Streptococcus agalactiae, и Mobiluncus curtisii. Недавно была определена растворимая форма структуры CAMP из Streptococcus agalactiae и Mobiluncus curtisii, и они выявили уникальный бактериальный токсин [21,22].Это подсемейство CAMP представлено α-спиралями, связанными с N-концевой 5 и C-концевой 3-спиралью. Однако его взаимодействие с мембраной остается проблемой. ЦАМФ может связываться с гликозильными фрагментами заякоренной клеточной мембраны GPI, способствуя встраиванию N-конца ЦАМФ в мембрану. Механизм взаимодействия токсина САМР с мембраной-мишенью требует дальнейшего изучения. Расшифровка этого механизма будет способствовать лучшему пониманию порообразования и его когемолитической активности этим подсемейством PFT.
2.2. Семейство β-PFT
β-PFT секретируются широким спектром патогенных бактерий и более широко изучаются в течение нескольких десятилетий. Среди β-PFT три являются наиболее изученными PFT, включая гемолизины, аэролизины, холестерин-зависимые цитолизины (CDC), и один представляет собой подсемейство относительно гомологичных комплексов мембранной атаки / перфоринов (MACPF). β-тяжи отвечают за формирование β-ствола и вставку в мембрану. Гидрофобные остатки трансмембранного домена расположены далеко от ядра поры по направлению к липидам мембраны.
2.2.1. ПФТ S. aureus подсемейства
гемолизина вносят свой вклад в патогенез по-разному, взаимодействуя с различными поверхностными белками, особенно в иммунной системе, что приводит к гибели клеток и распространению бактерий, включая α-гемолизин (Hla) с одним компонентом, собирающимся в гептамерные поры и γ-гемолизин AB (HlgAB), HlgCB, лейкоцидин Пантона-Валентайна (PVL), лейкоцидин ED (LukED) и лейкоцидин AB (LukAB или LukGH) с двумя компонентами, собирающимися в октамерные поры с четырьмя копиями каждой субъединицы [87].Кроме того, токсин некротического энтерита B (NetB) и δ-токсины из Clostridium perfringens [32], цитолизин из Vibrio cholera [88] и гемолизин из Vibrio vulnificus [34] также являются заметными членами подсемейства гемолизинов в β-PFT, которые олигомеризуются в маленькие β-цилиндрические поры. Большинство членов подсемейства гемолизинов кристаллизовались в растворимой форме или в конформации пор, что дает структурные характеристики семейств β-PFT. Например, гемолизины S. aureus представляют собой довольно компактную структуру в растворе, а предстебельный домен, составляющий трехцепочечный β-лист, закреплен водородной связью и расположен напротив ядра белка.После олигомеризации престебель высвобождался и отделялся от ядра белка с образованием 14-нитевого β-цилиндра с помощью антипараллельной β-шпильки и соседних шпилек, что приводило к кольцевидной гептамерной структуре препоры. Этот внешний гидрофобный домен β-цилиндра спонтанно внедряется в мембрану согласованным образом с образованием трансмембранных пор. Другая возможность состоит в том, что внедрение мембраны и образование амфипатического β-ствола являются одновременными событиями. Кристаллическая структура лектинового домена VHH обнаруживает гептамерное кольцевое расположение, подобное VCC [34].
2.2.2. Подсемейство аэролизинов
Второе подсемейство β-PFT — это подсемейство аэролизинов (aβ-PFT). Первый известный член подсемейства аэролизинов, аэролизин, продуцируется грамотрицательными видами Aeromonas и родственными членами подсемейства, присутствующими в бактериях, растениях и эукариотах и во всем мире. Например, ε-токсин и энтеротоксин, продуцируемый Clostridium perfringens, α-токсин, продуцируемый Clostridium septicum, монализин, продуцируемый Pseudomonas entomophila, параспорин, продуцируемый B.thuringiensis, энтеролобин, продуцируемый Enterolobium contortisiliquum; лизенин дождевого червя, биомфализин, продуцируемый улиткой Biomphalaria glabrata; βγ-CAT из лягушки Bombina maxima также являются членами подсемейства аэролизинов. В то время как бактериальные aβ-PFT участвуют в уничтожении клетки-хозяина или в роли перфорации у других видов, эукариотические члены aβ-PFT играют роль в защите от паразитов или патогенов. У членов подсемейства аэролизинов первичные последовательности разнообразны; однако кристаллографические исследования выявили замечательное структурное сходство среди членов аэролизинов, включая ε-токсин, энтеротоксин (CPE), α-токсин, гемолитический лектин (LSL), токсины гидролизина, монализин и токсины лизенина.Это подсемейство aβ-PFT было выявлено и охарактеризовано как включающее общую структурную складку, состоящую из двух концентрических β-стволов.
Белок аэролизиновой складки, богатый β-структурой, является многодоменным, хотя и относительно небольшим, с молекулярной массой 30 и 60 кДа. Обычно aβ-PFT состоят из одного или нескольких N-концевых рецептор-связывающих доменов (RBD) и C-концевого порообразующего модуля (PFM). Однако также встречаются RBD, расположенные на С-конце, например, в структуре лизенина и энтеротоксина.Исключением является то, что монализин, продуцируемый Pseudomonas entomophila, имеет глобулярную однодоменную структуру и лишен RBD [47]. Про-поры монализина образуют стабильный кольцевидный 18-мерный комплекс с двумя дисками, в которых область, охватывающая мембрану, полностью скрыта. Эта конформация отличается от других β-PFT, которые рецепторно-зависимы для мембранного взаимодействия [47]. Структурная PFM, необходимая для образования пор, является общей консервативной особенностью aβ-PFT, в то время как RBD показывает различия в последовательностях.Аэролизин в растворе имеет сильно вытянутую форму. Первоначально аэролизин синтезируется как протоксин с С-концевым удлинением, где он олигомеризуется в гептамерную кольцеобразную структуру после отщепления С-концевого пептида [39]. Промежуточные пре-поровые и зрелые поровые структуры аэролизина в процессе порообразования были определены путем сочетания рентгеновской кристаллографии и крио-электронной микроскопии (Cryo-EM) [40]. Как правило, мономеры собираются в пре-поровую структуру с закреплением гептамерного олигомера на поверхности мембраны.Затем петли, предшествующие стеблю, складываются в трансмембранные амфипатические β-шпильки с образованием β-цилиндрической поры. В конце концов, пре-пора поворачивается в сторону, чтобы перейти в трансмембранную пору с помощью механизма закручивания, который, вероятно, будет общим для других подсемейств аэролизина. В течение этого периода он претерпевает впечатляющую перестройку пре-поры аэролизина от формы перевернутого гриба до дискообразной внеклеточной структуры с центральной β-цилиндрической ножкой, если смотреть сверху вниз [3]. Поры аэролизина, состоящие из шести-девяти протомеров, относительно малы, их диаметр составляет от 1 до 4 нм.Подобная структура пор наблюдалась также в гемолитическом лектине CEL-III из Cucumaria echinata [89]. Недавнее исследование выявило еще один новый механизм сворачивания белка и порообразования с помощью аэролизина. Олигомеризованный мономер может образовывать два высокостабильных концентрических β-цилиндра с застежкой-молнией. Этот аэролизин образует заключительную пору в липидном бислое с помощью механизма поршневого прокалывания [39]. Режим порообразования аэролизина аналогичен многим другим β-PFT. Но для подтверждения механизма их взаимодействия необходимы дальнейшие исследования.При образовании пор мембраны амфипатические β-бочки стабилизируются, и они фиксируются на месте с помощью особого механизма. Заряженные остатки трансмембранной β-шпильки в S. aureus Hla и гидрофобные остатки трансмембранной β-шпильки в аэролизине ответственны за закрепление ствола, предотвращающее движение. Последний принял заклепочную конфигурацию в двухслойном сердечнике. Кроме того, просвет β-цилиндров аэролизина также полон заряженных остатков, что отличается от таковых в S. aureus Hla.Кроме того, эпсилон-токсин Clostridium perfringens (Etx, ε-токсин) также входит в состав aβ-PFT. Общая структура поры Etx напоминает аэролизин с β-стволом, охватывающим высоту поры (рис. 1В). Пора ε-токсина предполагает консервативный и концентрический двойной β-цилиндр с гептамерной олигомеризацией. Он также лишен вестибулярной области, наблюдаемой в подсемействе α-гемолизина, а протомер состоит из β-шпильки, шапочки и домена RBD [36]. Во время порообразования мономер Etx претерпевает большие конформационные изменения, среди которых β-шпилька с вставной петлей разворачивается, чтобы создать внутренний β-цилиндр, в то время как домен кэпа удаляется от внутреннего β-цилиндра.
2.2.3. Подсемейство холестерин-зависимых цитолизинов
