Упражнение 111: Упражнение 111 — ГДЗ Русский язык 3 класс Канакина учебник часть 2

Упражнение 111 — ГДЗ Русский язык 3 класс Канакина учебник часть 2

  1. Главная
  2. ГДЗ
  3. 3 класс
  4. Русский язык
  5. Канакина учебник
  6. Упражнение 111. Часть 2

Вернуться к содержанию учебника

Вопрос

Прочитайте.

Оранжевый …, большое …, синее …, тяжёлая …, тёплый …, узкая …, душистая …, приветливая2…, сладкая …, громкий …, красивые …, отзывчивый …, прохладная … .

  • Докажите, что данные слова — имена прилагательные.
  • Подберите к каждому имени прилагательному подходящее по смыслу имя существительное. Запишите полученные словосочетания. Выделите окончания в именах прилагательных.
  • Какие из данных имён прилагательных обозначают признак предмета по запаху, величине, цвету, весу, звуку, температуре, размеру? Какие из них дают оценку предмету?

Ответ

Вариант ответа #1:

     Слова из упражнения являются прилагательными, поскольку отвечают на вопросы какой? какое? какая? и т. п. и обозначают признак предмета.

     Оранжевый цвет, большое озеро, синее небо, тяжёлая коробка, тёплый ветер, узкая колея, душистая дыня, приветливая улыбка, сладкая конфета, громкий звук, красивые розы, отзывчивый человек, прохладная вода.

     Приветливая.

     Оценку предмету дают прилагательные: приветливая, отзывчивый.

     Признак предмета называют прилагательные: оранжевый, большое, синее, тяжёлая, тёплый, узкая, душистая, сладкая, громкий, прохладная.

Вариант ответа #2:

Оранжевый апельсин, большое село, синее море, тяжёлая сумка, тёплый ветер, узкая улица, душистая

смородина, приветливая соседка, сладкая ягодка, громкий стук, красивые цветы, отзывчивый друг, прохладная погода.

   Приветливая.

В задании даны прилагательные, потому что они отвечают на вопросы какой? какая? какое? какие? и обозначают признак предмета по:

  • запаху — душистая
  • величине — большое
  • цвету — оранжевый, синее
  • весу — тяжёлая
  • звуку — громкий
  • температуре — тёплый, прохладная
  • размеру — узкая 
  • вкусу — сладкая
  • оценивают предмет — приветливая, красивые, отзывчивый

Вернуться к содержанию учебника


ГДЗ По Русскому Упражнение 111 – Telegraph



➡➡➡ ПОДРОБНЕЕ ЖМИТЕ ЗДЕСЬ!

ГДЗ По Русскому Упражнение 111


ГДЗ (готовое домашние задание из решебника) на Номер №111 по учебнику Русский язык . 7 класс : учебник для общеобразовательных учреждений .  Ответ на Номер №111 из ГДЗ по Русскому языку 7 класс: Ладыженская Т .А . 

На этой странице вы найдёте готовые домашние задания , которые помогут справиться с программой 6 класса по русскому языку . В упражнениях выполнены необходимые пункты и разборы . С нами вы повторите некоторые моменты из 5 класса: что такое текст . . 

Упражнение №111 . Упражнение №110 Упражнение №112 . 

Подробный решебник (ГДЗ ) по Русскому языку за 9 (девятый) класс — готовый ответ упражнение — 111 . Авторы учебника: Мурина, Литвинко, Долбик . Издательство: Национальный институт образования -2020 . 

Готовые домашние задания по русскому языку 5 класса под авторством: Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М . и Николаенко Г .И . 2020 .  Решебник по русскому языку за 5 класс Мурина . Авторы . Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М ., Николаенко Г .И .  111 . 

Упражнения . 

111 . Выпишите по группам слова с гласными после шипящих: а) в корне; б) в суффиксе; в) в окончании . Выделите указанные морфемы . Вставьте пропущенные буквы . 

