ГДЗ контрольно-измерительные материалы по математике за 2 класс Глаголева, Волковская ФГОС
Второй год в образовательном учреждении станет такой же насыщенный и красочный, как предыдущий. Второклассники могут, не беспокоиться, скучно будет только дома, но ни как не на уроках. Тем более, когда на горизонте маячат старые предметы, но в совершенно новой, игривой обертке. Сегодня речь пойдет про контрольно-измерительные материалы по математике 2 класс Глаголева Ю.И. (к учебнику Моро) УМК «Школа России». Именно это великолепное издание, поспособствует лучшему развитию ребенка в определенном ритме. Благодаря представленному дополнительному курсу, школьники смогут отслеживать успеваемость и результативность. Анализируя основную программу и работая во второстепенном пособии, можно добиться хороших показателей, за короткий промежуток времени, собственно это есть первоочередная задача учителей. Решая и осваивая, стоит помнить, что обязательно попадутся трудные геометрические уравнения, которые достаточно сложно понять с первого раза. Здесь существует единственный верный выход, это бросить взгляд на готовые домашние задания. Только
Математическое пособие предлагает пройти замечательный познавательный путь, на котором предстоит осмысливать много разнообразных примеров. Конечно второй год, помимо ответственных решений, несет в себе и много развлекательных моментов. Например, даже контрольные и самостоятельные, сделаны в интересном, стиле. Поэтому работая с каждой главой, темой или упражнением, эффекта отталкивания из-за нудности процесса, не станет. Стоит отметить, что все тематические разделы в двух экземплярах одинаковы, просто в одном осваиваем, а в данном только анализируем, спорим, решаем. Такой ритм сделает процесс обучения более разнообразным и эффективным.
ГДЗ прекрасный шанс, использовать верные ответы с подробным описанием.
ГДЗ Математика 2 класс М. И. Моро. Страинца: 19
Категогия: —>> Математика 2 класс. М. И. Моро. Часть 1.
Страинца: —>> 16 — 18 19 — 21 22 — 24
наверхСтраница 19
Задание 3.
Во время перемены в лесной школе на поляне играли белки, зайцы и ежи, всего 10 зверей. Ежей было на 4 меньше, чем белок, и на 3 меньше, чем зайцев. Сколько было ежей? белок? зайцев?
Решение:
- 1) 4 + 3 = 7;
- 2) 10 — 7 = 3;
- 3) 1 + 4 = 5;
- 4) 1 + 3 = 4 ;
- Ответ: на поляне играли 1 еж, 5 белок и 4 зайца
- Пусть ежей было x, белок x + 4, зайцев x + 3. Тогда:
- x + 4 + x + 3 + x = 10;
- 3x + 7 = 10;
- 3x = 10 — 7 = 3;
- x = 3 : 3 = 1.
- x + 3 = 1 + 3 = 4.
- x + 4 = 1 + 4 = 5.
Задание 4. Игра «Кто первым наберет 10»
Играют двое. Один называет любое число от 1 до 5. Другой прибавляет к этому числу 1 или 2. Дальше оба продолжают прибавлять к полученному числу 1 или 2 по очереди. Выигрывает тот, кто первым получит число 10. Например: играют Оля и Юра.
|
|
Задание 5.
Ученикам лесной школы очень понравилось работать на машине, которая перекрашивала фигуры жёлтого цвета в зелёный, а размер и форму фигур не меняла. Они правильно выполнили все задания.
Расскажи, какие фигуры появились в окошках каждой машины.
Решение:
Зеленый кружок, желтый квадрат, желтый домик.
Страница 20. Что узнали, чему научились.
Задание 1.
- Открой книгу на странице 3 и ответь на вопросы:
- 1) Сколько рядов кресел в зрительном зале и сколько кресел в каждом ряду? Сколько всего кресел?
- 2) В котором по счёту ряду (если считать от сцены) занято только 4 места? Сколько свободных мест в этом ряду?
- 3) Сколько всего ребят уже заняли свои места в первых трёх рядах? Сколько их станет, когда займут свои места ещё двое?
- 4) Сколько мест занято и сколько ещё свободно в последнем ряду?
Решение:
- 1) 10 рядов, 10 кресел вкаждом ряду, 100 кресел всего.
- 2) В восьмом ряду, свободных мест 6.
- 3) 28 ребят уже заняли свои места. Когда займут места еще двое ребят станет 30.
- 4) 7 мест занято, свободно 3.
Задание 2.
С одной яблони собрали 20 кг яблок, а с другой — на 10 кг больше. Сколько всего килограммов яблок собрали с двух яблонь?
Объясни, что ты узнаешь сначала (первым действием) и как ты это узнаешь. Что узнаешь вторым действием? Дай полный ответ на вопрос задачи.
Решение:
- 1) Сначала узнаем сколько яблок собрали со второй яблони: 20 + 10 = 30
- 2) Узнаем сколько кг яблок собрали с двух яблонь: 30 + 20 = 50
- Ответ: с двух яблонь собрали 50 кг яблок.
Задание 3.
Саша, Коля и Женя участвовали в соревнованиях по стрельбе. Кто из них набрал больше всего очков и кто занял второе и третье места?
Решение:
- 1) 50 + 20 + 20 = 70 (очков) набрал Саша;
- 2) 50 + 30 + 20 = 100 (очков) набрал Коля;
- 3) 30 + 30 + 20 = 80 (очков) набрал Женя.
- Ответ: Коля занял первое место, Женя второе, Саша третье.
Задание 4.
Решение:
| 7 м > 9 дм | 25 мм < 3 см |
| 16 мм > 1 см | 1 м > 99 см |
| 48 см > 4 дм | 25 мм < 3 см |
Задание 5.
Начерти такие фигуры и запиши название каждой из них.
Решение:
1 — шестиугольник, 2 — пятиугольник, 3 — четырехугольник.
Страница 21
Задание 6.
Восстанови пропущенные знаки действий.
Решение:
| 8 + 7 — 5 = 10 | 14 — 10 + 6 = 10 |
| 8 — 7 + 5 = 6 | 12 — 2 + 8 = 18 |
Задание 7.
Составь верные равенства и неравенства с помощью таких карточек:
Решение:
- 8 — 2 = 6
- 13 — 6 = 7
- 8 — 2 < 13 — 6
- 7 > 6
Задание 8.
- 1) Найди сумму чисел: 7 и 6, 8 и 5, 9 и 3.
- 2) Найди разность чисел: 13 и 7, 12 и 8, 16 и 9.
- 3) Увеличь на 6 каждое число: 8, 4, 5.
- 4) Уменьши на 10 каждое число: 13, 17, 19, 20.
Решение:
- 1) 7 + 6 = 13; 8 + 5 = 13; 9 + 3 = 12.
- 2) 13 — 7 = 6; 12 — 8 = 4; 16 — 9 = 7.
- 3) 6 + 8 = 14; 6 + 4 = 10; 5 + 6 = 11.
- 4) 13 — 10 = 3; 17 — 10 = 7; 19 — 10 = 9; 20 — 10 = 10.
Задание 9.
Решение:
| 8 + 6 — 10 = 14 — 10 = 4 | 18 — 10 + 7 = 8 + 7 = 15 | 14 — 10 + 8 = 4 + 8 = 12 |
| 9 + 3 — 2 = 12 — 2 = 10 | 19 — 9 + 2 = 10 + 2 = 12 | 16 — 8 + 9 = 8 + 9 = 17 |
Задание 10.
Решение:
| 13 — 5 — 8 = 8 — 8 = 0 | 15 — 8 — 5 = 7 — 5 = 2 | 11 — 4 + 9 = 7 + 9 = 16 |
| 14 — 7 — 6 = 7 — 6 = 1 | 13 — 9 + 8 = 4 + 8 = 12 | 16 — 8 + 9 = 8 + 9 |
Задание 11.
С одной грядки бабушка сняла 8 огурцов, а с другой — на 2 огурца меньше. Сколько огурцов она сняла с обеих грядок?
Решение:
- 1) 8 + 2 = 10 (огурцов) со второй грядки;
- 2) 10 + 8 = 18 (огурцов).
- Выражение: 8 + 2 + 8 = 18 (огурцов).
- Ответ: с двух градок бабушка собрала 18 огурцов.
Задание 12.
Решение:
В прятки играли 8 детей. Потом ушли домой 2 девочки и 1 мальчик. Сколько детей осталось играть? Дополни условие и реши задачу.
- 1) 2 + 1 = 3 (детей) всего ушли;
- 2) 8 — 3 = 5 (детей).
- Выражение: 8 — (2 + 1) = 5 (детей).
- Ответ: осталось играть 5 детей.
Задание 13.
Рассмотри чертежи.
Сколько на каждом из них треугольников и сколько четырёхугольников?
Решение:
1 — 4 четырехугольника, 4 треугольника. 2 — 8 треугольников, 1 четырехугольник. 3 — 3 треугольника 1 четырехугольник.
Страинца: —>> 16 — 18 19 — 21 22 — 24
Математика. 2 класс. Ответы к заданиям
Математика
Ответы по математике. 2 класс. Рабочая тетрадь. Моро М. И., Волкова С. И.
Часть 1.
Ответы к стр. 3
Ответы к стр. 4
Ответы к стр. 5
Ответы к стр. 6
Ответы к стр. 7
Ответы к стр. 8
Ответы к стр. 9
Ответы к стр. 10
Ответы к стр. 11
Ответы к стр. 12
Ответы к стр. 13
Ответы к стр. 15
Ответы к стр. 16
Ответы к стр. 17
Ответы к стр. 18
Ответы к стр. 19
Ответы к стр. 20
Ответы к стр.
21Ответы к стр. 22
Ответы к стр. 23
Ответы к стр. 24
Ответы к стр. 25
Ответы к стр. 26
Ответы к стр. 27
Ответы к стр. 28
Ответы к стр. 29
Ответы к стр. 30
Ответы к стр. 31
Ответы к стр. 32
Ответы к стр. 33
Ответы к стр. 34
Ответы к стр. 35
Ответы к стр. 36
Ответы к стр. 37
Ответы к стр. 38
Ответы к стр. 39
Ответы к стр. 40
Ответы к стр. 41
Ответы к стр. 42
Ответы к стр. 43
Ответы к стр. 44
Ответы к стр. 45
Ответы к стр. 46
Ответы к стр. 47
Ответы к стр. 48
Ответы к стр. 49
Ответы к стр. 50
Ответы к стр. 51
Ответы к стр. 52
Ответы к стр. 53
Ответы к стр. 54
Ответы к стр. 55
Ответы к стр. 57
Ответы к стр. 58
Ответы к стр. 59
Ответы к стр. 60
Ответы к стр. 61
Ответы к стр. 62
Ответы к стр. 63
Ответы к стр. 64
Ответы к стр. 65
Ответы к стр. 66
Ответы к стр. 67
Ответы к стр. 68
Ответы к стр. 69
Ответы к стр. 70
Ответы к стр. 71
Ответы к стр. 72
Ответы к стр. 73
Ответы к стр. 74
Ответы к стр. 75
Ответы к стр. 76
Ответы к стр. 77
Ответы к стр. 78
Ответы к стр. 79
Ответы к стр. 80
Ответы по математике. 2 класс. Рабочая тетрадь. Моро М. И., Волкова С. И.