Подсемейство холестерин-зависимых цитолизинов (CDC) представляет собой большое подсемейство β-PFT, которые образуют большие олигомерные поровые комплексы, ответственные за разрушение клеточных мембран [90,91]. Это подсемейство в основном продуцируется грамположительными бактериями, включая перфринголизин O (PFO) Clostridium perfringens [92], суилизин (SLY) Streptococcus suis, стрептолизин O (SLO) Streptococcus pyogen, интермедилизин (ILY) Streptococcus intermediate O (LLO) Listeria monocytogenes [53], антролизин O (ALO) Bacillus anthracis [93] и пневмолизин (PLY) Streptococcus pneumoniae.Структуры CDC были определены с помощью рентгеновского кристалла, электронной микроскопии и анализа АСМ. В отличие от гемолизина и аэролизиноподобного малого β-PFT, вносящего вклад в единственную β-шпильку для формирования пор β-цилиндра, и в отличие от образующего большие поры β-PFT, каждый протомер CDC вносит две амфипатические β-шпильки в трансмембранный β-цилиндр. CDC собраны в очень большие кольцеобразные структуры, составляющие от 30 до 50 протомеров. Однако факторы и механизмы, запускающие трансмембранные поры, все еще не совсем ясны.Консервативный мотив F / YF / Y-Xn-YGR с CDC считается критическим в качестве сенсора, инициирующего переход от препоры к поре [94]. Все CDC имеют одинаковую доменную структуру, как показано при сравнении последовательностей, и, таким образом, вставляют в целевые мембраны таким же образом. PFO представляет собой удлиненный мультидоменный белок, богатый β-листами, и относительно стабильная граница раздела между D3 и D1, 2 играет ключевую роль в формировании пор с помощью PFO и даже целых CDC [95]. Все CDC секретируются, за исключением пневмолизина, который высвобождается после бактериального автолиза или терапии антибиотиками.Пневмолизин (PLY) — еще один CDC с типичными характеристиками. Структура растворимого мономера и кольцеобразной поры PLY была определена с помощью дифракции рентгеновских лучей [96] и крио-ЭМ, соответственно, которые иллюстрируют механизм внедрения мембраны и формирования зрелой поры с помощью покадровой АСМ [57]. Мономеры PLY собираются в кольца на поверхности мембраны бок о бок, затем спирали D3 свертываются и запускают повторную укладку соседнего мономера. Разворачивающиеся β-шпильки проходят через гидрофобную мембрану и сливаются в один большой β-бочонок из 168 нитей, что необратимо.В общем, мономер CDC представляет собой центральный β-сэндвич, фланкирующий две пары коротких α-спиралей. После олигомеризации α-спирали претерпевают резкий прионоподобный конформационный переход от α-спирали к β-цепи. 80–200 β-цепей вставляются в мембрану, образуя гигантский β-бочонок. Этот механизм действия наблюдается также у гемолитического лектина CEL-III морского огурца [89]. Посредством механизма олигомеризации последовательного добавления CDCs продуцируют не только абсолютные кольцевые поры, но также образуют дугообразные структуры в состоянии препоры, и оба состояния являются активными, что также было подтверждено для SLY [97].Более того, выравнивание β-нитей важно для сборки и образования пор мембраны. В пре-поровом комплексе β-шпильки очень динамичны, в то время как в поровом состоянии они обнаруживают заблокированный β-бочонок, а β-тяжи создают 20 ° наклон к мембране [98]. Одно исследование, проведенное AFM, показало, что CDCs претерпевают конформационное удлинение на поверхности мембраны во время перехода от пор до пор [99]. Пре-поры CDC переходят в пору, подвергаясь схлопыванию. Этот процесс требует наклона β-тяжей к мембране и вращения основного домена токсина с помощью механизма закрутки, о котором также сообщается при коллапсе аэролизина [40].Сходная архитектура наблюдалась также для перфоринов млекопитающих и компонентов комплекса атаки на мембрану [91], предполагая, что эти белки могут быть древними родственниками. Понимание механизма порообразования CDC также может способствовать развитию других относительных белков. Кроме того, в процессе порообразования внедрение мембраны может сопровождаться организацией липидов мембраны. Необходимы дополнительные исследования, чтобы выявить механизм взаимодействий хозяин-PFT на молекулярном уровне.
3. Диверсификация взаимодействия PFT с компонентами мембраны
PFT, продуцируемые разными организмами, нацелены на разные мембраны хозяина, взаимодействуя с мембранным сахаром, липидами и белковыми рецепторами или рецептороподобными молекулами путем распознавания определенных структурных мотивов (Рисунок 2).Эффективное взаимодействие PFT с рецепторами клеточных мембран является критическим начальным шагом для управления самосборкой PFT, формированием пор мембраны и последующим набором сигнальных каскадов и клеточных ответов [2]. В этом процессе PFT сначала связываются с мембраной, чтобы сконцентрировать мономерные PFT на поверхности мембраны, облегчая самосборку и встраивание в мембрану протомеров PFT. Бактериальные PFT или PFP, которые нацелены на бактерии, часто связываются с гликанами, которые ковалентно связывают ассоциированные с мембраной белки или в области гликозилфосфатидилинозита (GPI).Например, было показано, что VCC подсемейства гемолизинов связывает гликозилированные белки клеточной поверхности через домен β-трилистника и β-призмы, среди которых β-призма может усиливать связывание VCC с клеточной мембраной поверхностными гликанами для облегчения дальнейшей олигомеризации и образования пор. [100,101]. Другое исследование показало, что сиалогликопротеин, гликофорин Bis, является рецептором VCC [102]. VVH распознает различные клеточные поверхности путем связывания с различными сахарами, такими как глицерин, N-ацетил-D-галактозамин (GalNAc) и N-ацетил-D-лактозамин (LacNAc) [34], что указывает на универсальный способ распознавания VVH, вторгающегося в хозяина. клетка.Аэролизин подсемейства аэролизинов связывается с N-связанным гликаном и якорем GPI на клеточной мембране своим N-концевым выступающим доменом ядра белка [103,104]. Кроме того, ε-токсин подсемейства аэролизинов связывается с клеточным рецептором 1 вируса гепатита А (HAVCR1), O-связанным гликопротеином [105]. В другом рецепторе, мембранном протеолипидном миелине тетраспана и белке лимфоцитов (MAL), вторая внеклеточная петля имеет решающее значение для связывания и цитотоксичности ε-токсина [36]. Интермедилизин (ILY) подсемейства CDC связывается с CD 59 в клетках человека, который представляет собой GPI-заякоренный белок [106].Токсины подсемейства CAMP могут также функционировать посредством присоединения к GPI-фрагменту на поверхности эукариотических клеток [21,107]. Колицин N подсемейства колицинов сначала концентрируется на внешней мембране бактерий путем связывания с липополисахаридами (LPS), а затем перемещается на внутреннюю мембрану через белки поринов [108]. Кроме того, эукариотические лектины С-типа проявляют активный иммунный ответ за счет связывания с пептидогликановым углеводом клеточной стенки грамположительных бактерий и олигомеризации с образованием поры гексамерной мембраны [109].Для образования пор на мембране некоторые PFT также предпочитают связывание с липидами в мембране, и тип липидов играет важную роль в образовании пор. В подсемействе аэролизинов было обнаружено, что аэролизин связывается с липидными рафтами и липид-заякоренным белком [110]. Лисенин специфически связывается со сфингомиелином [111], который содержится в липидных рафтах. В качестве конститутивного кофактора сфингомиелин участвует в сборке поры FraC токсина морского анемона [79]. Сайты связывания липидов и липидная среда в этом токсине модулируют аффинность и специфичность связывания с мембраной.Помимо гликозилированных белков и связывания рецепторов, специфические мембранные липиды, включая холестерин и сфинголипид, также могут регулировать порообразующую активность VCC [112,113], однако они не показали значительной структурной специфичности во взаимодействии токсин-холестерин. Цитолизин Vibrio cholerae (VCC) неспецифически связывается с липидным бислоем мембраны посредством разделения, обусловленного амфипатичностью, и специфически связывается с головной группой фосфолипидов мембраны через мотив VCC [113]. Холестерин, другой липид, широко распространенный в липидных рафтах, опосредует олигомеризацию CDC-подобных доменов в липидных рафтах. .Холестерин необходим для цитолитической активности CDC. В подсемействе CDC PFO широко используется для изучения взаимодействия CDC с мембранами. Олигомеризация ПФО и порообразование зависят от концентрации холестерина в мембране хозяина. Состав и расположение мембранных липидов важны для формирования пор CDC [114]. Сообщалось, что липидная среда имеет решающее значение для взаимодействия LLO с холестерином с помощью 19F-ЯМР-спектроскопии [115]. Так что регулирование порообразования достижимо путем изменения липидного состава.В специфических мембранных средах структура L3 и, возможно, L2 CDC может способствовать оптимальному связыванию различных CDC [116]. Консервативный ундекапептид ECTGLAWEWWR и пара треонин-лейцин среди CDC обеспечивают ключевые мотивы для связывания с мембраной [117] и образования пор PFO [118]. Помимо липидных рафтов, сами липиды могут непосредственно регулировать образование пор мембран. Например, кишечные колицины β-PFT показали анионный липид, кардиолипин, во внутренней мембране бактерий [64], способствующий конформации поры зонтика.