Белорусские ГДЗ и Решебник за 4 класс по Русскому языку часть 1, часть 2 поможет Вам найти верный ответ на самый сложный номер задания онлайн . Автор учебника: Антипова М .Б ., Верниковская А .В ., Грабчикова Е .С . от издательства Национальный институт образования 2019 . 

Русский язык .  Упражнение 111 . 

ГДЗ по русскому языку 5 класс Ладыженская упражнение — 111 .  Подробное решение упражнение № 111 по русскому языку для учащихся 5 класса , авторов Ладыженская, Баранов, Тростенцова, Григорян, Кулибаба 2019-2020 . 

Решение задания номер 111 .  Вы открыли задание номер 111 из решебника на uchim .org . Другие номера 

Решебник, готовые домашние задания (ГДЗ ) по русскому языку для учащихся 11 класса, авторов Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М ., Долбик Е .Е .  Русский язык в 11 классе — это упражнения, выполнение которых требует польностью усвоенного за прошлые годы материала . 

ГДЗ по Русскому языку за 8 класс от Тростенцова: Упражнение №111 из Учебника .  

Упражнение 111 — Русский язык 4 класс (Канакина, Горецкий) Часть 1 Посмотрел видео? Пройди тест: Пройди тест Письменное решение Другие номера Части речи Пройди тест ГДЗ 111 112 113 114 115 116  Посмотрев наше видео, вы сможете справиться с этим заданием за 2 — 3 минуты . 

— Ответ на упражнение 111 .  ГДЗ по русскому языку 9 класс, Тростенцова . костя: плохой ответ . 

ГДЗ (готовое домашние задание из решебника) на Номер №111 по учебнику Русский язык . 7 класс : учебник для общеобразовательных учреждений .  Ответ на Номер №111 из ГДЗ по Русскому языку 7 класс: Ладыженская Т .А . 

На этой странице вы найдёте готовые домашние задания , которые помогут справиться с программой 6 класса по русскому языку . В упражнениях выполнены необходимые пункты и разборы . С нами вы повторите некоторые моменты из 5 класса: что такое текст . . 

Упражнение №111 . Упражнение №110 Упражнение №112 . 

Подробный решебник (ГДЗ ) по Русскому языку за 9 (девятый) класс — готовый ответ упражнение — 111 . Авторы учебника: Мурина, Литвинко, Долбик . Издательство: Национальный институт образования -2020 . 

Готовые домашние задания по русскому языку 5 класса под авторством: Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М . и Николаенко Г .И . 2020 .  Решебник по русскому языку за 5 класс Мурина . Авторы . Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М ., Николаенко Г .И .  111 . 

Упражнения . 

111 . Выпишите по группам слова с гласными после шипящих: а) в корне; б) в суффиксе; в) в окончании . Выделите указанные морфемы . Вставьте пропущенные буквы . 

Белорусские ГДЗ и Решебник за 4 класс по Русскому языку часть 1, часть 2 поможет Вам найти верный ответ на самый сложный номер задания онлайн . Автор учебника: Антипова М .Б ., Верниковская А .В ., Грабчикова Е .С . от издательства Национальный институт образования 2019 . 

Русский язык .  Упражнение 111 . 

ГДЗ по русскому языку 5 класс Ладыженская упражнение — 111 .  Подробное решение упражнение № 111 по русскому языку для учащихся 5 класса , авторов Ладыженская, Баранов, Тростенцова, Григорян, Кулибаба 2019-2020 .  

Решение задания номер 111 .  Вы открыли задание номер 111 из решебника на uchim .org . Другие номера 

Решебник, готовые домашние задания (ГДЗ ) по русскому языку для учащихся 11 класса, авторов Мурина Л .А ., Литвинко Ф .М ., Долбик Е .Е .  Русский язык в 11 классе — это упражнения, выполнение которых требует польностью усвоенного за прошлые годы материала . 

ГДЗ по Русскому языку за 8 класс от Тростенцова: Упражнение №111 из Учебника . 