Часть 2.
Ответы к стр. 3
Ответы к стр. 4
Ответы к стр. 5
Ответы к стр. 6
Ответы к стр. 7
Ответы к стр. 8
Ответы к стр. 9
Ответы к стр. 10
Ответы к стр. 11
Ответы к стр. 12
Ответы к стр. 13
Ответы к стр. 14
Ответы к стр. 15
Ответы к стр. 16
Ответы к стр. 17
Ответы к стр. 18
Ответы к стр. 19
Ответы к стр. 20
Ответы к стр. 21
Ответы к стр. 22
Ответы к стр. 23
Ответы к стр. 24
Ответы к стр. 25
Ответы к стр. 26
Ответы к стр. 27
Ответы к стр. 28
Ответы к стр. 29
Ответы к стр. 30
Ответы к стр. 31
Ответы к стр. 32
Ответы к стр.
33
Ответы к стр. 34
Ответы к стр. 35
Ответы к стр. 36
Ответы к стр. 37
Ответы к стр. 38
Ответы к стр. 39
Ответы к стр. 40
Ответы к стр. 41
Ответы к стр. 42
Ответы к стр. 43
Ответы к стр. 44
Ответы к стр. 45
Ответы к стр. 46
Ответы к стр. 47
Ответы к стр. 48
Ответы к стр. 49
Ответы к стр. 50
Ответы к стр. 51
Ответы к стр. 52
Ответы к стр. 53
Ответы к стр. 54
Ответы к стр. 55
Ответы к стр. 56
Ответы к стр. 57
Ответы к стр. 58
Ответы к стр. 59
Ответы к стр. 60
Ответы к стр. 61
Ответы к стр. 62
Ответы к стр. 63
Ответы к стр. 64
Ответы к стр. 65
Ответы к стр. 66
Ответы к стр. 67
Ответы к стр. 68
Ответы к стр. 69
Ответы к стр. 70
Ответы к стр. 71
Ответы к стр. 72
Ответы к стр. 73
Ответы к стр. 74
Ответы к стр. 75
Ответы к стр. 76
Ответы к стр. 77
Ответы к стр. 78
Ответы к стр. 79
Ответы к стр. 80
Ответы по математике. 2 класс. Проверочные работы. Волкова С. И.
Числа от 1 до 100. Нумерация
Проверочная работа 1 (с. 4 -5)
Проверочная работа 2 (с. 6 -7)
Проверочная работа 3 (с. 8 -9)
Проверочная работа 4 (с. 10 – 11)
Тест 1 (с. 12 – 13)
Тест 2 (с.14 – 15)
Числа от 1 до 100. Сложение и вычитание
Проверочная работа 1 (с. 16 – 17)
Проверочная работа 2 (с. 18 – 19)
Проверочная работа 3 (с. 20 – 21)
Проверочная работа 4 (с. 22 -23)
Проверочная работа 5 (с. 22 – 23)
Тест 1 (с. 24 – 25)
Тест 2 (с. 26 -27)
Сложение и вычитание (продолжение)
Проверочная работа 1 (с. 28 – 29)
Проверочная работа 2 (с. 30 -31)
Проверочная работа 3 (с. 32 – 33)
Проверочная работа 4 (с. 34 – 35)
Проверочная работа 5 (с. 36 – 37)
Тест 1 (с. 38 – 39)
Тест 2 (с. 40 – 41)
Сложение и вычитание (продолжение)
Проверочная работа 1 (с. 42 – 43)
Проверочная работа 2 (с. 44 – 45)
Проверочная работа 3 (с.
46 – 47)
Проверочная работа 4 (с. 48 – 49)
Тест (с. 50 – 51)
Числа от 1 до 100. Умножение и деление
Проверочная работа 1 (с. 52 – 53)
Проверочная работа 2 (с. 54 – 55)
Проверочная работа 3 (с. 56 – 57)
Умножение и деление (продолжение)
Проверочная работа 1 (с. 58 – 59)
Проверочная работа 2 (с. 60 – 61)
Проверочная работа 3 (с. 62 – 63)
Тест 1 (с. 64 – 65)
Тест 2 (с. 66 – 67)
Итоговые тесты за второй класс
Тест 1 (с. 68 – 69)
Тест 2 (с. 70 – 71)
Тест 3 (с. 72 – 73)
Ответы по математике. 2 класс. Учебник. Моро М. И., Бантова М. А., Бельтюкова М. А., Волкова С. И., Степанова С. В.
Часть 1.
Ответы к стр. 4
Ответы к стр. 5
Ответы к стр. 6
Ответы к стр. 7
Ответы к стр. 8
Ответы к стр. 9
Ответы к стр. 10
Ответы к стр. 11
Ответы к стр. 12
Ответы к стр. 13
Ответы к стр. 14
Ответы к стр. 15
Ответы к стр. 16
Ответы к стр. 17
Странички для любознательных (стр. 18 – 19)
Что узнали. Чему научились (стр. 20)
Что узнали. Чему научились (стр. 21)
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 22 – 23)
Странички для любознательных (стр. 24)
Ответы к стр. 26
Ответы к стр. 27
Ответы к стр. 28
Ответы к стр. 29
Ответы к стр. 30
Ответы к стр. 31
Ответы к стр. 32
Ответы к стр. 33
Ответы к стр. 34
Ответы к стр. 35
Странички для любознательных (стр. 36 – 37)
Ответы к стр. 38
Ответы к стр. 39
Ответы к стр. 40
Ответы к стр. 41
Ответы к стр. 42
Ответы к стр. 43
Ответы к стр. 44
Ответы к стр. 45
Ответы к стр. 46
Ответы к стр. 47
Странички для любознательных (стр. 50 – 51)
Что узнали. Чему научились (стр. 52)
Что узнали. Чему научились (стр. 53)
Что узнали. Чему научились (стр. 54)
Что узнали. Чему научились (стр. 55)
Что узнали. Чему научились (стр. 56)
Ответы к стр. 57
Ответы к стр. 58
Ответы к стр.
59
Ответы к стр. 60
Ответы к стр. 61
Ответы к стр. 62
Ответы к стр. 63
Ответы к стр. 64
Ответы к стр. 65
Ответы к стр. 66
Ответы к стр. 67
Ответы к стр. 68
Ответы к стр. 69
Странички для любознательных (стр. 70 – 71)
Что узнали. Чему научились (стр. 72 – 73)
Что узнали. Чему научились (стр. 74 – 75)
Ответы к стр. 76
Ответы к стр. 77
Ответы к стр. 78
Ответы к стр. 79
Ответы к стр. 80
Ответы к стр. 81
Ответы к стр. 82
Ответы к стр. 83
Ответы к стр. 84
Ответы к стр. 85
Ответы к стр. 86
Ответы к стр. 87
Ответы к стр. 88
Ответы к стр. 89
Что узнали. Чему научились (стр. 90)
Что узнали. Чему научились (стр. 91)
Что узнали. Чему научились (стр. 92)
Что узнали. Чему научились (стр. 93)
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 94)
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 95)
Ответы по математике. 2 класс. Учебник. Моро М. И., Бантова М. А., Бельтюкова М. А., Волкова С. И., Степанова С. В.
Часть 2.
Ответы к стр. 4
Ответы к стр. 5
Ответы к стр. 6
Ответы к стр. 7
Ответы к стр. 9
Ответы к стр. 10
Ответы к стр. 11
Ответы к стр. 12
Ответы к стр. 13
Ответы к стр. 14
Ответы к стр. 15
Ответы к стр. 16
Ответы к стр. 17
Ответы к стр. 18
Ответы к стр. 19
Странички для любознательных (стр. 20 – 21)
Что узнали. Чему научились (стр. 22)
Что узнали. Чему научились (стр. 23)
Что узнали. Чему научились (стр. 24)
Что узнали. Чему научились (стр. 25)
Что узнали. Чему научились (стр. 26)
Что узнали. Чему научились (стр. 27)
Странички для любознательных (стр. 28)
Ответы к стр. 29
Ответы к стр. 30
Ответы к стр. 31
Ответы к стр. 32
Ответы к стр. 33
Ответы к стр. 34
Ответы к стр. 35
Странички для любознательных (стр. 38 – 39)
Что узнали. Чему научились (стр. 40)
Что узнали. Чему научились (стр.
41)
Что узнали. Чему научились (стр. 42)
Что узнали. Чему научились (стр. 43)
Что узнали. Чему научились (стр. 44)
Что узнали. Чему научились (стр. 45)
Странички для любознательных (стр. 46)
Ответы к стр. 48
Ответы к стр. 49
Ответы к стр. 50
Ответы к стр. 51
Ответы к стр. 52
Ответы к стр. 53
Ответы к стр. 54
Ответы к стр. 55
Ответы к стр. 56
Ответы к стр. 57
Ответы к стр. 58
Ответы к стр. 59
Ответы к стр. 60
Ответы к стр. 61
Ответы к стр. 62
Что узнали. Чему научились (стр. 63)
Странички для любознательных (стр. 64 – 65)
Что узнали. Чему научились (стр. 66)
Что узнали. Чему научились (стр. 67)
Что узнали. Чему научились (стр. 68)
Что узнали. Чему научились (стр. 69)
Что узнали. Чему научились (стр. 70)
Странички для любознательных (стр. 71)
Ответы к стр. 72
Ответы к стр. 73
Ответы к стр. 74
Ответы к стр. 75
Ответы к стр. 76
Ответы к стр. 77
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 78)
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 79)
Ответы к стр. 80
Ответы к стр. 81
Ответы к стр. 82
Ответы к стр. 83
Ответы к стр. 84
Ответы к стр. 85
Странички для любознательных (стр. 86 – 87)
Что узнали. Чему научились (стр. 88)
Что узнали. Чему научились (стр. 89)
Ответы к стр. 90
Ответы к стр. 91
Ответы к стр. 92
Ответы к стр. 93
Ответы к стр. 94
Странички для любознательных (стр. 95)
Что узнали. Чему научились (стр. 96)
Что узнали. Чему научились (стр. 97)
Что узнали. Чему научились (стр. 98)
Что узнали. Чему научились (стр. 99)
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 100 – 101)
Что узнали. Чему научились во 2-м классе
Ответы к стр. 102
Ответы к стр. 103
Ответы к стр. 104
Ответы к стр. 105
Ответы к стр. 106
Ответы к стр. 107
Ответы к стр. 108
Ответы к стр. 109
Проверим себя и оценим свои достижения (стр. 110 – 111)
3 / 5 ( 50 голосов )
«Спартак» забил автогол и одержал волевую победу над «Динамо» благодаря пенальти
Вишенкой на торте субботней части 22-го тура РПЛ было московское дерби «Динамо» и «Спартака».