Помимо сахаров и липидов, были идентифицированы некоторые специфические белковые рецепторы PFT. Например, дезинтегрин и металлопротеиназа 10 (ADAM10) могут быть рецептором белка, который имеет высокое сродство к α-гемолизину (Hla) S. aureus и обеспечивает мишень цитотоксической активности для эпителиальных клеток [119]. Cry, биологический инсектицид, продуцируемый Bacillus thuringiensis, связывается с рецептором аминопептидазы N и кадгерин-подобными белками. Кроме того, для иммунной системы хозяина PFT нацелены на отдельные иммунные клетки, связывая специфические рецепторы.PVL поражает нейтрофилы, даже моноциты и макрофаги, связываясь с рецептором C5a (C5aRs) [120]. CD31 или PECAM-1 на эндотелиальных клетках является специфическим мембранным рецептором β-токсина Clostridium perfringens и необходим для взаимодействия [121]. В большинстве случаев холестерин на мембранах-мишенях показан как рецептор CDC. Специфические структурные мотивы CDC ответственны за распознавание и связывание с рецепторами холестерина. В других случаях интермедилизин (ILY) CDC связывается с рецептором CD59 (GPI-заякоренный белок) [106], в котором холестерин не является прямым рецептором, но все же необходим для образования пор мембраны.Кристаллы ILY были недавно определены в растворимом мономере и комплексе с человеческим рецептором CD59, который определяет два различных интерфейса. Также было обнаружено, что пептид, производный от ILY, ингибирует порообразование, препятствуя связыванию лиганда и рецептора [50,51]. Вагинолизин (VLY), CDC, продуцируемый Gardnerella vaginalis, может связываться как с CD59, так и с холестерином в качестве рецепторов [122]. Фактически, CDC независимо связывают гликан и холестерин.
Эти характеристики PFT дают представление о структурно-ориентированном дизайне PFT-связывающих пептидов и нарушении взаимодействия с их мембранными компонентами-мишенями, открывая перспективы для терапевтических разработок.
4. Антиинфекционные терапевтические стратегии и приложения, нацеленные на PFT
PFT большинства патогенных бактерий Способность вторгаться в хозяина делает его привлекательной мишенью для разработки сильнодействующих лекарств, которые могут противостоять приобретенной резистентности, наблюдаемой при традиционной противомикробной терапии.
Растущее освещение структуры и функции PFT помогает разрабатывать противомикробные препараты, воздействуя на эти белки или их взаимодействие с мембранными рецепторами. Основываясь на конформационных перестройках в PFT во время порообразования, он предлагает способы скрининга небольших соединений; например, Oroxylin A может ингибировать гемолитическую активность Hla, препятствуя сборке трансмембранных пор [123].Растворимое соединение н-тетрадецилфосфохолина (C14PC) может защищать иммунные клетки человека от лизиса PVL и α-токсином [25]. Теоретически эти соединения можно использовать для лечения инфекций S. aureus с множественной лекарственной устойчивостью. Кроме того, ДНК-аптамеры в качестве новой стратегии также могут быть нацелены на α-токсин S. aureus [124]. Кверцетин как многообещающий терапевтический кандидат снижает цитотоксичность, воздействуя на SLY и последующее воспаление для инфекции Streptococcus suis [125]. При специфическом связывании PFT с рецепторами синтетические молекулы GPI и аналоги GPI могут ингибировать сборку пор [126].Кроме того, по аналогичному механизму терапевтические антитела могут играть потенциальную роль в препятствовании образованию пор. Сообщалось о том, что нейтрализация α-токсина моноклональными антителами против α-токсина оказывала терапевтический эффект на повреждение, инфицированное S. aureus, как на мышах, не страдающих диабетом, так и на мышах с диабетом [127]. Нацеливание на PFT обеспечивает новый терапевтический подход к бактериальным инфекциям. Точно так же рецептор также может быть мишенью. Например, антагонист CCR5, маравирок, блокирует LukED-зависимую гибель клеток и придает устойчивость к S.aureus на модели мышей с дефицитом CCR5 [128]. Антагонист рецептора P2XR также предотвращал индуцированный Hla лизис, препятствуя его взаимодействию с мембранами [129]. Однако такой подход, нацеленный на рецепторы в качестве терапевтической стратегии, непрактичен, поскольку может нанести вред иммунной системе. Разработка рекомбинантных токсоидных вакцин путем нацеливания на PFT — еще одна стратегия снижения токсичности PFT и запуска иммунных ответов. Основываясь на токсине и структуре пор, можно разработать аттенуированную вакцину путем мутации, например варианты NetB [130] и ε-токсина [131].Рекомбинантный лейкоцидиновый домен гемолизина A Vibrio vulnificus оказался эффективным токсоидом для защиты от Vibrio vulnificus на мышиной модели [132]. Кроме того, S. pneumoniae Ply подсемейства CDC была нацелена на разработку многообещающих кандидатов в пневмолизоиды, включая мутант Δ6PLY [133] и PsaA [134] и CbpA [135]. Два недавних мутанта PLY, PLY _{, D168A,} и PLY _{, Δ146 / 147}, препятствуя повторной укладке мономера и вставке в мембрану, не имели гемолитической активности, последний также не может связываться с мембраной.Эти аминокислотные участки играют важную роль в ионном взаимодействии между β-цепями для стабилизации порового комплекса [57]. Нанотоксоидные вакцины, сочетающие нетоксичные PFT с презентацией антигена, могут иметь потенциальную ценность в борьбе с устойчивыми к антибиотикам инфекциями. Например, нанотоксоид поры S. auerus Hla запускает эффективный иммунный ответ in vivo [136]. Биомиметические наночастицы подавляют цитотоксические эффекты β-гемолизина / цитолизина GBS [137]. Токсин Cry34Abl / Cry35Abl Cry из Bacillus thuringiensis был введен в гибриды кукурузы для обеспечения защиты от питания корневых червей западных клубнелуковиц через механизм образования пор [138].Наконец, влияние порообразования на гибель клеток может быть использовано в качестве интересной генной терапии суицида в опухолевых клетках путем трансфекции PFT в линии раковых клеток. Например, моксетумомабпасудотокс-tdfk (LUMOXITI ^®, AstraZeneca Pharmaceuticals LP), химерный аниммунотоксин, состоящий из порообразующего домена экзотоксина А Pseudomonas и антитела, отвечающего за нацеливание на клетки, был одобрен для применения при В-клеточном раке. FDA в 2018 г. [139].
5. Выводы
PFT — широко распространенный фактор вирулентности патогенных бактерий.Окончательные результаты порообразования модулируют или убивают клетки-хозяева, что приводит к распространению и росту бактерий. Обширные исследования предоставляют общую модель действий различных PFT. Неактивные растворимые PFT претерпевают изменение конформации с образованием зрелых и сложных трансмембранных пор на мембране клетки-мишени, хотя каждое из семейств PFT имеет свой собственный механизм структурной укладки и порообразования. Различные члены в пределах определенного подсемейства PFT (α-PFT и β-PFT) имеют различные структурные особенности.Следовательно, PFT из разных подсемейств иногда опосредуют аналогичные функциональные последствия. Кроме того, идентификация рецептора PFT в мембранных липидах, сахарах и белках выявляет специфическое взаимодействие между хозяином и патогенами. Таким образом, выяснение этих структурных механизмов формирования пор мембран позволяет разработать терапевтические средства, включая антитела, лекарственные препараты, пептиды или нанотоксоиды, и последующее инфицирование, особенно для штаммов с множественной лекарственной устойчивостью.
Структурная характеристика мономерных PFT и их идентифицированных мембранных пор в некоторой степени расширила понимание PFT.Однако необходимы дополнительные исследования для дальнейшего изучения комплексов мембранных пор и кинетических процессов порообразования, чтобы в дальнейшем выявить влияние PFT на взаимодействие хозяин-патоген.
Куницы и рыбаки (Martes) в среде, измененной человеком
Куницы и рыбаки (Martes) в среде, измененной человеком: международная перспектива исследует условия, в которых люди и куницы совместимы и несовместимы, и продвигает методы землепользования, которые позволяют Martes быть репрезентативно распределенным и жизнеспособным.