Упражнение 111 — Русский язык 4 класс (Канакина, Горецкий) Часть 1 Посмотрел видео? Пройди тест: Пройди тест Письменное решение Другие номера Части речи Пройди тест ГДЗ 111 112 113 114 115 116  Посмотрев наше видео, вы сможете справиться с этим заданием за 2 — 3 минуты . 

— Ответ на упражнение 111 .  ГДЗ по русскому языку 9 класс, Тростенцова . костя: плохой ответ . 


ГДЗ По Математике 7 Класс Рабочая
Окружающий Мир 2 Решебник Рабочая
ГДЗ По Математике 6 Класс Автор Быстрова
ГДЗ Рабочая Тетрадь По Русскому Языку 4
ГДЗ По Русскому 7 Класс 2020
ГДЗ English 7 Класс Афанасьева Михеева
ГДЗ По Английскому Языку Восьмой Класс Вербицкая
ГДЗ Биология 7 Класс Рабочая Тетрадь Пасечник
ГДЗ Русский 2 Класс Чуракова 3
Решебник По Математике 11 Класс Латотин Чеботаревский
ГДЗ По Алгебре 7 Мерзляк
ГДЗ По Математике 4 П
ГДЗ Тетрадь Калининой 2 Класс
ГДЗ По Англ Учебник Афанасьева
ГДЗ По Впр 3 Класс
Учебник По Английскому 7 Класс Комарова ГДЗ
ГДЗ Захаров 1 Класс 2 Часть
История 10 Класс Горинов 1 Часть ГДЗ
ГДЗ По Контрольным Тетрадям 3 Класс
Гиа 7 Класс Английский Язык Ваулина ГДЗ
ГДЗ П Алгебре 10 Класс Мордкович
ГДЗ По Математике См Никольский
ГДЗ Бойкина 2 Класс Рабочая
ГДЗ По Немецкому Языку 10 Карелина
Решебник По Матем 11 Класс
Решебник Чтению Тетрадь 4 Класс
ГДЗ По Английскому Языку 11 Класс Spotling
ГДЗ По Ино 9 Класс Биболетова Учебник
ГДЗ Федотова 3 Класс
ГДЗ Русский Язык 8 Класс Бархударов 2020
ГДЗ Петерсон 6 Класс 2
ГДЗ По Русскому 8 Класс Оранжевая
ГДЗ Информатика 10 Класс Шеина
ГДЗ По Русскому 4 Класс Петерсон
ГДЗ По Английскому Языку 6 Кузовлев Учебник
ГДЗ По Украинской Литературе 7 Класс Авраменко
ГДЗ По Биологии 6 Класс Пономаревой
Учебник Немецкого Языка 8 Класс Бим ГДЗ
ГДЗ Физика Упражнение 31
ГДЗ По Алгебре Седьмой Класс Номер Три
Решебник По Математике 9 Класс Дорофеев
Русский Язык 8 Класс Бархударов ГДЗ 2020
ГДЗ По Английскому 6 Класс Рейнбоу
Решебник Литературное Чтение 4 Класс Бунеев
ГДЗ Русский 8 Класс Пичугов Еремеева Купалова
Органическая Химия Воловик Крутецкая 10 11 ГДЗ
ГДЗ По Математике Номер 14
Решебник По Геометрии 9 Класс Позняк
ГДЗ Плешакова 1 Класс Рабочая Тетрадь
ГДЗ По Физике 9 Класс 2020


Рыбченкова 9 Класс Гдз Русский Язык Учебник


ГДЗ По Математике 6 Класс Тематические


Самостоятельные ГДЗ 3 Класс


ГДЗ Окружающий Мир Поглазова 2 Часть


ГДЗ По Английскому Языку Ваулина Седьмой


Кофеин и физические упражнения: метаболизм и работоспособность

Обзор

.
1994 июнь; 19(2):111-38.

doi: 10.1139/h94-010.