Протокол игры
«Динамо» и «Спартак» в последнее время чем-то похожи. Чем именно? Тем, что это титулованные клубы, давненько не оправдывающие высоких ожиданий, – за исключением, конечно, чемпионского сезона «красно-белых» при Каррере. Ну и ещё тем, что у них немецкие главные тренеры. К отчётной встрече и спартаковцы, и динамовцы подходили на подъёме. Первые в прошлом туре эффектно не оставили камня на камне от «Краснодара» (6:1), а вторые обладали трёхматчевой победной серией, которая включала в себя в том числе кубковый успех над «Спартаком» (2:0). Огоньку московскому дерби добавлял и тот факт, что накануне КДК РФС отменил дисквалификационную жёлтую карточку динамовца Фомина, при этом оставив в силе подобное наказание для спартаковца Жиго. «Красно-белый» клуб потребовал разъяснений, но решение контрольно-дисциплинарного комитета всё равно не изменилось.
Начало матча по игре осталось за «Спартаком». Уже на третьей минуте Айртон рисовал в чужой штрафной пенальти, но судья в поле Сергей Иванов и видеоарбитр Карасёв посчитали картину бразильского защитника фейком. И посчитали, кажется, правильно: Айртон стал падать ещё до того, как Паршивлюк поставил свою ногу близко к его ноге, да и контакт там особо не просматривался.
В февральском кубковом матче «Динамо» забило «Спартаку» в четвёртую пятиминутку. И сейчас получилось так же, только на этот раз динамовцы забили не с пенальти, а с игры. Хотя вообще-то забили не динамовцы, а спартаковцы. Если конкретно, то Маслов. Как понимаете, в свои ворота. Грулёв на правом полуфланге пустился в забег под длинный заброс, однако возле лицевой путь для доставки в центр ему прикрыл Джикия. Впрочем, молодой динамовец не растерялся и отпасовал назад Лесовому, который уже прострелил из-за Кутепова, и Маслов на дальней штанге отправил мяч в свои ворота, неоправданно боясь, как бы этого не сделал Фомин, находившийся всё-таки в стороне (1:0). Иванов сначала отменил гол из-за предполагавшегося офсайда у Грулёва, но видеоассистенты верно определили, что «вне игры» там не было, и справедливость восторжествовала.
Мы помним, что Маслов уже забивал в свои ворота – летом прошлого года в гостях против «Сочи». Теперь вот ещё один.
Понятно, что автогол не красит команду, которая производит его на свет. Но с другой стороны, «красно-белые» довольно быстро ликвидировали его последствия в плане счёта на табло. На исходе получаса игры Соболев собрал на себе пару опекунов на левом полуфланге и диагонально прострелил на противоположный, откуда подключившийся Мозес поразил по земле дальний угол (1:1).
Игра проходила в добротном темпе, однако её нельзя было назвать открытой. Это был явно не вариант матча «Спартак» – «Краснодар», где у обеих команд сзади наблюдался проходной двор. Здесь всё-таки ситуация в оборонах была посолидней. К динамовским воротам стал пристреливаться Промес, и в начале второго тайма «Спартак» атаковал больше, что в итоге привело к попаданию мяча в руку Скопинцеву. Произошло это в штрафной хозяев. Маслов реабилитировался за автогол: он сделал навес справа, и мяч срикошетил от левого бедра в правую руку Скопинцева. Главному арбитру Иванову хватило одного видеоповтора, чтобы указать на точку. Соболев с одиннадцати метров послал мяч низом в левую сторону в проекцию одной из надписей «ВТБ» на рекламном щите, Шунин двинулся в другой угол (1:2).
В конце гости отодвинули игру от своих ворот, но не избежали момента Евгеньева, который, на счастье «красно-белых», пробил рядом со штангой мимо створа. «Спартак» одержал вторую подряд победу в большом матче, а «Динамо» в 2021 году впервые и проиграло, и не победило. Можно сказать, что ВАР вернул должок команде Доменико Тедеско, если сопоставить пенальти на Мозесе в кубковом матче и эпизод с рукой Скопинцева в отчётной встрече. «Спартак» обогнал ЦСКА и вернулся на второе место, сохранив четырёхочковое отставание от «Зенита». Но есть для «красно-белых» и неприятные новости: в конце первого тайма из-за травмы пришлось заменить Мозеса, а в конце второго – Ларссона.
Кирилл Иванцов
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.
Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.
Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Повышение урожайности и биологической активности растворимых молекул MHC класса II на основе «выступов в отверстие»
Система экспрессии растворимых pMHC класса II у млекопитающих
Мы использовали лентивирусные векторы, кодирующие репортерные кассеты IRES-CFP или IRES-EGFP (рис. 1а). ) для экспрессии pMHCII в клетках CHO. Α- и β-цепи pMHCII были либо транскрибированы с одной ORF как две цепи, разделенные рибосомной пропускающей последовательностью P2A (рис. 1b), либо с двух разных ORF в разных векторах (рис.1в). Рисунки 2–4 суммируют структурные особенности репрезентативных конструкций для различных pMHCIIs, описанных здесь, а также ключевые соединительные последовательности. В таблице 1 представлен список использованных здесь мышиных и человеческих pMHCII и их выходы экспрессии. Вкратце, трансдуцированные клетки CHO-S, экспрессирующие высокие уровни EGFP и CFP, были отсортированы с помощью проточной цитометрии и выращены в среде, не содержащей белков, во встряхиваемых колбах с использованием протокола партии с подпиткой. pMHCII очищали от супернатантов и использовали непосредственно для покрытия наночастиц оксида железа (НЧ) или биотинилировали для получения тетрамеров pMHCII.
Рис. 1 Дизайн конструкции для экспрессииpMHCII. На рисунках изображена общая структура лентивирусной системы ( a ) и тип используемых конструкций ( b , c ). b Структура P2A-связанной конструкции, кодирующей цепь pMHCβ и MHCα (вверху) и изображение полученного продукта pMHCII, секретируемого в супернатант клеточной культуры (внизу). c Конструкции с одиночной цепью pMHCβ или MHCα, которые были последовательно трансдуцированы в клетки CHO для получения полученных гетеродимеров pMHCII αβ (внизу)
Рис.
2 Ключевые соединительные, линкерные и мотивные последовательности для захваченного cys pMHCII человека и pMHCII мыши на основе mKIH. a Ключевые аминокислотные последовательности молекул pMHCII человека, кодирующие цис-ловушку IGRP 13–25 / DRA1 * 0101 / DRB1 * 0301 pMHCII, гетеродимеризованную через лейциновые молнии c-jun / c-fos (также называемые «обычными») . «…» Используется для обозначения того, что соответствующие промежуточные аминокислотные последовательности не показаны, поскольку они общедоступны. Остатки, выделенные красным, являются мутированными, и исходный остаток и его положение указаны непосредственно ниже. b Ключевые аминокислотные последовательности молекулы pMHCII мыши, кодирующей BDC2.5mi / IAα d / IAβ g7 , гетеродимеризованные с использованием карбоксиконцевого мышиного IgG1-Fc на основе KIH
Рис. 3Ключевые соединения, линкер и мотив последовательности для pMHCII мыши на основе hKIH и пустой pMHCII на основе hKIH человека. a Ключевые аминокислотные последовательности молекулы pMHCII мыши, кодирующей BDC2.5mi / IAα d / IAβ g7 , гетеродимеризованные с использованием карбоксиконцевого человеческого IgG1-Fc на основе KIH. b Ключевые аминокислотные последовательности для «пустых» человеческих молекул MHCII, кодирующих DRA * 0101 MHCα и DRB1, DRB3, DRB4 или DRB5 MHCβ цепи, гетеродимеризованные с использованием карбоксиконцевого человеческого IgG1-Fc на основе KIH
Рис. 4 Карикатуры, изображающие структура основанных на KIH конструкций pMHCII или специфических доменов. Слева: первичная структура гетеродимера pMHCII на основе Cys-захваченного KIH. Вверху справа: вторичная структура пептид-связывающего домена, нагруженного пептидом, связанным с молекулой MHCII в определенном регистре через дисульфидный мостик между карбоксиконцевым концом пептида и комплементарным Cys на α-цепи MHCII.
Внизу справа: предсказанная четвертичная структура части KIH Fc конструкций на основе KIH и ключевые аминокислотные замены, которые были использованы для стимулирования гетеродимеризации на основе KIH. на основе pMHCII имеют переменную стабильность
Было показано, что эпитоп является основным стабилизатором растворимых гетеродимеров pMHCII 10,11 . Связывание пептидов с высоким сродством поддерживает более высокую стабильность гетеродимера, чем пептиды, связывающиеся с низким сродством.Однако внутренние молекулярные свойства аллельных молекул MHCII также играют важную роль в определении стабильности pMHCII, независимо от пептида 12,13 . В результате, в то время как некоторые молекулы pMHCII мигрируют как отдельные крупные молекулярные частицы в неденатурирующем SDS-PAGE, большинство других молекул расплавляются в отдельные α- и β-цепи (рис. 5a) и экспрессируются с низкими выходами (таблица 1).
Рис. 5 Стабилизация гетеродимеров pMHCII путем введения Cys-ловушек пептид-цепь MHCα. a SDS-PAGE для различных гетеродимеров pMHCII на основе c-jun / c-fos, несущих или лишенных Cys-ловушек (СТ), в нативных и денатурирующих условиях. 1: BDC2.5mi / IA g7 ; 2: ИГРП 13–25 / DR3; 3: PPI (76–90) (88S) / DR4; 4: ИГРП 23–35 / DR4; 5: Topo 722–736 / IAb; 6: ApoB 3501–3516 / IA b ; 7: DSG3 301–315 / IA b . MW, маркеры молекулярной массы. За исключением ApoB 3501–3516 / IA b , все другие показанные гетеродимеры pMHCII частично или полностью нестабильны в отношении SDS.Электрофоретическое поведение различных pMHC, показанных здесь, соответствовало таковым, наблюдаемым с более ранними препаратами тех же белков, которые ранее запускались в отдельных гелях по крайней мере один раз. Они были повторно экспрессированы, повторно очищены и повторно запущены вместе, чтобы получить эту цифру.
b Влияние Cys-захвата на SDS-стабильность гетеродимеров pMHCII. Данные соответствуют 1: IGRP 13–25 / DR3-non-CT; 2: ИГРП 13–25 / DR3-CT; 3: IGRP 23–35 / DR4-non-CT; 4: ИГРП 23–35 / DR4-CT; 5: PPI 76–90 (88S) / DR4-non-CT; и 6: Glia 62–72 / DQ2-CT. c pMHCII тетрамер / CD4 точечные диаграммы FACS для клеток Jurkat, экспрессирующих человеческий CD4 и IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR (вверху) или мышиный CD4 и BDC2.5mi / IA g7 -специфический TCR (внизу ) окрашены не-CT (слева) или CT (справа) тетрамером IGRP 13–25 / DR3. Показанные образцы окрашивания являются репрезентативными, по крайней мере, для двух независимых экспериментов.