Документально подтверждено, что все марты используют лесные среды обитания, и считается, что 6 видов (за исключением каменной куницы) требуют сложных средне- и поздних сукцессионных лесов на большей части их географических ареалов. Всем видам этого рода требуется сложная горизонтальная и вертикальная структура, обеспечивающая защиту от хищников, среду обитания для их добычи, доступ к пищевым ресурсам и защиту от элементов. Куницы и рыбак имеют высокий уровень метаболизма, большие требования к пространству, высокое отношение площади поверхности к объему для животных, которые часто обитают в высоких широтах, и часто нуждаются в одной из самых больших площадей домашнего ареала на единицу массы тела среди всех групп млекопитающих.В результате этих уникальных характеристик жизненного цикла этот род особенно чувствителен к антропогенному влиянию на их среду обитания, включая потерю среды обитания, упрощение структуры леса в масштабе насаждений за счет некоторых форм вырубки и эффекты фрагментации среды обитания в масштабе ландшафта. Учитывая их тесную связь со структурной сложностью лесов, куницы и рыбаки часто рассматриваются как полезные барометры здоровья леса и используются в качестве экологических индикаторов, флагманских и зонтичных видов в различных частях мира.Таким образом, усилия по успешному сохранению куниц и рыбаков и управлению ими связаны с экологической судьбой других видов, зависящих от леса, и могут сильно повлиять на целостность экосистемы в лесах, которые все чаще используются дикой природой и людьми.
Мы добились больших успехов в нашем фундаментальном понимании того, как животные с этими уникальными особенностями жизненного цикла воспринимают и используют среду обитания, реагируют на изменение среды обитания, а также как их популяции функционируют и действуют при различных формах человеческого управления и бесхозяйственности.Эти знания расширяют наше базовое понимание всех видов мартов и помогут нам достичь цели сохранения жизнеспособных популяций и репрезентативных распределений мартов мира, их мест обитания и связанных с ними экологических сообществ в нашем новом тысячелетии.
Green Bay Press-Gazette из Грин-Бей, Висконсин, 22 апреля 1983 г. · Стр. 25
I P II II pi Green Bay Press-Gaierte Пятница, 22 апреля 1983 г. C-5 I извещения о смертипохороны Миссис Марселла Стивенс Мм. Марселла Стивенс, 67, 328 С.Гурон-стрит, Де Пере, умерла в четверг днем в больнице Грин-Бей. Бывшая Марселла Самсон родилась в Миннесоте 18 октября 1915 года. Она вышла замуж за Бертона Стивенса в Иллинойсе, и он умер до нее 26 сентября 1966 года. Г-жа Стивенс работала оператором коммутатора в компаниях Ni-colet и Milprint Paper в течение 12 лет и вышла на пенсию в 1977 году. Среди оставшихся в живых одна дочь, Патрисия Кей Петерс, Де Пере; трое сыновей, Джей Стивенс, Голландия, штат Мичиган; Барри Стивенс, Гранд-Рапидс, Мичиган Грегори Стивенс, Суамико; 12 внуков.Ей предшествовали смерти трое братьев. «Друзья могут позвонить в Ryan Funeral Hone, 305 N. 10th Street, De Pere, сегодня после 16:00». Бодрствование 8 сегодня вечером. Похороны в 9 утра в субботу в церкви Рождества под руководством преподобного Дэвида Льюиса. Похороны на кладбище Аллуэс, г-жа Лерой (Эльда) Тебо Миссис Лерой (Эльда) Тебо, 69, ранее 832 Дивизионная ул., умерла в четверг днем в местной больнице. Она родилась 16 июня 1913 года в округе Шавано в семье покойных Джозефа и Лорены Плешек. Выжившие — сын и невестка, Рональд и Долли Плешек, Грешэм; одна дочь и зять. -закон, Беверли и Оззи Фондер, Грин-Бэй; одна падчерица и зять, Барбара и Клод Боумены, Грешэм; 12 внуков; восемь правнуков; две сестры, миссис Дж.Рэй (Ла Верн) Акей, Вейевега; Миссис Алоизиус (Долорес) Фрешетт, Неопит; два брата и невестки, Эрвин и Эвелин Плешек, Фримонт; Джозеф и Глэдис Плешек, Weyewega. Ей предшествовал ее муж, Лерой, в апреле 1981 года. Друзья могут зайти в похоронное бюро Бла-Ней, 1521, проспект Шавано, после 16:00. Cегодня. Похороны 11 часов утра в субботу в похоронном бюро, исполняет обязанности преподобного декана Донбровски. Похороны на кладбище Форт Ховард. Эдвард Дж. Земан Эдвард Дж. Земан, 76, 1301 Вторая улица, Кевауни, умер в четверг в больнице Грин-Бей.Сын покойного Джозефа и Эммы Петрик Земан родился 14 ноября 1906 года в городке Пирс. Г-н Земан управлял фермой в городе Пирс до 1963 года, а затем работал в Kewaunee Engineering Corporation до выхода на пенсию около 11 лет назад. Он был членом Совета рыцарей Колумба 2984, Центра престарелых Кевауни и Мемориальной больничной ассоциации района Кевауни Святой Марии. Он женился на Фрэнсис Лоран 10 августа 1927 года. Она умерла до него 24 июля 1982 года. Уцелевшие — двое сыновей, Джеральд, Алгома; Ллойд, Коди, Вайо.; одна невестка, Сью Земан, Алгома; две дочери, миссис Марвин (Гертруда) Кюль, миссис Дональд (Мэри) Вердеган, обе из Кевауни; 17 внуков; одна сестра, миссис Марвин (Этель) Бессердич, Грин Бэй. Друзья могут позвонить в похоронное бюро Бьюкенена, Кевауни, после 16:00. Воскресенье. Розарий 19:30 Воскресенье рыцарей Колумба. Приходская поминальная служба 20:00 Воскресенье. Похороны 11 часов утра понедельника в церкви Святого Розария под председательством преподобного Рональда Гийета. Захоронение на церковном кладбище. Эстер М.Кружение с Эстер М.Китинг, 86, Рт. Я, Бриллион, скончалась сегодня утром в доме своей дочери после продолжительной болезни. Она родилась 24 июля 1896 года в городке Де Пюре в семье покойных Альберта и Алисы (Уиллард) Ван Ден Хеувел. Она занималась фермерством со своим мужем и хранителем в коттедже Tank, Грин-Бей. Миссис Китинг работала в компании Larsen Canning Company, а также ухаживала за старшим. Миссис Китинг была членом католической церкви Св. Патрика, Аскиатона и христианских матерей. Среди выживших — две дочери и зять, Рома и Лестер Немитц, Manitowoc; Бонни Шампо Грей, Грин Бэй; один сын и невестка, Раймонд и Элейн Китинг, Rt.1, миллиард; 10 внуков; шесть правнуков; одна сестра, миссис Карл (Марлен) Тремл, Грин Бэй. Ей предшествовал ее смерть в 1946 году; также один сын, четыре сестры и два брата. Друзья могут позвонить в похоронное бюро Wiet-ing, Brillion, после 16:00. Воскресенье до служб в понедельник. Молитвенное бдение в 19:30. Воскресенье. Семейные обряды 10 утра понедельника в похоронном бюро. Похороны 10:30 понедельника в католической церкви Святого Патрика, Аскитон, с преподобными. Судейство Дэвида Кёне, Роя Крейна и Дана Фелтона.Захоронение на церковном кладбище. Бен Бом Бен Бом, 63, Рт. 1, Краков, умер неожиданно утром в четверг. Он родился 28 января 1920 года в Грин-Вэлли и всю жизнь прожил в этом районе. Он женился на бывшей Аделине Рыбицки 28 марта 1941 года в Кракове. Г-н Бом проработал 22 года в компании Northern Shoe Co., Пуласки. Среди выживших — его жена; два сына и невестки, Роберт и Вирджиния, Краков; Юджин и Дайан, Грин Бэй; шесть внуков; два брата, Джон, Ту-Риверс; Альфред, Грин-Бей; четыре сестры, миссисРоланд (Элла) Бреннер, Две реки; Г-жа Паулюс (Марселла) Винтер, Пуласки; Миссис Рассел (Виола) Уильямс, Зеленая долина; Г-жа Рэндалл (Альвина) Макдермид, Краков. Ему предшествовала смерть одна дочь, миссис Джон (Карен) Мрочковски, и один брат. Друзья могут позвонить в похоронное бюро Мар-ноча, Пуласки, сегодня с 3 до 9. Услуга пробуждения 8 сегодня вечером. Похороны 10:30 в субботу в церкви Святого Казимира в Кракове под председательством преподобного Джеймса Эссера. Захоронение на церковном кладбище. Продолжение на C-14 КРОССВОРД ЗАДАЧА 12.13. 14. 15. 17. 19. 20. 23. 26. ACROSS Gorge Pick Сброс перьев. Мытье Коррелятор ни с одним эскимосским древнеобразованным декоративным сердцем для новичков. Латинское объединение: abbr, Wither 28. Away: префикс 29. fbro, например, 30. Яйца 32. Управляемый 33. Музыкальная форма 36. Омега 38. Хаотичный 43. Топливо 45. Непокрытый 46. Материал художника 47. Коммунистический торговый центр 48. Садовый цветок 49. Примат 50. Часовой пояс Бостона 51. Работа по дому V 1. 1C, HA; 0 SII op aTI Ih’eb jTe’wLJ w lIPUaTl a stJat S’cTh NAP’P S OOjN B f ‘iPjtjp Qhie oe RA TlnaTjnR HAZO NTlA QAl’ 1 IPI GM AR jA GALA ErT DS YESTERN 5 Robed 1 Robed 2 DAY’S.Rant 3. Plaisir 4. Красное вино i U 13 h I Is bp I id i ‘o fi a 13 l6 1 15 124 U5 j6 LI j 15 jjd iT 3Z 33 Ui I lib 37 I 1 38 39 MO 5J7 «» Ml » 43 44 45 Номинальное время 23 минуты AP Newsfeatures 4 22 44. РЕШЕНИЕ Провинция Торонто Морской левый Характерный последователь кварцевых принтов Связка Любитель сумака Раскрыть Тури Бандер Брат Падре Выразить сочувствие Самая высокая гора Соединительный коктейльный аккомпанемент Вид оранжевой записи в бухгалтерской книге Бремя визита Богиня раздора Письменный стол Синий трава Van Winkle GREEN BAY ПРЕСС-ГАЗЕТА КЛАССИФИЦИРОВАННАЯ РЕКЛАМА 435 E.ОРЕХ П.О. BOX 430 GREEN BAY, WISCONSIN 54305 Чтобы разместить объявление о запросе в Press-Gazette, получите сверхбыстрое обслуживание, позвонив прямо в специальный рекламный щиток 435-8361 (юридические уведомления) ЮРИДИЧЕСКОЕ УВЕДОМЛЕНИЕ Город Хобарт, производство спиртных напитков Ферментированный солод и применение опьяняющих спиртных напитков были сделаны в следующем: Эрма Донфорт для бара White Eagle на Уэст-Мейсон-стрит, Онейда, Висконсин. Кэрол Дж. Демулен для гостиницы «Газовый свет», Эдгар Доктор, Онейда, Висконсин. s Мэри Р. Смит, клерк в Хобарте 21, 22, 23 апреля 1983 г., ШТАТ ВИСКОНСИН, БРАУН, I ЦИКЛ ПРОБАЙСКОГО ФИЛИАЛА Дополнительное постановление об ограничении времени для подачи исков (об отказе от прав) и определения наследства ПО ВОПРОСАМ наследства Эдварда Р.