Т. Э. Грэм 1 , JW Rush, MH van Soeren

принадлежность

  • 1 Школа биологии человека, Университет Гвельфа, Онтарио.
  • PMID: 8081318
  • DOI: 10.1139/х94-010

Обзор

T. E. Graham et al. Can J Appl Physiol. 1994 июнь

. 1994 июнь; 19(2):111-38.

doi: 10.1139/h94-010.

Авторы

Т. Э. Грэм 1 , Дж. В. Раш, М. Х. ван Соерен

принадлежность

  • 1 Школа биологии человека, Университет Гвельфа, Онтарио.
  • PMID: 8081318
  • DOI: 10.1139/h94-010

Абстрактный

Прием кофеина перед длительной тренировкой замедляет утомление. Однако задействованные механизмы очень неясны. Кофеин связан с повышенным уровнем адреналина в плазме, но его метаболическое влияние неясно. Сбережение гликогена происходит в активных мышцах, по крайней мере, в первые несколько минут, но исследования, как правило, не продемонстрировали усиление метаболизма жиров.

Деметилирование кофеина оксигеназами цитохрома Р-450 печени начинается в течение нескольких минут и образуются диметилксантины (особенно параксантин). Эти соединения появляются в плазме в течение часа после приема кофеина и могут оказывать воздействие на ткани, которое связывают с кофеином и/или адреналином. Хотя наиболее широко поддерживаемая теория состоит в том, что кофеин и другие метилксантины являются антагонистами аденозиновых рецепторов, само по себе это действие не может объяснить все наблюдаемые ответы. Тем не менее, привыкание и отказ от кофеина связаны с повышающей и понижающей регуляцией аденозиновых рецепторов. Одно исследование продемонстрировало заметные различия в влиянии кофеина на концентрацию адреналина и диметилксантинов в плазме между потребителями кофеина и теми, кто его не употреблял. Кофеин, безусловно, является очень активным наркотиком, который оказывает на человека множество эффектов, включая повышение выносливости при физических нагрузках. Это может быть связано с экономией мышечного гликогена и повышенным уровнем адреналина в плазме, но основные механизмы неизвестны.

Похожие статьи

  • Метаболический катехоламин и реакция выносливости на кофеин во время интенсивных упражнений.

    Джекман М., Вендлинг П., Фрайарс Д., Грэм Т.Е. Джекман М. и др. J Appl Physiol (1985). 1996 окт; 81 (4): 1658-63. doi: 10.1152/jappl.1996.81.4.1658. J Appl Physiol (1985). 1996. PMID: 8

    3 Клиническое испытание.

  • Метаболизм кофеина и реакция на адреналин во время упражнений у пользователей и не пользователей.

    Ван Соерен М.Х., Сатхасивам П., Сприет Л.Л., Грэм Т.Е. Ван Соерен М.Х. и соавт. J Appl Physiol (1985). 1993 г., август 75(2):805-12. doi: 10.1152/jappl.1993.75.2.805. J Appl Physiol (1985). 1993. PMID: 8226485 Клиническое испытание.

  • Кофеин и анаэробная производительность: эргогенная ценность и механизмы действия.

    Дэвис Дж.К., Грин Дж.М. Дэвис Дж. К. и соавт. Спорт Мед. 2009;39(10):813-32. doi: 10.2165/11317770-000000000-00000. Спорт Мед. 2009. PMID: 19757860 Обзор.

  • Метаболические, катехоламиновые и физические нагрузки в ответ на различные дозы кофеина.

    Graham TE, Spriet LL. Грэм Т.Э. и соавт. J Appl Physiol (1985). 1995 март; 78(3):867-74. doi: 10.1152/jappl.1995.78.3.867. J Appl Physiol (1985). 1995. PMID: 7775331 Клиническое испытание.

  • Кофеин и выносливость.