Cys-захваченные гетеродимеры pMHCII увеличивают стабильность pMHC
. MHCII (здесь также называемые « обычные ») путем введения цистеинов в соответствующие положения в пептиде и α-цепи MHCII для закрепления пептида на MHC в предпочтительном регистре связывания 14,15 (в данном документе называемых цис-захватом КТ)).Мы отмечаем, что наши предыдущие попытки решить эту проблему путем введения искусственных дисульфидных связей на или рядом с застежкой-молнией c-jun / c-fos в плохо экспрессирующие конструкции pMHCII были безуспешными. Сначала мы сосредоточились на связанном с диабетом 1 типа (T1D) комплексе IGRP 13–25 / DRB1 * 0301 / DRA1 * 0101 (Таблица 1). Мы заменили C-концевой фенилаланин в IGRP 13–25 и проксимальный серин в α цепи MHCII на цистеины (рис. 2–4). Это привело к стабильности SDS (рис. 5b) без какой-либо заметной потери эффективности связывания родственных Т-клеток, как было измерено с использованием тетрамеров pMHC и линии клеток Jurkat, трансдуцированных CD4 / TCR человека (рис.5в). Аналогичные результаты были получены с другими молекулами pHLA, такими как IGRP 23–35 / DRB1 * 0401 / DRA1 * 0101 (рис. 5б). Использование цис-ловушки также позволило получить молекулы HLA, которые гораздо труднее экспрессировать, такие как HLA-DQB1 * 0201 / DQA1 * 0501, отображающие остатки глиадина 62–72 (Таблица 1 и Рис.
5b). Cys-захват, однако, увеличивал выход продукции для некоторых, но не для всех pMHC (например, IGRP 13–25 / DRB1 * 0301 / DRA1 * 0101) (Таблица 1). Более того, цис-захват не может быть принят всеми pMHCII, потому что введение искусственных цистеинов в пептид может в некоторых случаях нарушать связывание и / или активацию Т-клеток, а также потому, что эпитопы, которые уже содержат встречающиеся в природе цистеины в своей последовательности, не подходят для этот подход.
Конструкция pMHCII на основе ручки в отверстие
Для устранения этого и других ограничений текущих стратегий производства pMHCII, включая нестабильность гетеродимеров, дискретные выходы продукции и отсутствие эффективных и масштабируемых схем очистки, широко применимых к любому типу pMHC ( для использования на людях in vivo), мы исследовали возможность использования стратегии гетеродимеризации на основе «выступа в отверстие» (KIH) -IgG. Введение дополнительных аминокислотных замен в домен Ch4 области Fc человеческого IgG1 (или других подтипов IgG) приводит к образованию двух разных молекул Fc (выступ и отверстие) с благоприятной гетеродимеризацией и неблагоприятным потенциалом гомодимеризации 8,9 .Мы пришли к выводу, что, в отличие от димеризации pMHC на основе Fc-слияния, которая генерирует большие Ig-подобные молекулярные структуры, в которых образование и стабильность αβ-гетеродимера по-прежнему требуют использования лейциновых застежек и регулируются теми же принципами, которые контролируют сборку не-Fc -fused, c-jun / c-fos pMHCIIs 16,17,18,19 , основанная на KIH гетеродимеризация pMHCII потенциально может сделать pMHCII внутренне более стабильными с относительно небольшим увеличением общей молекулярной массы.
Мы связали цепь мыши IAα d с модифицированной областью Fc человеческого IgG1, чтобы вести себя как выступ (как с мотивом c-fos, так и без него), и соответствующую цепь IAβ g7 (с и без c-fos). -jun motif) к Fc-области человеческого IgG1, модифицированной так, чтобы вести себя как дыра (фиг.
3а и 6а, б). В наши первоначальные разработки мы также включили сайт биотинилирования BirA, 6-кратные гистидиновые и двойные стрептококковые метки и цистеин на С-конце выступа, создавая «выступ», который больше его «дырочного» аналога. Как линии клеток с лейцином, так и без него, экспрессировали трансгенную РНК, что подтверждается экспрессией EGFP (рис. 6c, слева), но только последний секретировал G-связывающий белок в супернатанте (рис. 6c, справа). ), которая в нативном SDS-PAGE показывалась как одна полоса (рис.6d, левая панель), и как две отдельные полосы с разной молекулярной массой, как и ожидалось, но с одинаковой интенсивностью при денатурирующем SDS-PAGE (рис. 6d, правая панель), что предполагает стехиометрию ~ 1: 1. KIH-версия этого pMHCII экспрессировалась в> 4 раза выше, чем его аналог, не основанный на KIH (Таблица 1). Эти молекулы сворачиваются соответствующим образом, потому что тетрамеры pMHCII, генерируемые с помощью этих мономеров pMHCII на основе KIH, окрашивали Т-клетки селезенки CD4 + трансгенной мыши, экспрессирующие BDC2.5mi-специфический Т-клеточный рецептор (TCR), по существу, как его застегнутый на молнии, не-KIH аналог (рис.6д).
Использование застежки-молнии c-jun / c-fos в pMHCII на основе KIH несовместимо с экспрессией. a , b Мультфильмы, показывающие структуру двух типов протестированных здесь конструкций KIH. c (слева). Экспрессия eGFP в клеточных линиях CHO-S, трансдуцированных лентивирусами, кодирующими конструкции, изображенные в A (вверху) и B (внизу), что указывает на адекватную транскрипцию и трансляцию конструкции. c (справа), профили FPLC элюирования pMHC класса II из колонок со стреп-тактином, загруженных супернатантами от клеток CHO, экспрессирующих конструкции в A (вверху) или B (внизу). d Влияние KIH на стабильность SDS репрезентативного гетеродимера pMHCII (из по меньшей мере 10 различных pMHC на основе KIH) в отсутствие захвата Cys.
Данные соответствуют BDC2.5mi / IA g7 на базе c-jun / c-fos («conv», левая полоса) и BDC2.5mi / IA g7 на базе KIH (правая полоса). βМЕ, бета-меркаптоэтанол. e Типичные точечные диаграммы FACS тетрамер pMHCII / eGFP (TCR) для BDC2.5-TCR-трансгенных CD4 + Т-клеток, окрашенных c-jun / c-fos- (‘conv’, слева) или на основе KIH BDC2.5mi / IA g7 тетрамеры (справа). Показанные паттерны окрашивания являются репрезентативными, по крайней мере, для двух независимых экспериментов.
Свойства передачи сигналов рецепторами pMHCII на основе hIgG1 KIH
При системной доставке НЧ, покрытые рМНСII (pMHC-NP), имеющей отношение к аутоиммунным заболеваниям, могут репрограммировать (и расширять) аутоантиген. -опытные эффекторные Т-клетки / Т-клетки памяти в родственные Т-регуляторные клетки 1-го типа (TR1), приводящие к обращению вспять различных аутоиммунных заболеваний 2,5 . Биологическая эффективность этих соединений (образование клеток TR1 in vivo) является функцией валентности pMHC на поверхности NP и может быть измерена in vitro с использованием линий репортерных клеток 4 .
Мы соединили эти молекулы с НЧ, функционализированными малеимидом, через их С-концевой свободный цистеин, как описано в ссылке. 4 . Как показано на фиг. 7а, большая часть pMHC в препаратах оставалась связанной с NP при электрофорезе в SDS-PAGE в нативных условиях, но высвобождалась (в виде конъюгатов PEG-pMHC, не содержащих NP) в денатурирующих условиях. Количественная оценка валентностей pMHC этих соединений показала, что, как правило, эти мономерные структуры pMHC на основе KIH на ~ 50% больше покрывают при более низких валентностях (на ~ 20% меньше), чем их обычные аналоги, не основанные на KIH (45 ± 2.8 против 36 ± 2,5; n = 4 и 5 соответственно).
Рис. 7 Биологическая активность НЧ, демонстрирующих KIH- по сравнению с pMHCII на основе c-jun / c-fos.
a Нативный (слева) и денатурирующий (справа) SDS-PAGE для НЧ, покрытых репрезентативной молекулой pMHCII на основе KIH. PFM обозначает NP оксида железа. MW: маркеры молекулярной массы; 1: 2 мкг мономеров BDC2.5mi / IA g7 на основе KIH; 2: 2,2 мкл PFM, покрытого мономерами BDC2.5mi / IA g7 на основе KIH; 3: 1,1 мкл PFM, покрытого BDC2 на основе KIH.5mi / IA g7 мономеры; 4: 2 мкг мономеров BDC2.5mi / IA g7 на основе KIH; 5: 2,2 мкл PFM, покрытого мономерами BDC2.5mi / IA g7 на основе KIH; 6: 1,1 мкл PFM, покрытого мономерами BDC2.5mi / IA g7 на основе KIH. Электрофоретическое поведение соединения pMHCII-NP на основе KIH, показанное здесь, является типичным для по меньшей мере 10 различных препаратов pMHCII-NP, полученных с использованием pMHCII на основе KIH. b Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми c-jun / c-fos- («conv») или BDC2 на основе KIH.5mi / IA g7 мономеров (нормализованных к мономерам, индуцированным растворимыми анти-CD3ε mAb) на клетках Jurkat, коэкспрессирующих мышиный CD4, BDC2.5 mi / IA g7 -специфический TCR и репортер люциферазы, управляемый NFAT. Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. c Процент BDC2.5mi / IA g7 тетрамер-положительных CD4 + Т-лимфоцитов в крови, селезенке, лимфатических узлах поджелудочной железы (PLN), мезентериальных лимфатических узлах (MLN) и костном мозге (BM) от мышей NOD обрабатывали (два раза в неделю в течение 5 недель) НЧ, покрытые c-jun / c-fos-based (‘conv’) BDC2.5mi / IA g7 или на основе KIH BDC2.5mi / IA g7 мономеров (20 мкг pMHC / доза). Данные соответствуют средним значениям ± SEM для 4 мышей / группа. d Цитокиновый профиль тетрамера + клеток, выделенных из мышей в ( c ). Клетки Tetramer + заражали гранулами, покрытыми анти-CD3 / анти-CD28 mAb, в течение 3 дней и супернатанты анализировали на содержание цитокинов с использованием технологии Luminex.
Данные соответствуют средним значениям ± SEM клеток, выделенных от 4 мышей / группу.Значения P были рассчитаны с помощью U Mann – Whitney и считаются значимыми, если P <0,05. e Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми BDC2,5 mi / IA на основе KIH g7 pMHC, несущими KIH мыши или человека на основе Fc (нормализованная к активности, индуцированной растворимым анти-CD3ε mAb) на клетках Jurkat совместно экспрессирующие CD4 мыши, BDC2.5mi / IA g7 -специфический TCR и репортер люциферазы, управляемый NFAT. Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. Исходные данные для панелей ( b — e ) представлены в виде файла исходных данных
. Затем мы сравнили эффективность передачи сигналов TCR NPs, покрытых не-KIH-основанным BDC2.5mi / IA g7 pMHC (при 65 пМНС / NP) с наночастицами, покрытыми его аналогом на основе KIH (при 37 пМНС / NP) (рис. 7a), на клетках Jurkat, коэкспрессирующих CD4 мыши, родственный TCR и NFAT -приводимая люцифераза. Оба соединения обладали сходной эффективностью, несмотря на то, что они несли существенно разные валентности pMHC (фиг. 7b и 8a, b). Это предполагает, что эти структуры pMHC-NP на основе KIH могут работать оптимально при валентностях pMHC, падающих ниже минимальных оптимальных валентностей pMHC, определенных для общепринятой конструкции pMHC 4 .