КАРЧ, умерший. Была подана петиция об управлении имуществом и определении наследства Эдварда Р. Карча, округ Ли, Флорида, почтовое отделение, 1938 Юго-восточная 37-я Терраса, Кейп-Корал, Флорида; ПРИКАЗЫВАЕТСЯ, ЧТО: 1. Требования кредиторов должны быть поданы не позднее 20 июля 1983 г. или быть отклонены; 2. Наследственность будет определена, а иски будут рассмотрены и рассмотрены 22 июля 1983 года в здании суда округа Браун в Грин-Бей, штат Висконсин, при открытии суда или позже.Датировано 20 апреля 1983 года. Окружным судьей Уильямом Дж. Даффом ЭВЕРСОН, УИТНИ, ЭВЕРСОН, BREHM & amp; PFANKUCH.S.C, поверенные P.O. Box 1507 Green Bay, W I 54305 22 апреля 29; 6 мая 1983 г. ЮРИДИЧЕСКОЕ УВЕДОМЛЕНИЕ Ревизионная комиссия города Хобарт будет проходить в понедельник, 9 мая 1983 г., с 10:00 до полудня и с 13:00 до 16:00. в ратуше. s Мэри Р. Смит, городской служащий, г. Хобарт, 21, 22, 23 апреля 1983 г. ШТАТ ВИСКОНСИН СУД БРАУН УВЕДОМЛЕНИЕ О ПРОДАЖЕ ПРОДАЖИ № ДЕЛА.82 CV 3645 KNUTSON MORTGAGE & amp; ФИНАНСОВАЯ КОРПОРАЦИЯ, Истец vs.- DARYLJ. ЛВЕРСОН и др., ответчики. ПОЖАЛУЙСТА, ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ, что на основании судебного решения о передаче права выкупа и продажи, внесенного в вышеупомянутый иск 15 марта 1983 г., нижеподписавшийся шериф округа Браун, штат Висконсин, будет продавать его на открытом аукционе в офисе шерифа округа Браун. на первом этаже здания безопасности округа Браун по адресу 125 Саут-Адамс-стрит, в городе Грин-Бей, округ Браун, штат Висконсин, 10 июня 1983 года, в 10:00 утра. недвижимость и заложенные помещения, указанные в проданном судебном решении, должны быть проданы и в нем описаны следующим образом: Лот 18 (18) и Восточная половина (E’i) Лота Девять подростков (19), Блок Сорок (40), согласно записанному сюжету дополнения Истмана, в городе Грин-Бей, восточная сторона реки Фокс, округ Браун, штат Висконсин.Адрес собственности: 1163 Eastman, Green Bay, Wis., 54302. Условия продажи: наличными. Датировано 15 апреля 1982 года. Леон Р. Плещек Браун Шериф округа Грей & amp; Конец 312 Э. Висконсин авеню Милуоки, Висконсин, 53202 22 апреля 29; 6, 13, 20, 27 мая 1983 г. ПРИГЛАШЕНИЕ НА СТАВКУ Запечатанные предложения будут получены Управлением канализации Green Boy Metropolitan (ВЛАДЕЛЕЦ) в офисе менеджера группы, 2231 North Quincy Street, mail ing oddress P.O. Box 1015, Green Bay, Wisconsin, 54305, до 10:00 утра по местному времени, 9 мая 1983 г., для предприятий по сгущению осадка, контракт №1 Приобретение центрифуги. В указанное Место и время и сразу после этого все должным образом полученные Конкурсные предложения будут публично открыты и зачитаны вслух. Контракт на поставку предусматривает закупку и поставку двух центрифуг с твердым корпусом для станции очистки сточных вод по адресу: 2231 N. Quincy Street, Green Bay, Wisconsin. Предлагаемая работа требует проведения пост-сталлотационных испытаний оборудования после установки и другими. Все предложения должны соответствовать контрактным документам, хранящимся в офисе менеджера группы GBMSD по адресу 2231 N.Куинси-стрит, Грин-Бей, Висконсин, и в офисе Black & amp; Veatch, Engineers-Architects, 1500 Meadow Lake Parkway, почтовый адрес P.Cy Box 8405, Kansas City, Missouri Ml 14. Копии контрактных документов для использования при подготовке тендерных предложений можно получить у инженеров-архитекторов по адресу, указанному выше на o оплата S10.00 за первый комплект и S5.00 за каждый дополнительный комплект. Никакого возврата не будет. Контракт будет присужден на основе оцененной цены предложения. Оценочная цена предложения определяется с помощью формулы оценки, в которой используются следующие три значения, представленные участником торгов в форме предложения; (1) единовременная ставка, 2) гарантированная пропускная способность и (3) гарантированное непревышение потребляемой мощности.Обеспечение заявки в размере 5 процентов от общей суммы заявки должно сопровождать каждую заявку. Ни одна из заявок не может быть отозвана в течение 90 дней после даты, установленной для открытия заявок. Район канализации Грин-Бей оставляет за собой право отклонить все заявки, отказаться от неформальных формальностей и отклонить несоответствующие, несоответствующие или условные заявки. Составлено и опубликовано властями муниципального района канализации Грин-Бей, Грин-Бей, Висконсин. Хорольд Дж. Дэй, президент Э. Фрэнсис Брюнетт, секретарь Роберт Э.Киссел, вице-президент Ричард Плукер, вице-президент Джон Дж. Рыба, вице-президент Томас У. Купер, генеральный директор Грин Бэй, M.S. D. Закупка центрифуг 22 апреля, 29 апреля 1983 г. УВЕДОМЛЕНИЕ «Годовой отчет Sllefel Foundation, Inc. за 1982 год, 505 S. Van Buren Street, Green Bay, Wisconsin 54301, будет доступен для ознакомления после 15 мая в обычные рабочие часы. bv любому гражданину, который обратится с такой просьбой в течение 180 дней с даты публикации «. Уильям Дж. Стифель, 22 апреля 1983 г., ГОРОД EATON LIQUOR APPLICATION. Настоящим сообщается, что следующие заявки были получены от служащего города Eaton для получения лицензии на употребление алкогольных напитков в соответствии с разрешением класса «B»: Eddie Whipp Inc. ., RR2, Green Boy, Wis. Bushvllle Lanes Inc., RR3, Люксембург, Wis. Florence Rentmeester, RR2, Дания, Wis. James Potts, RR2, Green Bav, Wis. James Osterloh, RR3, Lux Emburg. Висконсин. Патрисио Йоханек, RR2, Грин Бэй, Висконсин. Разрешение класса «A»: Кеннет Шнайдер, RR2, Грин Бэй, Висконсин. Лицензия на пиво класса «B»: Lilv Lake Sportsman Club, RR2, Грин Бав, Висконсин. Клерк Карл Рекельберг , Таун оф Итон, 22, 23 апреля, 24,1983 ОБРУЧЕНИЕ ПРОБАЙСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ ШТАТА ВИСКОНСИН БРАУН Установление срока для подтверждения воли и наследства по уведомлению кредиторов ПО ВОПРОСАМ наследства умершей Роуз Дэвистер.Подана петиция о завещании и определении наследства Роуз Дэвистер, округ Браун, Висконсин, почтовый адрес 1601 Махон-авеню, Грин-Бэй, Висконсин 54301; ПРИКАЗЫВАЕТСЯ, ЧТО: 1. Ходатайство будет рассмотрено в здании суда округа Браун, Грин Бав, штат Висконсин, 20 мая 1983 года, при открытии суда или после этого; 2. Требования кредиторов должны быть поданы не позднее 19 июля 1983 г. или быть отклонены; 3. Все монастыри будут исследованы и восстановлены 22 июля 1983 г., при открытии Суда или позже.Датировано 19 апреля 1983 года. Судом, 11 Уильям Дж. Даффв, окружной судья SURPLICE ft. GOULD, Attorneys 509Minahan Building Green Bay, Wisconsin 54301 22 апреля 29 апреля; Mav 6,1983 ДОМ И БИЗНЕС SEH DliiHY Используйте это удобное ежедневное руководство по обслуживанию, чтобы найти эксперта, готового удовлетворить ваши потребности в услугах! ПРИМЕЧАНИЕ Следующие пояснения были получены деревенским секретарем деревни Пуласки, штат Висконсин. ., для продажи крепких спиртных напитков: Класс B Антон Бллзняк 105 W. Pulaski St. Валерия Галевскл 137 w.Пуласки, Рэйчел Карч, 109 W. Пуласки, Роберт Крюгер, 133, W. Пуласки, Карен Круз, 143, N.St. Августин-Сент-Люмккифрв 409 С. Сент-Огастин-Сент-Р. Борзих & amp; M. Stedl 154 W. Pulaski St. Joseph Styczvnski HOW. Pulaski St. J. Stvczvnskl i. ш. Саймс 104 С. Висконсин Сен-Бернар Викка 137 С. Сент-Огастин Сент-Агнес Зфеллнскл 149 В. Пуласки Санкт-КлоссA Норин Отто 126 В. Пуласки-Стрит. От 21 апреля 1983 года в Пуласки, штат Висконсин. Клерк 22, 23, 54, 1983: 11 Профессиональные ШЕЛКОВЫЕ ЦВЕТЫ: свадьбы, корсажи, центральные украшения.Reason- «, в состоянии. 10-5, 445-0777 или 336-0234.» ЗА элегантным внешним видом, который вы можете себе позволить В свадебной фотографии звоните Кену Мартину, 136-6729. Агентство ALPHA Home Health Agency. Качественный уход в вашем доме . catunnn. 11B Подоходный налог, бухгалтерские НАЛОГОВЫЕ ФОРМЫ Подготовка: длинные, 14 долларов, короткие, 4,50 долларов 1370 Fox River Dr., 336-9262. НАЛОГОВЫЕ ПОДГОТОВКИ, федеральные и государственные формы. 35 долларов. 31D Здание, Перепланировка. «ABLE CONSTRUCTION CO. Новое. строительство, перепланировка, разноплановые «львы», кровельные и сайдинговые, бетонные »работы.Бесплатные оценки. 465-6762. C8.S BLDRS. -Полный Builder Custom домов, odditlons, повторное моделирование, кровля. 499-7159, ДОПОЛНЕНИЯ, перепланировка. Помещения для отдыха, террасы, сайдинг, кровля, ремонт. 20 лет опыта. Джим Кот) 4U-79SI. ДОПОЛНЕНИЯ, переделка ИНГ отл видов. Hardtke Supply & amp; Реконструкция, 1130 S. Broadway, 435-1111. АЛЮМИНИЕВЫЙ САЙДИНГ, тенты. «Самые изящные желоба. 43 года местного обслуживания. NEVILLE’S, Inc .. U57 Sal St. 441-574.« РЕСТАВРАЦИЯ-Mome Улучшения, дополнения. Конкурентоспособные »цены. Olenlczak Const., 499-8947 ПЛОЩАДЬ: Помещения для отдыха. Выполнять заказы на колоды. Свободные сослуживцы. 465-0782 предложение 5.. НАПОЛЬНОЕ ПОКРЫТИЕ Монтаж «Ковролин, линолеум, керамическая плитка. 1 Профессиональная работа, Джерри 465-0969 КОВРОВКА: Уложено профессионально. По вечерам, выходным.» Разумно. 