    Тарнопольский М.А. Тарнопольский МА. Спорт Мед. 1994 авг.; 18(2):109-25. doi: 10.2165/00007256-199418020-00004. Спорт Мед. 1994. PMID: 9132918 Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Влияние упражнений с отягощениями отдельно или с кофеином на гемодинамику, вегетативную модуляцию и жесткость артерий у женщин, тренирующихся с отягощениями.

    Parks JC, Joplin MCP, Marshall EM, Kearney SG, Humm SM, Kern MA, Pinzone AG, Erb EK, Smith TM, Kingsley JD. Паркс Дж. К. и др. Eur J Appl Physiol. 21 июня 2023 г. doi: 10.1007/s00421-023-05260-x. Онлайн перед печатью. Eur J Appl Physiol. 2023. PMID: 37341819

  • Подходы к питанию для преодоления ограничений производительности в спортивных соревнованиях высокого уровня.

    Берк Л.М. Берк ЛМ. Опыт физиол. 2021 декабрь; 106 (12): 2304-2323. DOI: 10.1113/EP088188. Epub 2021 26 ноября. Опыт физиол. 2021. PMID: 34762329 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

  • Сердечные эффекты лекарств, повышающих производительность: кофеин против анаболических андрогенных стероидов.

    Сивалоканатан С., Малек Л.А., Малхотра А. Сивалоканатан С. и соавт. Диагностика (Базель). 2021 17 февраля; 11 (2): 324. doi: 10.3390/diagnostics11020324. Диагностика (Базель). 2021. PMID: 33671206 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

  • Влияние острого приема кофеина на выполнение когнитивных двойных задач при оценке статического и динамического баланса у пожилых людей.

    Таллис Дж., Брэдфорд С., Дункан М.Дж., Леддингтон-Райт С., Хиггинс М.Ф., Хилл М. Таллис Дж. и др. Питательные вещества. 2020 27 ноября; 12 (12): 3653. дои: 10.3390/nu12123653. Питательные вещества. 2020. PMID: 33261032 Бесплатная статья ЧВК.

  • Нейрональные аденозиновые рецепторы A 2A сигнализируют об эргогенных эффектах кофеина.

    Агияр А.С. младший, Спек А.Е., Канас П.М., Кунья Р.А. Агиар А.С. мл. и соавт. Научный представитель 2020 г. 7 августа; 10 (1): 13414. дои: 10.1038/s41598-020-69660-1. Научный представитель 2020. PMID: 32770138 Бесплатная статья ЧВК.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Введение мутантных генов в Pseudomonas syringae pv. syringae штамм B301D, селекция на обмен маркерами и скрининг штаммов на фенотипические изменения.

Чтобы восстановить функцию гена, его необходимо мутировать или разрушить. Это может быть достигнуто путем мутагенеза транспозонов или сайт-направленного инсерционного мутагенеза. Затем можно использовать электропорацию для введения мутантного гена в организм дикого типа путем трансформации. Затем мутированный ген может рекомбинировать в геном посредством гомологичной рекомбинации, чтобы разрушить ген дикого типа.

Ген syrB из Pseudomonas syringae pv. шприцев 9Штамм 0150 B301D ранее был мутирован сайт-направленным инсерционным мутагенезом. Ген syrB кодирует синтетазы сирингомицина и частично отвечает за биосинтез сирингомицина (13). В этом упражнении мутантный ген syrB будет трансформирован в P. syringae pv. syringae штамм B301D методом электропорации. Он содержится в плазмиде pBR325, которая не является плазмидой широкого круга хозяев и не будет поддерживаться в P. syringae 9.0150 физ. syringae , способствуя гомологичной рекомбинации. В процессе гомологичной рекомбинации мутантный ген должен рекомбинировать в геном, нарушая ген syrB1 дикого типа . Затем полученные мутанты можно оценить на предмет изменения фенотипа. В этом случае потерю способности продуцировать сирингомицин можно определить с помощью биоанализа сирингомицина.