Рис. 8 Активность передачи сигналов TCR pMHC-NP в зависимости от молярности pMHCII или числа NP. a , b Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми мономерами BDC2.5mi / IA на основе c-jun / c-fos- (‘conv’) или KIH, mAb) на клетках Jurkat, коэкспрессирующих CD4 мыши, BDC2.5mi / IA g7 -специфический TCR и репортер люциферазы, управляемый NFAT. Данные соответствуют основному рис. 7b, но нормированы на молярную концентрацию pMHCII или число NP. c , d Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми BDC2.
5mi / IA g7 pMHCII на основе KIH, несущих KIH мыши или человека на основе Fc (нормализованная к активности, индуцированной растворимыми анти-CD3ε mAb) на Jurkat клетки, коэкспрессирующие CD4 мыши, BDC2.5mi / IA g7 -специфический TCR и репортер люциферазы, управляемый NFAT. Данные соответствуют основному рис. 7e, но нормированы на молярную концентрацию pMHCII или число NP. e , f Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми c-jun / c-fos-based («conv»), Cys-захваченным IGRP 13–25 / DR3 pMHCs vs.НЧ, покрытые IGRP на основе KIH без Cys 13–25 / DR3, покрытые с тремя различными валентностями на клетках Jurkat, коэкспрессирующих человеческий CD4, IGRP 13–25 / DR3-специфичный TCR и управляемый NFAT люциферазный репортер. Данные соответствуют основному рис. 9d, но нормированы на молярную концентрацию pMHCII или число NP. г , ч Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми мономерами IGRP на основе c-jun / c-fos / Cys-ловушками или KIH / Cys-ловушками 13–25 / DR3 мономеров vs.их аналоги, не захваченные Cys, на клетках Jurkat, коэкспрессирующих человеческий CD4, IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR и управляемый NFAT репортер люциферазы. Данные соответствуют основному рис. 9e, но нормированы на молярную концентрацию pMHCII или число NP. Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных
Биологическая активность in vivo pMHCII-NP на основе hIgG1
Показав, что pMHC-NP, полученные с использованием pMHC на основе KIH, обладают адекватной TCR-связывающей и сигнальной активностью, мы попытались подтвердить что эти соединения могут также запускать образование и разрастание родственных TR1 клеток in vivo, как и в случае соединений, полученных с использованием обычных pMHC.Как показано на фиг. 7c, соединения pMHCII-NP на основе KIH запускали образование и размножение аналогичных количеств родственных (тетрамер + ) TR1 клеток, как их аналоги, не основанные на KIH.
Кроме того, родственные (тетрамер + ) CD4 + Т-клетки, размножающиеся in vivo в ответ на оба типа соединений, секретировали TR1-релевантные цитокины при стимуляции анти-CD3 и анти-CD28 mAb ex vivo по сравнению с их тетрамером — CD4 + Т-клетки (рис. 7г). Таким образом, эти гетеродимеры pMHC на основе KIH без застежки-молнии обладают аналогичной биологической активностью, чем обычные pMHC с застежкой-молнией.
Биологические свойства in vitro pMHCII на основе mIgG1 KIH
Потенциал гетеродимеризации структуры KIH на основе IgG1 мыши ранее не описывался. Таким образом, мы исследовали возможность создания гетеродимеров BDC2.5-I-Aβ g7 -Hole / I-Aα d -Knob, в которых knob-Fc и hole-Fc происходят из последовательности mIgG1-Fc (mKnob и mHole соответственно). Такой подход с мышиной KIH поможет снизить нежелательную иммуногенность этих соединений, используемых для экспериментов in vivo на мышах.С этой целью мы идентифицировали мышиные остатки, которые могут генерировать функциональные молекулы mKnob и mHole после модификации (рис. 2b). Структуры полос молекул очищенного белка G в денатурирующих гелях SDS-PAGE были по существу идентичны тем, которые наблюдались для их аналогов на основе hIgG1 KIH. Кроме того, НЧ, покрытые этими молекулами, имели количественно сходные свойства передачи сигналов антиген-рецептор, как НЧ, покрытые их аналогами на основе hIgG1 KIH (фиг. 7e и 8c, d).
Производство hIgG1 на основе KIH человека pMHCII
Далее мы спросили, можно ли использовать эту стратегию KIH для стабилизации взаимодействий более слабых пептидов: MHC, таких как IGRP 13–25 / DRB1 * 0301 / DRA1 * 0101.Как и в случае застегнутых на молнию BDC2.5-I-Aβ g7 -Hole / I-Aα d -Гетеродимеры-ручки, застегиваемые на молнию IGRP 13–25 -DRB1 * 0301-Hole / DRA1 * 0101-Knob гетеродимеры могут не экспрессироваться, но удаление застежки-молнии c-jun / c-fos из молекулы привело к эффективной экспрессии на уровнях, значительно превышающих уровни, полученные из клеток CHO-S, секретирующих IGRP, не основанный на KIH 13–25 -DRB1 * 0301 / DRA1 * 0101 гетеродимеры (таблица 1).
Тетрамеры pMHCII, полученные с мономерами на основе KIH, окрашивали родственные Т-клетки, по существу, как тетрамеры, полученные с использованием мономеров pMHCII с лейциновой застежкой (рис.9а). Добавление мутаций, фиксирующих регистр цис-ловушки, в пептиде и α-цепи MHCII этих комплексов (рис. 2а и 4) дополнительно увеличивало выходы экспрессии (таблица 1). Эта молекулярная модификация не нарушала TCR-связывающие свойства этих молекул, потому что окрашивание родственных TCR-экспрессирующих клеток Jurkat тетрамером, полученным с помощью конструкций на основе CT и не-CT KIH, было по существу эквивалентным (фиг. 9b). Кроме того, эти молекулы одинаково количественно реагировали с mAb против DR (клон L243), которое связывается с конформационным эпитопом на цепи HLA-DRα, что требует правильного фолдинга гетеродимера αβ 20,21 (рис.9в).
KIH Fc обеспечивает повышенную биологическую активность и стабилизирует «пустой» MHCII. a Типичные точечные диаграммы FACS тетрамера pMHCII / eGFP (TCR) для клеток Jurkat, экспрессирующих hCD4 и IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR или mCD4 и BDC2.5mi / IA g7 -специфический TCR (отрицательный контроль ). b Репрезентативные точечные диаграммы тетрамер pMHCII / eGFP (TCR) для клеток Jurkat в A, но окрашенных тетрамерами на основе KIH, не имеющими (слева) или несущими CT (справа). c Введение CT в pMHCII человека на основе KIH не изменяет их реактивность с MHCII конформационным эпитоп-специфическим mAb, как измерено с помощью ELISA. Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. d Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми c-jun / c-fos на основе (‘conv’), CT IGRP 13–25 / DR3 pMHCs по сравнению с НЧ, покрытыми не-CT, IGRP на основе KIH 13 –25 / DR3, покрытые с тремя различными валентностями на клетках Jurkat, коэкспрессирующих hCD4, IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR и NFAT-люциферазу.
Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. e Активность люциферазы, индуцированная НЧ, покрытыми мономерами на основе c-jun / c-fos / CT (‘conv’) или KIH / CT IGRP 13–25 / DR3 по сравнению с их не-CT-аналогами на Jurkat клетки, коэкспрессирующие hCD4, IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR и NFAT-люциферазу. Данные соответствуют среднему значению ± стандартная ошибка среднего для трех повторов. f SDS-PAGE мономеров CT с лейциновой молнией (1) или на основе KIH (2) на основе глиадина 62–72 / DQB1 * 0201 / DQA1 * 0501. βМЕ, бета-меркаптоэтанол. г Типичные точечные диаграммы тетрамера pMHCII / CD4 для клеток Jurkat, экспрессирующих hCD4 и IGRP 13–25 / DR3 (вверху) или mCD4 и BDC2.5mi / IA g7 -специфического TCR (внизу), окрашенного Тетрамер на основе c-jun / c-fos (‘conv’) IGRP 13–25 / DR3 (связанный с пептидом; слева) или тетрамеры, полученные с использованием нагруженных пептидом пустых мономеров DR3-KIH (справа). ч Репрезентативные графики тетрамера pMHCII / eGFP (TCR) для клеток Jurkat, экспрессирующих hCD4 и PDC-E2 122–135 / DRB4-специфический TCR (вверху слева), PDC-E2 249-262 / DRB4-специфический TCR (вверху справа) или IGRP 13–25 / DR3-специфический TCR (внизу; отрицательный контроль). i Амплификация сигнала связывания тетрамера на основе KIH с использованием анти-hFc. В PBMC человека (10 6 ) добавляли клетки из hIGRP 13–25 / DR3-специфического Т-клеточного клона (вверху) или нерелевантного (PPI (76-90 (88S) / DR4-специфического) клон (10 4 ) (внизу). Клетки обрабатывали дазатинибом (справа) или оставляли необработанными (слева), а затем окрашивали PE-меченными тетрамерами и PE-меченными анти-IgG. Значения на графиках соответствуют среднему геометрическому интенсивность флуоресценции для окрашивания тетрамера pMHC.Картины окрашивания, показанные в ( a ), ( b ), ( g ) и ( h ), представляют по меньшей мере два независимых эксперимента.
Исходные данные для панелей ( c — e ) представлены в виде файла исходных данных
Cys-ловушка увеличивает эффективность pMHCII на основе KIH
Приведенные выше данные предполагают введение цис-ловушки между IGRP 13 –25 и DR3 увеличивает структурную стабильность гетеродимера и выход продукции pMHC, не мешая связыванию TCR.Однако, когда мы сравнили in vitro эффективность НП, покрытых цис-ловушкой версией человеческого IGRP, не основанного на KIH, 13–25 / DRB1 * 0301-DRA * 0101 pMHC (при 63 pMHC / NP) с этим НЧ, покрытых тремя препаратами IGRP на основе KIH без цис-ловушек 13-25 / DRB1 * 0301-DRA * 0101 (46, 29 и 27 пМНС / НЧ), последние три вызывали значительно сниженный люциферазный ответ от родственные клетки Jurkat (рис. 8e, f и 9d). Следующие три линии доказательств предполагают возможность того, что эти различия могут быть объяснены присутствием цис-ловушки в pMHC, не основанном на KIH, который использовался в качестве контроля.Во-первых, препараты НЧ, демонстрирующие низкую валентность основанного на KIH BDC2.5mi / IA g7 pMHC, действовали по существу так же, как НЧ, демонстрируя высокую валентность своего аналога на молнии, не основанного на KIH (рис. 2b и 8a, b), что позволяет предположить, PMHC на основе KIH поддерживают усиленную передачу сигналов TCR. Во-вторых, все три препарата НЧ, демонстрирующие IGRP на основе KIH без цис-ловушек 13–25 / DRB1 * 0301-DRA * 0101, также выполнялись аналогичным образом в этом анализе, независимо от валентности (от 27–46 пМНС / NP), что согласуется с гипотетической повышенной эффективностью дизайнов на основе KIH.
Чтобы исследовать эту гипотезу, мы сравнили биологическую активность НЧ, покрытых цис-ловушками и не-цис-ловушками версиями обоих типов конструкций pMHC (не на основе KIH и на основе KIH). Неожиданно для обоих типов конструкций включение цис-ловушки увеличило эффективность (фиг. 8g, h и 9e). Действительно, наночастицы, покрытые конструкцией на основе цис-ловушек на основе KIH, имели аналогичную функцию, как наночастицы, покрытые конструкцией на основе цис-ловушек, не основанной на KIH, несмотря на значительные различия в валентности pMHC (56 и 63 для цис-ловушек и не цис-ловушек).