334-5817 otter 6. FAGER CONST. Новые дома, ремонт, гаражи, бетон. работы, земляные работы. Бесплатные оценки. 845-2923 или 433-4474. ХОЗЯЙСТВЕННЫЕ ПОМЕЩЕНИЯ. Любой размер. Любой стиль. Мини-сараи bvMcCall Телефон 498-1 150 ПЕРЕСТАНОВКА КРЫШИ И НОВАЯ Бесплатная оценка. Низкие цены.Удовлетворение гарантировано! 20 лет опыта. Звоните 334-8001. — W.H. SHULER, BUILDER Бесплатная оценка 433-9349 или 432-2735 11F Сантехника, электричество LEAKY Foucets Flx-lt-ShOP. Первые 2 крана, 11 долларов. Следующие 2 фуцета, 6 долларов, плюс расходные материалы, 499,9016. ЭЛЕКТРИЧЕСКИЕ РАБОТЫ Круглосуточное обслуживание. Очень разумно. Застрахован. Звоните 494-7769. 11G Покраска, отделка A-l КРАСКА МОЙКА СТЕН ‘Верхняя работа. Колл Джек, 435-9458. Пескоструйная обработка Брауна Звоните в 17:00, 869-2020. ФРАНК РЕЙМЕР, 437-2498. Внутренняя и внешняя отделка.Бесплатные оценки-25 лет опыта. ПОКРАСКА, мойка стен. Разумный. Бесплатные оценки. Позвоните Карен или Келли, 434-3194 ЖИВОПИСЬ Учителями. 15 лет опыта. Бесплатные оценки. Мы сделаем лоб правильно … дешевле I 499-1744, 499-3249. ПОКРАСКА, поклейка обоев, морилка и лак. Разумный. 30 лет опыта. 4454007. 11H Каменная кладка, цементные работы СТРОИТЕЛЬСТВО переменного тока Выравнивание стен, гидроизоляция, новые фундаменты, все виды бетонных работ, экскаваторные работы. Лицензированные и связанные. Звоните 494-822! или 434-0743.BILLWEISE Construction Ремонт стен подвала, гидроизоляция. Кирпичные работы. Подъездные пути, тротуары, подвал, этажи гаража. 849-2382. СМЕТА на бетонно-кладочные работы. 10 лет опыта. Звоните 448-8397. 111 Специалисты по уборке ЧИСТКА КОВРОВ. Bv Мальчик на побегушках. Пар или шампунь. 433-9787. TOP HAT CHIMNEY SWEEP Профессионально оборудован. Полностью застрахован. 25 долларов за дымоход. 497-2941 anvtimt. 11 J Ремонтное обслуживание СПЕЦИАЛИСТ ПО НАСТРОЙКЕ Полная настройка, $ 35 для большинства автомобилей дешевле. 499-7579. . Ремонт швейных машин-Электроустановки В автомобилях? Дж.Хуллар, опытный, надежный, рассудительный. 4W-25M, 494 3959. МАЛЕНЬКИЙ ДВИГАТЕЛЬ БОБА. Тюнинг и ремонт. Возможен самовывоз и доставка. 437-3543. ТЕПЕРЬ пора спланировать весенний ландшафтный дизайн. TILLMANN LANDSCAPE 2735 University Ave. 448-1132 POWE R сгребание, подметание, удобрение, обрезка; Установлены новые газоны. Шпалы новые и бывшие в употреблении. Пейзаж Сида, 497-7944. ТВОРЧЕСКИЙ Уход за газоном и уход за газоном; Лонд-скейпинг. Силовое качание, удобрение, опрыскивание, посев, дернование. Мы специализируемся на фонтанах, альпинариях, патио из кирпича и камня.433-9148. ПОЛЬЗОВАТЕЛЬСКИЙ УХОД ЗА ГАЗОНАМИ, мощное сгребание, пылесос и уборка, удобрение, обрезка кустов. 448-5250 или 499-7404 GREEN BAY Уход за двором, кошение, обрезка, механическое сгребание, песок, гравий, топсолл, жилой, коммерческий. 445-4912. АВТОМОБИЛЬНЫЕ ПЕРЕВОЗКИ Небольшие грузы, не более 5 ярдов. Песок, гравий, верхний слой почвы и гранит и др. 494-0510. КРАСИВАЙТЕ СВОЙ ГАЗОН Мощный сгребание, внесение удобрений, стрижка газонов. Разумный. 336-8238. СДЕЛАЙТЕ ЭТО САМ G.E. Системные порты Quick Fix и руководство по обслуживанию для большинства G.E. бытовая техника. Pierquet’s, Восток-Запад.РЕМОНТ МАЛЫХ ДВИГАТЕЛЕЙ Газонокосилки всех марок. Бесплатные оценки. Возможен самовывоз и доставка. Маленький паровозик Green Boy. Coll 499-2582. 11L Пейзаж, Уборка снега ЧЕРНАЯ земля, верхний слой почвы, смешанная насыпь, выравнивание щебня. Молони Пейзаж. 448-1723. ЧЕРНАЯ ЗЕМЛЯ Измельченная, просеянная и песчаная. Peot Consructlon, 434-3000. УХОД ЗА ГАЗОНАМИ Стрижка, внесение удобрений, укладка соломы, укладка газонов. ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ, 435-1323. ТАМОЖЕННАЯ РОТОРОХОТА. Нет iob слишком большой. Очень разумные ставки. Звоните 498-8949 через 5 р.м. MERAMEC GRAVEL-SO фунт. 2,49 доллара или 1 тонна оптом 70 долларов. Возможна доставка. ZOLL STONE CENTER, проспект Плоче 400, 432-4438. T.L.C. Жилой-коммерческий уход за газоном. Coll 432-7907. 11K Прочие услуги ОТДЕЛАННЫЕ ВАННЫ Сделано у вас дома, с полной гарантией. 499-5025. Засоренные канализационные раковины Бесплатные оценки в любое время ПОЗВОНИТЕ TWI RL CO. 435-8844 1 Реставрация мебели 1T БЕСПЛАТНЫЙ самовывоз и доставка ПРЕВОСХОДНАЯ ОБИВКА, 437-5434. ПРОФЕССИОНАЛЬНАЯ Обивка Реосоноби. Ткани со скидкой, специалист Lo Z Boy. 334-7725.Ваше сообщение достигнет более 124 000 потенциальных клиентов в день и 150 000 в воскресенье. Чтобы разместить данные о вашей компании в этом каталоге, позвоните по телефону 435-8361. (УВЕДОМЛЕНИЯ) ЗАКРЫТЫЕ ОТВЕТЫ НА ОБЪЯВЛЕНИЯ Сегодня в 9 часов утра в офисе Press-Gazette были ответы в следующих ящиках: E-59, E-75, E-95, E-99, Fl, F-4, F-8, F-10, F-13, F-16, F-17, F-18, F-20. F-23, F-26, F-30. (Просьба незамедлительно призывать наши письма, так как те, которые не были собраны в течение 30 дней с даты последней вставки, будут уничтожены.) СЛУЖБА СПЕЦИАЛЬНЫХ НОМЕРОВ ЯЩИКОВ Пресс-бюллетень не будет раскрывать имя одного классифицированного рекламодателя, используя номер ящика.Читатели, отвечающие на объявления с номерами ящиков, которые хотят защитить свою личность, могут следовать следующей процедуре: вложите свой ответ на номер ящика в конверт с объявлением, опубликованный в «Секретный Manaoer», Green Bay Press-Gazette, чтобы вместе с примечанием перечислить фирмы, которых вы не знаете хочу увидеть письмо. Ваше письмо будет уничтожено, если вы упомянули рекламодателя. Вы получите полную защиту. ЕЖЕДНЕВНО ЗАРАБАТЫВАЕТ БОЛЬШЕ ЦЕНТРОВ Когда наши читатели перелистывают эти страницы, у них под рукой огромный рынок! Салфетка «Место покупателей и продавцов.Каждый день эта торговая площадка информирует наших читателей о продаваемых товарах и услугах и о том, где их можно найти. Использование нашей рубричной рекламы — это самый быстрый и простой способ, чтобы ваше сообщение достигло более 1 24 000 читателей в день и 150 000 в воскресенье. Читайте наши рекламные объявления, когда у вас есть что продать. НАБЕРИТЕ 435-8361, ЧТОБЫ РАЗМЕСТИТЬ ОБЪЯВЛЕНИЕ Не нужно? Не могу его использовать? Затем продайте его через Green Bay Press Gazette. Объявления о поиске 3 In Memoriam В память о Силе Лорльце, который умер четыре года назад сегодня, 22 апреля 1979 г. Разорван семейный круг.Наша дорогая прошла авав. Ушел из тьмы земли и земной В светлый и прекрасный день. Но мы перестаем оставаться слабыми, о могила той, которую мы любим. Мы постараемся подготовиться к встрече с ней. В лучшем мире наверху. Твое ласковое лицо и терпеливая улыбка С грустью вспоминаем, Ты словечко каждому сказал И умер любимый bv alt. Ты не забытый любимый человек. И ты никогда не будешь, Пока длиться жизнь и память, Мы будем помнить тебя. Мы скучаем по тебе сейчас, и наши сердца болят, Со временем мы скучаем по тебе все больше.К сожалению, скучал по семье и друзьям. Знакомства 5A BRUCE & amp; ЯНГ ПОЗДРАВЛЕНИЯ НАИЛУЧШИЕ ПОЖЕЛАНИЯ ВАШЕЙ НОВОЙ ДОЧЕРИ ПОЗДРАВЛЕНИЯ BETH & amp; ГЭРИ! Mav vou, у вас будет прекрасный подъем вместе. Всегда любите друг друга, к лучшему или к худшему. По пути молитесь вместе. Обращайтесь к Господу в молитве. Пусть никто не разлучит вас, пока не придет Иисус. Мы тебя любим. Мама и папа УЧАСТНИКИ Brown Co. Я нашел Itl BE. СПАСИБО ST. JUDE за полученные услуги. L.M.F. СПАСИБО ST. ИУДА ЗА ПОМОЩЬ А.Б. СПАСИБО святому Иуду за оказанные услуги. LMF ПОЗДРАВЛЕНИЕ С ДНЯ РОЖДЕНИЯ ОСОБЫЕ СОБЫТИЯ Воспользуйтесь колонкой ПЕРСОНАЛ ПРЕСС-ГАЗЕТЫ. 1 2 слова, 1 день, 1,98 доллара США. Чтобы составить приветствие, наберите 435-831 5B Знакомства БУКЕТ ШАРИКА ДЛЯ СЕКРЕТАРЕЙ НЕДЕЛЯ 132 N. Broadway DePere 336-134? НИЗКИЕ АВТОЦЕНЫ Соответствующие критериям одинокие девушки, страховка verdette 4M-S164 БУКЕТ СЕКРЕТАРЯ HELIUM HI’S Green Boy 499-401B У вас нет вечеринок, которую вы никогда не получите! Нанять танцовщицу крота! Qua! Его производительность. 469-9883.5B Знакомства ФАРФОРОВЫЕ КУКЛЫ СТУДИЯ Коробки, фурнитура, готовые куклы на подошву. Classic Touch, 1004 Showono Ave., 497-7600. НЕ ВЕСА: Новая программа постоянного похудания Двналиана. Для бесплатного посещения, 434-9100. ГОСПОДА Частные покупки для вашей особенной леди. Включает нижнее белье, парфюмерию, украшения. Позвоните в Specialties Ltd. 336-6521 с 9 до 4. ВРЕМЯ ТЕПЕРЬ низкая стоимость, доступна краткосрочная медицинская страховка. Отличное освещение вне школы, в перерывах между занятиями и временно уволенными. Кольт Сито, 432-7907.ПЛАНИРОВАНИЕ СЕМЬИ Медицинские и информационные услуги. Звоните в ПЛАНОВЫЕ РОДСТВЕННИКИ 432-0031 голубями или вечерами. 16 Агентства, услуги СФЕРА СОТРУДНИКОВ Вы ищете подходящего сотрудника? Вы бы хотели, чтобы ваши вакансии были заполнены квалифицированными и мотивированными работниками? JOBound, общественная организация по трудоустройству, может помочь вам в достижении этой цели. Наши профессиональные сотрудники могут сэкономить ваши деньги и деньги, поскольку мы удовлетворяем ваши конкретные потребности в трудоустройстве. Для нашей компании доступны льготы по экономии налогов, а также возмещение затрат на обучение.