МАТЕРИАЛЫ:

    Носитель

  • Чашки с агаром NBY

  • бульон NBY

  • Чашки с агаром NBY плюс канамицин (Km) (100 мкг/мл)

  • Чашки с агаром NBY плюс тетрациклин (Tc) (25 мкг/мл)

  • SOC средний

    НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ РЕЦЕПТЫ СРЕДСТВ:

   Бактериальный штамм

Р . шприц тел. шприц штамм B301D

   Плазмидная ДНК

Суицидальная плазмидная ДНК, несущая нарушенный ген

  • pBR325, несущий фрагмент syrB1 с разрушением канамициновой кассеты, Tc r , Km r .

Плазмидная ДНК широкого круга хозяев (контроль)

  • pRK415, производный от RK2 вектор широкого диапазона хозяев размером 13 т.п.н., Tc r (5).

  • pUCP26, производный от pUC вектор размером 4,8 т.п.н., несущий фрагмент Pst I размером 1,9 т.п.н., позволяющий поддерживать плазмиду в Pseudomonas , Tc r (13).

   Оборудование

  • Микропипетки (емкость 1000 мкл, 250 мкл и 25 мкл)

  • Стерильные наконечники для пипеток

  • Система электропорации Gene Pulser II с блоком Pulse Controller II (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)

  • кюветы (0,1 см) (хранить при температуре -20ºC и хранить на льду, пока не будете готовы их использовать)

  

  • Стерильные стеклянные пробирки.

  • Инкубатор-шейкер (25°C)

  • Стеклянная хоккейная клюшка для распространения бактерий

  • Пробирки для центрифугирования (емкостью 1,5 и 0,5 мл)

  • Стерильная дистиллированная вода

  • ПРОЦЕДУРА:

    1. Инокулировать на чашку NBY свежерастущие клетки P. syringae pv. syringae штамм B301D (возрастом менее 24 часов) с использованием стерильной петли, так что вырастет лужайка бактерий. Инкубируйте чашку Петри при 25°C на ночь (~ 16 ч). Бактерии должны находиться в экспоненциальной или ранней стационарной фазе. Использование бактериальных клеток в поздней стационарной фазе может снизить эффективность электропорации, поэтому не следует использовать культуры старше 24 часов.

    Рисунок 1. Бактериальный газон P. syringae pv. syringae штамм B301D. Планшет NBY инокулировали бактериальным штаммом B301D и инкубировали при 25ºC в течение ~ 16 часов.

    2. Ресуспендируйте бактериальный газон, используя 4 мл холодной стерильной дистиллированной воды (SDW). Будьте осторожны, чтобы не ресуспендировать небольшие кусочки агара, потому что присутствие агара в бактериальной суспензии снизит эффективность электропорации. Важно держать бактериальные клетки на льду на протяжении всей процедуры, чтобы повысить эффективность электропорации.

    3. Перенесите суспензию в 1,5 мл микроцентрифужные пробирки и осадите клетки (14 000 об/мин в течение 1 мин).

    4. Ресуспендируйте каждую микроцентрифужную пробирку с клетками в 1 мл холодного SDW и дважды повторите шаг 3. После второй промывки ресуспендируйте клетки в ~ 400 мл холодного SDW для каждой чашки Петри с клетками и поместите пробирку с клетками в центрифугу на льду. Отберите аликвоту по 5 мкл и определите концентрацию клеток путем посева с разбавлением.

       НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ПОСМОТРЕТЬ Примечание для инструктора 3

    5. Параметры электропоратора: сопротивление=200 Ом, напряжение=1,8 кВ/см.

    6. Внесите 60 мкл бактериальных клеток в микроцентрифужную пробирку объемом 0,5 мл с 1–2 мкг суицидной плазмиды и осторожно перемешайте.

    7. Внесите бактериальные клетки и суспензию ДНК в кювету для электропорации и электропорируйте.

       НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ Примечание для инструктора 4

    8. Разбавьте смесь для электропорации 1 мл SOC и поместите ее в пробирку с 4 мл SOC. Инкубировать при встряхивании при 25°C в течение 4 часов.