захваченные pMHC не на основе KIH, соответственно, vs.25 и 26 для pMHC на основе цис-ловушек и без цис-ловушек, соответственно), снова подтверждая идею о том, что использование pMHC на основе KIH на NP снижает порог валентности pMHC, необходимый для биологической активности.
В совокупности эти неожиданные наблюдения предполагают, что пептид-связывающая щель в некоторых мономерах pMHC без захвата цис (будь то лейциновая застежка-молния (обычная) или на основе KIH) может быть занята эндогенными пептидами CHO-S, в отличие от связанных пептиды, кодируемые в конструкциях экспрессии.В качестве альтернативы этот подход создает более компактную структуру pMHC, которая каким-то образом усиливает взаимодействие с родственными TCR. Повышенная биологическая эффективность дизайна на основе KIH, особенно в сочетании с пептидным цис-захватом, предполагает возможность того, что половина KIH этих молекул pMHC класса II может иметь аллостерический эффект на интерфейс pMHC таким образом, чтобы улучшить взаимодействие TCR. С другой стороны, этот эффект может быть связан с особой топологией, принятой этими молекулами на основе KIH на НЧ.Радиусы pMHC на основе KIH на NP больше, чем у их аналогов с застежкой-молнией. Это может уменьшить возникновение потенциально деструктивных взаимодействий TCR-связывающего N-концевого домена pMHC с NP во время процесса функционализации. В этом отношении KIH-часть молекулы pMHC на основе KIH может буферизовать конформационные изменения в N-концевом домене pMHC, вызванные NP. Кроме того, дисульфидные связи, которые вводятся в эти KIH, могут способствовать гипотетической устойчивости этих молекул к аллостерическим изменениям, индуцированным соседними молекулами pMHC или самим NP.Каким бы ни было точное объяснение, на практическом уровне эти молекулярные модификации фактически изменяют минимальный оптимальный порог плотности pMHC для фармакодинамической активности in vivo; «32» минимальный оптимальный порог валентности pMHC, определенный для НЧ диаметром 20 нм, отображающих обычные pMHC, по-видимому, ниже для захваченных Cys pMHC на основе KIH 4 .
hIgG1 Стабилизация на основе KIH молекул пептид-HLA-DQ
Комплексы пептид-HLA-DQ сложно экспрессировать 22 .Как отмечалось выше, мы могли производить значительные количества глиадина с застежкой-молнией c-jun / c-fos 62–72 / DQB1 * 0201 / DQA1 * 0501 только тогда, когда пептид был захвачен цис-молекулами на молекуле MHC, хотя и с низкими выходами. (Таблица 1 и рис. 5б). Примечательно, что замена домена лейциновой застежки на KIH позволила продуцировать глиадин 62–72 / DQB1 * 0201 / DQA1 * 0501 клетками CHO-S с выходами, которые были в 15 раз выше (таблица 1 и фиг. 9f). .
Стабилизация пустых молекул MHC класса II на основе KIH
Некоторые экспериментальные подходы к картированию Т-клеточных эпитопов требуют использования обширных массивов тетрамеров pMHCII для определения реакционной способности эпитопа с помощью проточной цитометрии. 23,24,25 .В этом контексте использование молекул pMHCII, отображающих ковалентно связанные пептиды, нецелесообразно, поскольку подразумевает очистку множества различных молекул pMHCII и создание соответствующих тетрамеров, меченных флуорохромом, для каждого конкретного эпитопа. Таким образом, мы исследовали, можно ли использовать подход, основанный на KIH, для экспрессии высоких уровней pMHCII, не связанных с пептидами, из клеток CHO и можно ли использовать эти соединения для загрузки пептидов in vitro. 26,27 . Как показано в таблице 1, трансдуцированные клетки CHO-S секретировали высокие уровни четырех различных непептидно-связанных типов DRB человека, включая DRB1 * 0301 / DRA1 * 0101, DRB4 * 0101 / DRA * 0101, DRB5 * 0101 / DRA * 0101. , и DRB1 * 1501 / DRA * 0101.Важно отметить, что эти комплексы могут быть загружены пептидами in vitro и соответствующими тетрамерами, связанными с родственными Т-клетками, по существу, как их связанные с пептидами аналоги (фиг. 9g, h).
Амплификация окрашивания мультимера pMHCII на основе KIH
Описаны различные стратегии увеличения интенсивности окрашивания родственных Т-клеток с помощью меченных флуорохромом мультимеров pMHC 28 , включая использование ингибиторов киназ, образование кооперативных pMHC / TCR кластеры со сшивающими антителами 29 , а также использование каркасов, позволяющих получать мультимерные структуры более высокого порядка, такие как декстрамеры 30 .
Это особенно полезно при аутоиммунных заболеваниях, где периферические частоты аутореактивных Т-клеток и их авидность для родственных комплексов pMHC значительно ниже, чем наблюдаемые для чужеродных антиген-специфических Т-клеток, например, в контексте инфекции и аллергии. Таким образом, мы исследовали, можно ли улучшить отношение сигнал / шум при окрашивании родственных Т-клеток тетрамерами pMHCII, используя основанную на анти-hIgG амплификацию связывания тетрамера pMHCII на основе KIH. В PBMC человека вводили клональные Т-клетки IGRP 13–25 / DR3, специфичные для CD4 + , и окрашивали родственными тетрамерами pMHCII на основе KIH в присутствии или в отсутствие ингибитора протеинкиназы дазатиниба (для ингибирования подавления TCR) с последующей амплификацией анти-hIgG-PE.Как показано на фиг. 9i, анти-hIgG увеличивал среднюю интенсивность сигнала флуоресценции при окрашивании тетрамером как в присутствии, так и в отсутствие дазатиниба.
Нико Дель Моро — 2018 — Мужской лакросс
Карьерная статистика| Год | GP | GS | G | А | Очки | Выстрелы | Pct | ГБ | CT |
| 2015 | 13 | 0 | 10 | 1 | 11 | 32 | .313 | 7 | 2 |
| 2016 | 16 | 16 | 20 | 5 | 25 | 95 | ,211 | 31 | 10 |
| 2017 | 14 | 11 | 10 | 1 | 11 | 61 | .164 | 12 | 3 |
| Итого | 43 | 27 | 40 | 7 | 47 | 188 | . 213 | 50 | 15 |
Максимум карьеры
голы — 3 vs.Моравский, 2017; четыре раза, 2016
баллы — 4 у Моравии, 2016
наземные шары — 5 трижды, 2016
Основные достижения в карьере
• Начал сезон среди взрослых в качестве активного лидера Мюленберга по количеству голов и очков
2017
• Ставка на третье место с «Мулз» по голам —
.
• Шестое место в команде, набрав
очков.
• Сделал хет-трик, победив моравский футболист
.
• Дважды забил пять бросков в победе над Эльмирой
.
• Также забил два гола в матчах «Centennial Conference» против Геттисберга и Урсинуса
.
• Выбраны четыре лучших в сезоне наземных мячей vs.Франклин и Маршалл
2016
• Второй лучший бомбардир «Мулов», начавший все 16 матчей в полузащите
• Также третье место в команде по наземным мячам и принесло
потерь.
• Набрал по крайней мере одно очко в шести из восьми игр Centennial Conference
• Рекорд сезона: четыре очка при трех голах и результативная передача при победе со счетом 15: 7 в матче «Моравиан
«.
• Сделал хет-трик и пять наземных мячей против Хаверфорда,
• Также сделал хет-трик против Саскуэханны и Стоктона.
2015
• Набрано 11 очков в 13 играх, из них 7 очков в матчах CC
• Забил гол в шести из восьми матчей КК
• Забил гол и сделал передачу в команде Franklin & Marshall,
• Забил два гола в ворота Саскуэханны в своем первом матче в карьере —
• Также забил два гола, включая победный в матче против 18: 4.Столетие
• Три наземных мяча высокого сезона собраны в матче против Lycoming со счетом 15: 5.
Personal
• Трехлетний победитель и капитан команды по лакроссу в средней школе Montville
• Заслуживает почетного упоминания общегосударственного уровня с наградами первой команды всех округов и всех конференций
• Участвовал в матче всех звезд штата Нью-Джерси
• Родители Джеймс и Лизбет Дель Моро
• Родился 2 августа 1996 г.
• Двойная специализация в области делового администрирования (концентрация на маркетинге) и финансов
Д-р Мирко Моро | Стирлингский университет
Статья
Улучшает ли образование финансовое поведение? Квазиэкспериментальные свидетельства из Великобритании
Gray D, Montagnoli A & Moro M (2021) Улучшает ли образование финансовое поведение? Квазиэкспериментальные данные из Великобритании. Журнал экономического поведения и организации , 183, стр. 481-507. https://doi.org/10.1016/j.jebo.2021.01.002
Артикул
.Дата рождения и выборочное обучение: некоторые уроки образовательной реформы 1944 года в Англии и Уэльсе
Hart RA & Moro M (2020) Дата рождения и выборочное школьное обучение: некоторые уроки реформ образования 1944 года в Англии и Уэльсе. Шотландский журнал политической экономии , 67 (5), стр. 523-538. https: // doi.org / 10.1111 / sjpe.12247
Отчет об исследовании
Смертность от COVID-19 и длительный уход: сравнение в Великобритании
Белл Д., Комас-Эррера А., Хендерсон Д., Джонс С., Леммон Е., Моро М., Мерфи С., О’Рейли Д. и Патриньяни П. (2020) Смертность от COVID-19 и длительный уход: сравнение с Великобританией . LTCcovid.org. Международная сеть по политике долгосрочного ухода, CPEC-LSE. https://ltccovid.org/2020/08/28/covid-19-mortality-and-long-term-care-a-uk-comparison/
Артикул
.Дело не только в экономике Глупо! Иммиграция и субъективное благополучие в Англии
Howley P, Waqas M, Moro M, Delaney L & Heron T (2019) Дело не только в экономике Глупо! Иммиграция и субъективное благополучие в Англии. Работа, занятость и общество . https://doi.org/10.1177/0950017019866643
Артикул
.Влияние зимнего платежа за топливо на температуру и здоровье домохозяйств: исследование дизайна с разрывом регрессии
Анджелини В., Дейли М., Моро М.
, Наварро Паниагуа М., Сидман Е., Уокер И. и Велдон М. (2019) Влияние зимних топливных платежей на температуру и здоровье домашних хозяйств: исследование дизайна с разрывом регрессии. Исследования общественного здравоохранения , 7 (1).https://doi.org/10.3310/phr07010
Артикул
.Очиститель подталкивает? Этикетки политики и принятие инвестиционных решений
Lange I, Moro M & Rahman MM (2018) Более чистые подталкивания? Ярлыки политики и принятие инвестиционных решений. Energy Journal , 39 (6), стр. 27-51. https://www.iaee.org/energyjournal/article/3251; https://doi.org/10.5547/01956574.39.6.ilan
Артикул
.Цена банковских кризисов: новые доказательства из данных об удовлетворенности жизнью
Montagnoli A & Moro M (2018) Стоимость банковских кризисов: новые доказательства из данных об удовлетворенности жизнью. Kyklos , 71 (2), стр. 279-309. https://doi.org/10.1111/kykl.12170
Артикул
.Подтверждение концепции, согласно которой требование энергетической маркировки жилых помещений может побудить к модернизации
Comerford DA, Lange I & Moro M (2018) Доказательство концепции, согласно которой требование энергетической маркировки жилых помещений может побудить к модернизации. Экономика энергетики , 69, стр. 204-212. https://doi.org/10.1016/j.eneco.2017.11.013
Артикул
.Кто выиграл от введения бесплатного всеобщего среднего образования в Англии и Уэльсе?
Hart RA, Moro M & Roberts JE (2017) Кто выиграл от введения бесплатного всеобщего среднего образования в Англии и Уэльсе ?. Oxford Economic Papers , 69 (3), стр. 707-733. https://doi.org/10.1093/oep/gpw039
Газета Артикул
В гимназиях долгое время преобладали дети из среднего класса
Hart RA & Moro M (2016) В гимназиях долгое время преобладали дети из среднего класса. Разговор .
08.09.2016. https://theconversation.com/grammar-schools-have-a-long-history-of-being-dominated-by-middle-class-children-64198
Рабочий документ
Кто выиграл от введения бесплатного всеобщего среднего образования в Англии и Уэльсе?
Hart RA, Moro M & Roberts JE (2015) Кто выиграл от введения бесплатного всеобщего среднего образования в Англии и Уэльсе? .Документ для обсуждения экономики Стирлинга, 2015-02.
Артикул
.Зеленое лицемерие ?: Экологическое отношение и расходы на отопление жилых помещений
Lange I, Moro M & Traynor L (2014) Зеленое лицемерие ?: Экологическое отношение и расходы на отопление жилых помещений. Экологическая экономика , 107, стр. 76-83. https://doi.org/10.1016/j.ecolecon.2014.07.021
Артикул
.Компромисс счастья между безработицей и инфляцией
Blanchflower D, Bell D, Montagnoli A & Moro M (2014) Компромисс счастья между безработицей и инфляцией. Журнал денег, кредита и банковского дела , 46 (S2), стр. 117-141. https://doi.org/10.1111/jmcb.12154
Артикул
.Отражает ли рынок жилья культурное наследие? Пример Большого Дублина
Моро М., мэр К., Lyons S & Tol RSJ (2013) Отражает ли рынок жилья культурное наследие? Тематическое исследование Большого Дублина. Окружающая среда и планирование A , 45 (12), стр. 2884-2903. https://doi.org/10.1068/a45524
Артикул
.Измерение местных затрат на консервацию: механизм точки обеспечения для выявления готовности принять компенсацию
Буш Г., Хэнли Н., Моро М. и Рондо Д. (2013) Измерение местных затрат на сохранение: механизм точки обеспечения для выявления готовности принять компенсацию. Land Economics , 89 (3), pp. 490-513. http://le.uwpress.org/content/89/3/490.short; https://doi.org/10.3368/le.89.3.490
Артикул
.Удовлетворенность жизнью и качество воздуха в Европе
Феррейра С.
, Акай А., Бреретон Ф, Кунадо Дж., Мартинссон П., Моро М. и Нингал Т.Ф. (2013) Удовлетворенность жизнью и качество воздуха в Европе. Экологическая экономика , 88, стр. 1-10. https://doi.org/10.1016/j.ecolecon.2012.12.027
Артикул
.Доходы и предпочтения в отношении окружающей среды: данные о субъективном благополучии
Феррейра С. и Моро М. (2013) Доходы и предпочтения в отношении окружающей среды: данные о субъективном благополучии. Окружающая среда и планирование A , 45 (3), стр. 650-667. https://doi.org/10.1068/a4540
Артикул
.Расследование с использованием экспериментального метода выбора вариантов сокращения незаконной охоты на диких животных в западном Серенгети
Моро М., Фишер А., Чайковски М., Бреннан Д., Ловасса А., Найман Л.С. и Хэнли Н. (2013) Исследование с использованием метода эксперимента выбора вариантов сокращения незаконной охоты на диких животных в западном Серенгети. Письма о сохранении , 6 (1), стр.37-45. https://doi.org/10.1111/j.1755-263X.2012.00284.x
Артикул
.Построение показателей подлинных сбережений для Ирландии, 1995-2005 гг.
Ferreira S & Moro M (2011) Построение показателей истинных сбережений для Ирландии, 1995-2005 гг. Журнал экологического менеджмента , 92 (3), стр. 542-553. https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2010.09.015
Артикул
.Об использовании данных о субъективном благополучии для экологической оценки
Ferreira S & Moro M (2010) Об использовании данных о субъективном благополучии для экологической оценки. Экономика окружающей среды и ресурсов , 46 (3), стр. 249-273. https://doi.org/10.1007/s10640-009-9339-8
Артикул
.Бедные, богатые и счастливые: изучение связи между доходом и субъективным благополучием
Моро М и Ментзакис Э. (2009) Бедные, богатые и счастливые: изучение связи между доходом и субъективным благополучием.
Социально-экономический журнал , 38 (1), стр. 147-158. http://www.scopus.com/inward/record.url?partnerID=yv4JPVwI&eid=2-s2.0-57749203165 & md5 = a2
5b3d3eb4659487132a4107d2b; https://doi.org/10.1016/j.socec.2008.07.010
Артикул
.Рейтинг качества жизни на основе субъективных данных о благополучии
Moro M, Brereton F, Ferreira S & Clinch JP (2008) Ранжирование качества жизни с использованием данных о субъективном благополучии. Экологическая экономика , 65 (3), стр. 448-460. https://doi.org/10.1016/j.ecolecon.2008.01.003
Вход в класс с Альберто Брузосом Моро
Вход в класс с Альберто Брузосом Моро
Это четвертый пост из серии об использовании Radio Ambulante в классе.Читайте первый пост здесь, второй здесь, а третий здесь.
Мы поговорили с Альберто Брузосом Моро, чтобы узнать больше о том, как он использует Radio Ambulante со своими учениками.
1) Расскажите немного о классе, который вы преподаете.
SPA 307 — это языковой курс продвинутого уровня в Принстонском университете. Основная цель класса — развить и укрепить точность и беглость учащихся в письменной и устной речи по-испански, а также в их самостоятельности и владении испанским языком на продвинутом уровне.
Кроме того, курс также направлен на повышение осведомленности о социальных и идеологических ценностях, пронизывающих дискурсивные практики. Студенты учатся определять лингвистические особенности, характеризующие разные жанры, а также социальные и культурные факторы, которые помогают в интерпретации и понимании различных текстов и типов речи.
2) Когда вы в последний раз использовали Radio Ambulante в классе? Как вы использовали Radio Ambulante со своими учениками?
Мы работаем с Radio Ambulante во второй половине семестра.Сначала мы просим наших студентов послушать «El estudiante rebelde».
Мы даем им это руководство с документами и вопросами перед прослушиванием, вопросами на понимание и вопросами для анализа и обсуждения. В классе мы начинаем с упражнений на слушание, а затем обсуждаем программу и социальный контекст, разработанные в руководстве, пытаясь соотнести повествование с соответствующими вопросами, такими как образование и элитарность, система образования в Чили и США, учащийся протест и активизм и т. д.
В качестве продолжения мы даем нашим студентам список эпизодов. В парах или группах по три человека они должны выбрать одну программу и выполнить это задание на презентацию. У нас по четыре презентации на каждый раздел, так что в итоге все студенты слушают в общей сложности пять программ.
Мои ученики представили следующие серии: Los huérfanos, La sentencia, El fotógrafo, #RenunciaYa, Otro país, Postal de San Salvador и En busca de las palabras.
Radio Ambulante y el Estudiante Rebelde por Alberto Bruzos Moro
Загрузить файл в режиме демонстрации слайдов
3) Исходя из вашего опыта, , какую пользу эти истории дают в вашей учебной программе?
Я считаю, что Radio Ambulante — отличный ресурс для практики понимания речи на слух, навыка, которому учителя и учебные материалы не уделяют должного внимания.Более того, разнообразие голосов и акцентов идеально подходит для представления социолингвистической сложности испанского языка и развития у учащихся критического понимания культурных, политических и социальных аспектов языковых вариаций. Наконец, ряд тем, освещаемых Radio Ambulante, позволяет подойти к обучению испанскому языку через социальную справедливость.
4) Какова была реакция ваших учеников на использование Radio Ambulante в классе?
Мои ученики были очень заняты.Они смогли подробно понять программы, хотя в некоторых случаях им нужно было использовать стенограмму — я сказал им, что они должны послушать подкаст один раз без транскрипции, а затем, если они не могли понять какую-то часть, они могли использовать стенограмму.
и переиграть всю программу или те фрагменты, в которых возникли серьезные затруднения.
Radio Ambulante идеально подходил для того, чтобы пробудить любопытство моих студентов. Разнообразие вопросов и точек зрения позволило провести целенаправленное исследование более широкого социального, исторического и политического контекста каждой программы.В целом, мои студенты оценили возможность работать с аутентичными материалами, т.е.предназначенными для носителей языка и свободными от стереотипов и заблуждений, которые слишком часто встречаются в коммерческих учебниках. Они чувствовали себя воодушевленными контентом, который бросал вызов их способности понимать разговорный язык, давал им обширный набор содержательной лексики и стимулировал их критическое мышление и их свободу действий для социальных изменений.
Необыкновенное приключение среди гималайских пиков: рассказ Симоне Моро — Леонардо
На Европейском форуме винтокрылых машин в этом году всемирно известный альпинист Симоне Моро делится своей невероятной историей, в которой описывает свой опыт совместного пилотирования вертолета AW119Kx во время демонстрационный тур , который проходил в Непале в марте прошлого года, среди вершин Гималаев.Необыкновенное приключение, которое также продемонстрировало отличные характеристики Леонардо AW119Kx , который также использовался для различных спасательных операций « на большой высоте » вокруг базовых лагерей Эвереста.
Симоне Моро , единственный альпинист в мире, который достиг четырех вершин высотой 8000 метров за зимний сезон, вернулся к нам, чтобы рассказать о своем вертолетном приключении на гималайских вершинах . В этом интервью он объясняет личные причины, которые побудили его реализовать идею демонстрационного тура по Непалу с Leonardo ’s AW119Kx , с таким энтузиазмом и решимостью.
Великолепный альпинистский опыт и сочетание двух ваших увлечений: горы и вертолеты. Был ли демо-тур по Непалу с нашим AW119Kx мечтой сбыться?
Мечтам нужно следовать, и вы должны с чего-то начинать, если хотите их достичь. Я начал заниматься альпинизмом 35 лет назад. Этот опыт был долгим, захватывающим и подарил мне счастливую и насыщенную жизнь.Когда я приближался к вертолетам, это была очень крутая тропа, полная проблем. Но я люблю сложные вещи, и когда я летаю на AW119Kx в Nepal , пилотируя этот вертолет вместе с Captain Ezio Oliva , я почувствовал себя «на высоте». Я восхищался пейзажем и смотрел вниз …
Как началось ваше увлечение вертолетами?
Это результат благодарности самолету, который помог мне спасти мою жизнь в Рождество 1997 года, когда я был единственным выжившим в трагедии на Аннапурне в Гималаях .Я пообещал отплатить за услугу, и решение, которое я нашел, заключалось в том, чтобы сделать спасательные операции на вертолете моей второй жизнью и профессией — полет над горами, на которые я взбираюсь. Пилотирование дает мне чувство свободы, а вертолет в таких «экстремальных» местах, как Непал , по существу спасает жизни и помогает стране, которая сталкивается с большими трудностями.
Был ли какой-то эпизод в вашем альпинистском опыте, который вдохновил вас бросить вызов этому испытанию для спасения на большой высоте?
Помимо трагедии 1997 года, я позже выполнил спасательную операцию пешком, с ледорубами и кошками, рискуя собственной жизнью, чтобы спасти жизнь мальчика, которого я даже не знал, на высоте более 26200 ноги без кислорода.За это предприятие я получил золотую медаль за гражданскую доблесть от президента Итальянской Республики Чампи .
Это было в 2001 году, и с тех пор все изменилось. Многие спасательные работы теперь возможны благодаря новым самолетам и людям, которые знают, как поставить себя на карту, полностью используя свои навыки и знания.
Как наши AW119Kx работали?
Чрезвычайно хорошо, и эти тесты могут быть дополнительной возможностью для развития.Kx — это вертолет с характеристиками с дополнительным запасом улучшений, которые могут сделать его эталоном в своем классе. Теперь, воодушевленные превосходными характеристиками вертолета Nepal , мы можем увидеть, как сделать этот вертолет привлекательным также для рынка авиационных работ.
Горные страны мира бесчисленны и во многих случаях развиваются, богаты водой и природными ресурсами. В ближайшие десятилетия возникнет острая потребность в вертолетах и средствах для оказания помощи этому населению.Мы должны быть готовы к работе с идеальной машиной. AW119Kx может быть улучшен, и он сосредоточен на этом запасе, который нам нужен, чтобы изменить ситуацию.
С какими испытаниями вы столкнулись во время экскурсии?
Полеты с Эцио были для меня большим опытом. Миссии на высоте 24000 футов в ISA + 10, приземления на высоте почти 19000 футов в ISA + 15, парение с вращением на 360 ° с левой педалью на высоте 16568 футов , выключение и перезапуск двигателя на базе Эверест Лагерь на высоте 17 388 футов … Транспортировка грузов в различные базовые лагеря на большой высоте и эвакуация альпинистов с высоты и погодных условий, которые можно было считать менее чем благоприятными, были действительно сложными испытаниями.Эта миссия была захватывающим приключением, порадовавшим не только нас, но и многих операторов. Это подтверждает, что, когда я поделился этим проектом с Леонардо в 2014 , я был прав.
Я итальянец: этот вертолет и его производитель, Leonardo , представляют мою страну, которая при желании не имеет себе равных. Эти тесты — лишнее тому подтверждение. Мы можем и должны этим гордиться.
Какой момент был самым волнующим?
Увидеть землю Kx в Катманду и оказаться на площадке для подачи сигналов посадки было освобождающим моментом, который заставил меня вспомнить, как далеко мы продвинулись.Полет на той же высоте, что и гигантский реактивный самолет, близко к пикам 23 622 фута и пролет мимо флангов Everest на AW119Kx были напряженными моментами, которые доставили мне удовлетворение и гордость. Я хочу поблагодарить тех, кто на протяжении многих лет не переставал доверять мне. То, что было достигнуто с помощью этих тестов, теперь должно стать отправной точкой. Лучшее еще впереди…
Авиабилеты Австралия | Найдите и найдите авиабилет с Traveloka
Traveloka — одна из ведущих платформ для бронирования авиабилетов и отелей в Юго-Восточной Азии, предлагающая более 100 000 маршрутов полета и более 100 000 отелей по всей карте.Traveloka предлагает вам лучшее из обоих услуг, прямо у вас под рукой. Расположенный в самом сердце Индонезии с филиалами в ведущих странах Юго-Восточной Азии, включая Малайзию, Вьетнам, Таиланд, Филиппины и Сингапур, это центр, где вы найдете множество авиабилетов, от самых дешевых рейсов до различных вариантов авиакомпаний со всего мира. мир.
Находясь в индустрии туризма с 2012 года, Traveloka заняла прочную позицию на рынке и продолжает расширять свое присутствие, предоставляя вам лучшие услуги для бронирования авиабилетов и отелей.Эта постоянно растущая компания постоянно находит новые способы упростить процесс поиска и бронирования рейсов.
Traveloka предлагает авиабилеты от известных компаний как внутренних, так и международных авиакомпаний, включая AirAsia, Malindo Air, Malaysia Airlines, Firefly, Scoot, Thai Airasia X, Jetstar, KLM, Thai Lion Air, Vietnam Airlines, VietJet, Thai Airways, Cebu Pacific.
, Singapore Airlines, Xpress Air, Cathay Pacific, China Southern Airlines, Nok Air, Kal Star Aviation, Xiamen Airlines, Philippines Airlines, Emirates, China Airlines, Qatar Airways, Srilankan AIrlines, Etihad Airways, Royal Brunei, Saudi Arabian Airlines, Garuda Indonesia , Bangkok Airways, All Nippon Airways, China Eastern Airlines, Oman Air, Trigana Air, Eva Air, Air China, Korean Air, Jet Airways, Turkish Airlines, Qantas Airlines, Hong Kong Airlines, Lufthansa, American Airlines, Air France, Asiana Airlines , United Airlines, VIrgin Australia, Delta Airlines и Finnair.
Список можно продолжать и продолжать — то же самое можно сказать и о количестве транзакций, которые мы наблюдали на протяжении многих лет через нашу систему бронирования авиабилетов как в настольном, так и в мобильном приложении. На протяжении многих лет мы неуклонно росли благодаря вашему доверию к нашим услугам. Наша цель — не только предложить вам дешевые авиабилеты, но и обеспечить лучший сервис на протяжении всего периода бронирования авиабилетов.
Что делает Traveloka на карте? Сложные функции, которые Traveloka постоянно совершенствует, чтобы обеспечить бесперебойную работу поиска и бронирования рейсов.Мобильное приложение Traveloka позволяет выполнять поиск по нескольким авиакомпаниям одновременно. Мы предлагаем удобную систему навигации, которая позволит вам увидеть всю необходимую информацию и цены на авиабилеты в выбранном вами направлении. Наш сложный алгоритм поможет вам практически мгновенно найти нужную авиакомпанию.
Теперь вы также можете улучшить свои впечатления от полета, воспользовавшись услугой трансфера из аэропорта от Traveloka. Благодаря множеству вариантов транспорта, которые соответствуют вашим потребностям, закажите трансфер из аэропорта и избавьтесь от лишних хлопот.
Помимо интересных функций, которые наше мобильное приложение предлагает для удобства пользователей, Traveloka Malaysia также предлагает удивительные рекламные акции и предложения дешевых авиабилетов, которые удовлетворят все ваши потребности в путешествии.
Различные рекламные акции, которые мы предлагаем нашим авиакомпаниям-партнерам, предоставляют вам больше возможностей легко путешествовать, когда вам нужно, как внутри страны, так и за рубежом. Traveloka не перестает предлагать вам лучшие предложения авиабилетов. Наша цель — сделать ваше бронирование авиабилетов приятным — начинает обретать форму.Следите за новостями в ближайшее время!
Поиск рейсов с Traveloka стал проще
Вам всегда трудно забронировать авиабилеты? Где у вас есть авиакомпания, которая вам нужна, но процесс слишком хлопотный или сложный? Неужели трудности, с которыми вы сталкиваетесь, просто заставляют вас вообще отказаться от поиска? Traveloka стремится предоставить вам лучший сервис по поиску и бронированию авиабилетов. На протяжении многих лет Traveloka делает все возможное, чтобы улучшить нашу систему для настольных компьютеров и мобильных устройств, чтобы предоставить вам большое удобство при поиске либо международных авиабилетов, либо дешевых авиабилетов внутри страны.Мы внедрили более быстрый и подробный алгоритм поиска, чтобы вы могли получить наилучшие результаты.
Для нашего мобильного приложения мы сохранили удобный подход для пользы наших пользователей — да, вас, убедившись, что дизайн нашего приложения не только приятен визуально, но и функционально. Чтобы предоставить вам лучшие услуги, которые вы можете найти здесь, постоянно добавляются дополнительные функции и вносятся изменения, чтобы каждый раз получать удовольствие от каждого путешественника.
Traveloka гордится тем, что предлагает удобные способы оплаты. Вы можете использовать кредитную карту (visa + master card) и PayPal. Наш широкий выбор способов оплаты также обеспечивает дополнительную безопасность. Каждая онлайн-транзакция, совершаемая через нашу систему, защищена авторизованной технологией RapidSSL. Вы будете получать мгновенное уведомление на свою электронную почту о каждой сделке или подтверждении. Если вы выберете оплату наличными, наша MOLPay в 7-Eleven предоставит вам необходимое удобство, а также надежно защищена в системе.
Теперь вы можете произвести оплату бронирования рейса в любом месте и в любой форме.
Наиболее заметное обновление, которое мы продолжаем применять к нашей настольной системе, — это удобные функции, которые мы внедряем на протяжении всего процесса взаимодействия с пользователем. низкие цены на различные авиабилеты, где каждый день вы найдете самые дешевые рейсы; эксклюзивные предложения в приложении, которые продвигают различные предложения, которые вы можете найти, особенно в нашем мобильном приложении Traveloka; реальные отзывы клиентов, дающие четкую информацию об авиакомпаниях, которых вы хотели бы рассмотреть; различные варианты оплаты, которые охватывают не только платежи по кредитной карте, а также специальные скидки на авиабилеты.
Только с Traveloka приобретение авиабилетов станет лучше и лучше
Говоря о поиске, Traveloka предлагает расширенные результаты поиска по каждому элементу в нашем инвентаре как для настольных, так и для мобильных приложений. Мы внедрили сложные и умные алгоритмы, чтобы вы могли легко, быстро и точно одновременно найти нужные авиакомпании, предложения авиабилетов, время в пути или продолжительность поездки. Опять же, Traveloka стремится к удобству, и вы получите лучшие результаты поиска за считанные минуты.
Поскольку наша система предоставляет вам самые лучшие услуги, мы также можем многое предложить, чтобы сделать вашу поездку максимально интересной. Возможно, мы не сможем подготовить для вас красную ковровую дорожку в аэропорту, но мы определенно можем предоставить вам широкий спектр предложений по авиабилетам и рекламных акций, охватывающих не только внутренний регион, но и всю Юго-Восточную Азию и весь мир.
Почему? Что ж, мы хотим, чтобы вы отлично путешествовали вместе со своим рейсом и, конечно же, с нами! Мы никогда не упускаем возможность предложить вам лучшие предложения авиабилетов, и вы также не должны упускать возможность их воспользоваться.Вам нужна еще одна причина для бронирования через Traveloka?
Функции мобильного приложения Traveloka позволяют легко покупать авиабилеты!
Мобильное приложение Traveloka дает вам необходимое удобство при поиске и бронировании авиабилетов.