Для получения дополнительной информации об этих услугах дерева, пожалуйста, позвоните; 497-9346 Все ответы остаются конфиденциальными. JOBoundO.J.T. Comunidad deAmlgos, Inc. 1497 6th St.-Suite 290 Green Bav, Wl 54304 Служба занятости, выплачиваемая НАЛИЧНЫМИ Для использованного оборудования для гольфа. ГОЛЬФ ШЕК 435-9665. ЗАПОЛНИТЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНУЮ ПРОГРАММУ Medicare и помощь в доме престарелых. LAMINE-SEALY INSURANCE, 435-9522. 2 КРИПТА НА ПРОДАЖУ, в Мемориальном саду Николя, пос. Бав. Coll для дополнительной информации, 663-2493. ПОТЧЕР НЕОБХОДИМ для женской лиги Грин-Бей.Звоните после 17:00, 434-3239. БЕРЕМЕННАЯ? Выяснить. Позвоните в ПРАВО РОЖДЕНИЯ по телефону 435-3345. НАГРАДА 200 $! Для получения информации, ведущей к аресту и осуждению лиц, ограбивших пиццерию Philly’s утром 2 апреля и в субботу 16 апреля, пишите по адресу: 2237 University Ave .. Green Bov, Wl 54302. SNIP, SNIP. . . Зажим, Зажим Отлично смотрятся так быстро! ВЫБОР МУЖСКОЙ КОМНАТЫ 192BS. Ridge Rd. 497-1122 «ИСТИНА никогда не отрицается и человек, если в душе он просит об этом:» — Дарвин Гросс. Для получения информации об ЭККАНКАРЕ напишите: П.О. Box 3939, Green Bav, Wl 54303 или позвоните по телефону 434-3902. 6 Особые примечания ЗДРАВООХРАНЕНИЕ В ВАШЕМ ДОМЕ Сопровождающие помощники медсестер Upjohn Healthcare Services 498-0606 Звоните круглосуточно, 7 дней в неделю КАК ИДЕТ ИДЕАЛЬНУЮ СУББОТУ; Найдите магазин подержанных книг с более чем 10 000 книг в твердом переплете. Просматривайте, проводите время в читальном зале. Откройте для себя нового автора или заново откройте для себя старого фаворита. СТРАНИЦЫ Booktraders, 801 S. Irwin Мы делаем идеальные субботы 437-9564 RECOVERY, inc. Встреча организации самопомощи для нервных людей в 7:30 понедельник, 509 S.Вебстер. Открыт для взрослых 18 лет и старше, у которых были или есть эмоциональные проблемы. 336-8187, 334-6432. АНОНИМНЫЕ АЛКОГОЛИКИ 24 часа в сутки 433-6639. ПЕРЕСЕДАЮЩИЕ АНОНИМНЫЕ. Никаких сборов и сборов! 497-9177. 10 Бюро находок ПОТЕРЯННЫЙ: браслет, синее золото, можно быть в магазине в Бостоне, отдел сумок. Вознаграждение. Эмоциональная ценность. Coll 494-8374. ОТСУТСТВУЮЩИЙ КАРТ, юго-западная область, предлагается награда. Никаких вопросов не было задано. Coll 497-7538. ПОТЕРЯННОЕ: золотое колье с подвеской, ср. ночь, район Shooko East или Oakdole Ave. Эмоциональная ценность.После 17:00, 465-9945. (ТРУДОУСТРОЙСТВО) 16 Агентств, Услуги EOP, Бухгалтерский учет, Техническая поддержка HARRY CASE ASSOCIATES 828 Cherry Street 432-5188 ИТОГ говорит сам за себя. Я могу показать вам, как увеличить страховое покрытие вашей жизни и увеличить стоимость страховки. Получите максимум за свои доллары. Колл Стив, 432-7907. TOMFOOLERY 432-5255 Singing Telegram Service Это новинка II! Телефон -O-Grams, 5 долларов. H.S. РАЗМЕЩЕНИЕ СЛУЖБЫ Обслуживание нефтяной промышленности по всей стране 1345 W. Mason 494-9586 KELLY SERVICES 1600 Shawano Ave. 497-300 Равноправный работодатель T6MPLOYMENT Временная работа Asslanmenti 1345 W.Mown 494-0450 16A Офисно-канцелярской ИПОТЕЧНОЙ БАНКОВСКОЙ ФИРМЕ нужен кто-то с опытом управления офисом. Идеальный кандидат должен обладать хорошими организаторскими способностями, быть внимательным к деталям и уметь хорошо работать с общественностью. Полезный опыт в сфере недвижимости или банковского дела. Резюме отправлять по адресу: Box F-26, Press-Gazette. GAL FRIDAY Неполный рабочий день Человек, необходимый для выполнения разнообразных офисных обязанностей. Должно быть отличная машинистка. Навыки обработки дото полезны. Может привести к полной занятости. Заработная плата соизмерима с опытом, резюме и квалификацию высылайте: менеджеру по персоналу, П.O. Box 357, DePere, Wl 54115. ОФИС-МЕНЕДЖЕР У дилера Ford есть место для рабочего офиса-менеджера. Бухгалтерский учет дилерских центров является обязательным требованием. Отличный район для проживания. Заработная плата, машина и полные льготы. Позвоните или напишите: Karla Clipper или Keith Totten, Totten-Everl Ford, 925 W. Washington, Marquette, Ml 49855. 906226-6568. СЕКРЕТАРЬ ПЯТНИЦА Должны быть отличные организаторские навыки. Тяжелый набор текста, предпочтительно сокращение, должен хорошо разбираться в цифрах и знать цифровые клавиши на tvpewiter. Отправить письмо и резюме: Генеральному директору П.О. Box 26, Green Bav, Wl 54305. Неполный секретарь для работы на полный рабочий день. Должен иметь опыт ведения бухгалтерского учета, выставления счетов, налогов и начисления заработной платы, а также желание взять на себя новые обязанности. Должен отражать профессиональный имидж и отношение. Отправляйте резюме по адресу: Sanderson Photography, 2936 Gross St., Green Bav, Wl 54304. Никаких телефонных звонков. Магазины-рестораны 16B BARTENDER Experienced, Coll 469-0610 для Interlvew. ПОЛНЫЙ ВРЕМЯ Бармен хотел вечера. Одинокая, амбициозная, честная и приятная личность. Заработная плата плюс комната. Требуются уединения.Применяются только честные, амбициозные потребности. Находится в Oconto Foils. Звоните с 12 до 17. для интервью, 846-2042. Требуются МЕНЕДЖЕР И ПОВАР для ресторана семейного типа. Требуются рекомендации. Пишите в Box F-il, Press-Gazette, 16B Магазины-рестораны НЕОБХОДИМО ПОВАР, предпочтение отдается опыту. Часы гибкие. Желательно старше 18 лет. Подать заявку лично, Country Kitchen, 2330 S. Oneida. ПОМОЩНИК НА КУХНЕ: 10-15 часов в неделю. Должен быть компетентен в подготовительных работах, приготовлении пищи на гриле и общих кухонных обязанностях. Необходим прошлый опыт. Звоните по телефону 432-0591 с 9 до 10.м. ТОЛЬКО или письменные ответы на адрес: Kitchen Manager, 417 Pine St., Green Bay, Wl 5430). ДНЕВНАЯ ОФИЦИАНТКА Pla-mor Lounge, 494-7262 ОФИЦИАНТКА Подайте заявку лично после 19:00. будни, пожалуйста, никаких телефонных звонков. The Pancake Place West, 143 S. Military Ave. ПРОФЕССИОНАЛЬНЫЕ Официантки: Полный рабочий день, смена Давида. Подать заявку лично, Bill’s Pancake Place, 1408 Main St. Никаких телефонных звонков! 16C Квалифицированный — Полуквалифицированный ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ, ЛИЧНЫЙ, зрелый человек на должность помощника хиропрактика. Приемная и служебные обязанности. Высокая ответственность.Тренируюсь по терапии. Опыт работы в сфере, связанной с бизнесом и здоровьем. Отправить резюме в Box F-UJ, Press-Ga2ette. ESTIMATOR «v ‘Для работы на складе пиломатериалов розничной торговли. Должен уметь оценивать жилые и коммерческие здания. Кроме того, необходимо знать энергетические нормы штата Висконсин и уметь заполнять энергетические таблицы. Присылайте резюме по адресу: Box FU, Press-Gazette. ДИЗЕЛЬНЫЙ МЕХАНИК.?. Фокс-Вэлли ищет опытного механика по дизельным грузовикам, который будет отвечать за обслуживание во вторую смену.Qualiflcatlbns должен включать как минимум 5-летний опыт работы в области ремонта и обслуживания дизельных тракторов, а также способность руководить людьми и управлять ими, а также принимать решения независимо. Хорошие коммуникативные навыки — необходимость. Заинтересованные кандидаты должны представить краткое письмо о квалификации, включая номер телефона, по адресу: j Box F-22, Press-Gazette — ВЫ ПРОИЗВОДИЛИ ИСКУССТВО ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА НЕ МЕНЕЕ 3 ГОДА? Вы все еще дружелюбны, когда находитесь под давлением? чистые и точные изображения? Если вы ЧЕСТНО ответите «да» на все 3 вопроса, пришлите свое резюме.Если нет, сохраните свой штамп. Если вы тот особенный человек, которого мы ищем, я буду очень рад, что вы ответили на это объявление — M.A., P.O. Box 779, Neenah, Wl 54956. — ИЩУСЬ ЛИЦО с производственным опытом для обучения в качестве помощника начальника производства для местной компании по поставке белья. Должен быть агрессивным, готовым к обучению и, в конечном итоге, отвечать за работу предприятия. Отправить полное резюме в Box F-4, Press-Gazette. НАСТРОЙКА ТИПА Доступна временная позиция для работы в редакторе Vorityper Comp. Кандидат должен иметь опыт настройки фототипа и готов работать по мере необходимости.Пожалуйста, отправьте резюме в Stuebe Co., PO. Box 3248, Грин Бэй, Wl 54303.:. ИНДУСТРИАЛЬНЫЙ ИНЖЕНЕР Немедленное открытие для квалифицированного промышленного инженера. Должность требует самостоятельного начала, ответственного за повышение производительности: перепроектирование производственных систем, улучшение производственных мощностей в лесу, комплекс продукции. I.E. степень »и желательно иметь опыт работы от 3 до 5 лет. Превосходная заработная плата и льготы. Отправить резюме: Джин Шрибер, менеджер по персоналу ВЕЙЕРХАЙЗЕР C0 .: P.O. Box 130 Marshfield, Wl 54449 Работодатель с равными возможностями MF
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
No related posts.

ГДЗ Окружающий мир 2 класс. Плешаков. Рабочая тетрадь часть 1, 2

Похожие ГДЗ

Окружающий мир 2 класс | Перспектива (Плешаков А.А.)

В школе стр. 48 — 51. Окружающий мир 2 класс 2 часть учебник Плешаков А.А.

1) Какие правила поведения в школе, на уроке ты выполняешь?

2) Расскажи о своём школьном коллективе. Какие праздники, конкурсы, викторины проводятся в вашем классе?

3) Чем занимаются ребята вашего класса во время перемены?

4) Как принято обращаться к учителю и другим работникам школы? Нужна ли в школе культура общения?

Правила поведения в школе

2) Прочитайте стихотворение «Перемена». Расскажите, как проходят перемены в вашем классе.

3) Сформулируйте правила поведения в школе. Послушайте и оцените то, что предложили другие ребята. Составьте памятку в рабочей тетради.

Правила вежливого поведения в школе для 2 класса

Домашнее задание

1) Что объединяет всех ребят в школьном коллективе?

2) Как проявляется в школе культура общения?

3) Какие правила нужно соблюдать на уроке и на перемене?

Окружающий мир. Тесты 2 класс. Плешаков

Honda Engines GC190 на продажу в Каукауна, Висконсин. Pleshek’s Outdoor Power Kaukauna, WI (920) 759-6246

Новости (полная версия)

Вычислительный и экспериментальный анализ заякоренного гликофосфатидилинозитола протеома паразитической нематоды человека Brugia malayi

Toxins | Free Full-Text | Структурная основа взаимодействия порообразующего токсина / мембраны

1. Введение

2. Структурная классификация и характеристика порообразующих токсинов

2.1. Семейство α-PFT

2.1.1. Подсемейство колицинов

2.1.2. Подсемейство Cytolysin a

2.1.3. Подсемейство актинопоринов

2.1.4. Другие семейства α-PFT

2.2. Семейство β-PFT

2.2.1. ПФТ S. aureus подсемейства

2.2.2. Подсемейство аэролизинов

2.2.3. Подсемейство холестерин-зависимых цитолизинов

3. Диверсификация взаимодействия PFT с компонентами мембраны

4. Антиинфекционные терапевтические стратегии и приложения, нацеленные на PFT

5. Выводы

Куницы и рыбаки (Martes) в среде, измененной человеком

Green Bay Press-Gazette из Грин-Бей, Висконсин, 22 апреля 1983 г. · Стр. 25

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Добавить комментарий Отменить ответ

Рубрики