    9. Отберите аликвоты по 1 мл и осадите все 5 мл культуры в микроцентрифужные пробирки на 1,5 мл (14 000 об/мин в течение 1 мин).

    10. Ресуспендируйте бактериальные клетки в 200 мкл бульона NBY на микроцентрифужную пробирку. Перенесите аликвоты по 100 мкл на агар NBY плюс Km и равномерно распределите по поверхности агара с помощью стерильной стеклянной хоккейной клюшки. Перенесите аликвоты по 100 мкл контрольной электропорации на агар NBY плюс Tc и равномерно распределите по поверхности агара с помощью стерильной стеклянной хоккейной клюшки. Инкубируйте чашки Петри при 25°C в течение 48 часов.

    11. Оставьте оставшуюся часть смеси для электропорации инкубироваться при встряхивании при 25°C в течение ночи.

    12. Осадите клетки и ресуспендируйте в ½ объема бульона NBY. Перенесите аликвоты по 100 мкл на агар NBY плюс Km и равномерно распределите по поверхности агара с помощью стерильной стеклянной хоккейной клюшки. Перенесите аликвоты по 100 мкл контрольной электропорации на агар NBY плюс Tc и равномерно распределите по поверхности агара с помощью стерильной стеклянной хоккейной клюшки. Инкубируйте чашки Петри при 25°C в течение 48 часов.

    13. Отберите колонии, выросшие через 48 часов, и посейте их штрихами на агар NBY, а также выполните соответствующий отбор для получения одиночных колоний. Инкубируйте планшеты при 25°C в течение 48 часов. Примечание. Штаммы, которые лишь временно несут устойчивость (т. е. гомологичная рекомбинация не произошла), на этом этапе не вырастут в отдельные колонии.

    14. Отдельные колонии, которые растут и имеют размер Km r , должны быть проверены на обмен маркерами (гомологичная рекомбинация). Отдельные колонии в чашках-репликах помещаются на агар NBY с Km и агар NBY с Tc для скрининга плюс/минус.

    Рис. 2. Экран плюс/минус для замены маркера. Все выбранные колонии будут расти на NBY плюс Km. Колонии, в которых произошла замена маркеров (т. е. гомологичная рекомбинация), будут чувствительны к тетрациклину и не будут расти на NBY плюс Tc. Для дальнейшего анализа отбирают устойчивые к канамицину и чувствительные к тетрациклину колонии.

    15. Колонии, км r и Tc r являются потенциальными штаммами, в которых произошла гомологичная рекомбинация между геном дикого типа и нарушенным геном. Влияние этих штаммов на продукцию сирингомицина можно проанализировать с помощью биоанализа токсинов на продукцию сирингомицина.

    Рисунок 3 . Гомологическая рекомбинация приводит к замене гена дикого типа нарушенным геном в бактериальной хромосоме. Этот нарушенный ген несет ген, придающий бактериальному штамму устойчивость к антибиотику, в данном случае к канамицину.

       НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ Примечание для инструктора 5

    E FOR Примечание для инструктора 6

    16. Геномная ДНК из колоний с Km r и Tc s можно выделить и проанализировать с помощью Саузерн-гибридизации, чтобы подтвердить отсутствие суицидального вектора и местонахождение нарушенного гена.

       НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ Примечание для инструктора 7

    НАБЛЮДЕНИЯ:

    1. Рассчитайте эффективность мутагенеза с обменом маркеров для суицидной плазмиды. Это указывается как трансформанты/мкг ДНК.

    2. Рассчитайте эффективность электропорации контрольной плазмиды.

    Эффективность трансформации может варьироваться, но, как правило, эффективность электропорации для трансформации плазмиды широкого круга хозяев в P. syringae pv. syringae штамм B301D может варьироваться от 1 x 10 9от 0009 4 трансформантов/мкг ДНК до 1 x 10 5 трансформантов/мкг ДНК в зависимости от размера плазмиды.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *